ฉันรักแปลThe colorimetric protease

ฉันรักแปลThe colorimetric protease assay of caspase-3 provides a simple and convenient means for quantifying the enzyme activity that recognizes the amino acid sequence, DEVD (A synthetic tetrapeptide, (Asp-Glue-Val-Asp), which is the upstream amino acid sequence of the caspase-3 (cleavage site), coupled with p-nitroanilide, which is released upon substrate cleavage. This assay was performed using the commercial kit ApoTarget (Code: KHZ0022: BioSource International, Inc., USA). 1 × 105 cells/mL were treated with IC50 of CLG and incubated for 24 and 48 h while untreated cells acted as control. The cells were lysed by the addition of 50 μL of chilled Cell Lysis Buffer and incubated on ice for 10 min. The resulting cell lysate was centrifuged for 1 min at 10,000 ×g, and the supernatant was collected. Fifty microliters of 2X Reaction Buffer (containing 10 mM DTT) was added to each sample. Then 5 μL of DEVD-pNA (caspase-3 substrate) was added and incubated in the dark at 37°C for 1 h. At the end of the incubation period, the samples were read at 405 nm in a microplate reader (TECAN, SunriseTM, Männedorf, Switzerland). Data was presented as optical density (405 nm; ).

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ฉันรักแปลผลการวิเคราะห์น้ำย่อยสีของ caspase-3 มีวิธีที่ง่ายและสะดวกสำหรับปริมาณเอนไซม์ที่ตระหนักถึงลำดับกรดอะมิโน Devd (A tetrapeptide สังเคราะห์ (ASP-กาว-Val-ASP) ซึ่งเป็นกรดอะมิโนต้นน้ำ . ลำดับกรดของ caspase-3 (เว็บไซต์แตกแยก) ควบคู่กับพี nitroanilide ซึ่งถูกปล่อยออกมาเมื่อความแตกแยกพื้นผิวการทดสอบนี้ได้รับการดำเนินการโดยใช้ชุดการค้า ApoTarget (รหัสสินค้า: KHZ0022: BIOSOURCE International, Inc. , USA). 1 × 105 เซลล์ / มิลลิลิตรได้รับการรักษาที่มีค่า IC50 ของ CLG และบ่มเป็นเวลา 24 และ 48 ชั่วโมงในขณะที่เซลล์ได้รับการรักษาทำหน้าที่เป็นผู้ควบคุม. เซลล์ถูก lysed โดยนอกเหนือจาก 50 ไมโครลิตรแช่เย็นเซลล์สลายบัฟเฟอร์และบ่มบนน้ำแข็งเป็นเวลา 10 นาที. เซลล์ที่เกิด lysate ถูกปั่นเป็นเวลา 1 นาทีที่ 10,000 ×กรัมและใสเก็บ. ห้าสิบ microliters ของ 2X ปฏิกิริยาบัฟเฟอร์ (ที่มี 10 มิลลิ DTT) ถูกบันทึกอยู่ในแต่ละตัวอย่าง. แล้ว 5 ไมโครลิตรของ Devd-PNA (caspase-3 พื้นผิว) ถูกเพิ่มเข้ามา และบ่มในที่มืดที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 1 ชม. เมื่อสิ้นสุดระยะเวลาการบ่มที่กลุ่มตัวอย่างถูกอ่านที่ 405 นาโนเมตรในเครื่องอ่าน microplate (ที่ TECAN, SunriseTM, Mannedorf วิตเซอร์แลนด์) ข้อมูลที่ถูกนำเสนอเป็นความหนาแน่นของออปติคอล (405 นาโนเมตร;)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ฉันรักแปล 7.4 ต่อการศึกษาลักษณะของโปรตีนที่ให้ง่ายและสะดวกหมายถึงปริมาณเอนไซม์ที่จำลำดับกรดอะมิโน devd ( เตตระเพปไทด์สังเคราะห์ ( กาว ASP วาล ASP ) ซึ่งเป็นต้นน้ำของลำดับกรดอะมิโนของการศึกษาลักษณะ ( ตัวเดียวกัน ) ควบคู่กับ p-nitroanilide ซึ่งถูกปล่อยออกมาบนพื้นผิวร่องนมวิธีนี้คือการใช้เครื่องมือเชิงพาณิชย์ apotarget ( รหัส : khz0022 : biosource ระหว่างประเทศ , Inc . , USA ) 1 × 105 เซลล์ / มล. ได้รับการรักษาด้วย ic50 ของ clg บ่มเป็นเวลา 24 และ 48   H ในขณะที่รักษาเซลล์ทำหน้าที่ควบคุม เซลล์ก็ lysed โดยนอกเหนือจาก 50  μผมเย็นจากการสลายเซลล์บัฟเฟอร์ และบ่มแข็ง 10   min .ส่งผลให้เซลล์ lysate คือระดับ 1  มินที่× 10 กรัม และนำกำลังรวบรวม 50 ตัวเลขของบัฟเฟอร์ปฏิกิริยา 2x ( บรรจุ 10 20 มม.   ) ที่ถูกเพิ่มเข้าไปในแต่ละตัวอย่าง แล้ว 5  μ l devd PNA ( การศึกษาลักษณะพื้นผิว ) คือการเพิ่มและบ่มในที่มืดที่อุณหภูมิ 37 องศา C เป็นเวลา 1 ชั่วโมง  ที่จุดสิ้นสุดของระยะเวลา ตัวอย่าง ( อ่าน 405   nm ในพื้นที่ภาคเหนือของประเทศไทย ( ทีแคนอ่าน ,sunrisetm , M และ nnedorf , สวิตเซอร์แลนด์ ) ข้อมูลที่นำเสนอเป็นค่าแสง ( 405   nm ; )