MeasuresPrimary outcomeTelomere len

Measures
Primary outcome
Telomere length was determined using mean terminal restriction fragment (TRF) lengths as described by Lorenzini et al. [10] with minor modifications. Five hundred nanograms of purified DNA isolated from peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) were digested to completion with HinfI and RsaI. Digested samples and size markers (32P-end-labeled 1 Kb Plus DNA ladder and HindIII-cut lambda DNA) were separated in a 0.5% agarose gel. Within the gel, DNA was denatured under alkaline conditions, neutralized, and then hybridized with a 32P-end-labeled oligonucleotide (CCCTAA)4 probe overnight at 55°C. Blots were washed to remove non-specifically bound probe, and visualized using a PhosPhorImager (Molecular Dynamics Sunnyvale, CA). Mean TRF length was calculated as:

Σ(ODi)/Σ(ODi/Li), (1)
where ODi is the total radioactivity above background in interval i and Li is the average length of i in base pairs (bp). The genomic DNA was verified to be of high molecular weight by electrophoresing the undigested DNA samples on 0.5% agarose gels that were subsequently stained with ethidium bromide to show that >99% of the DNA ran at limit-mobility.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

มาตรการผลหลักความยาวของ telomere ได้กำหนดใช้เทอร์มินัลจำกัดหมายถึงความยาวส่วน (สกว.) ตามที่อธิบายไว้โดย Lorenzini et al. [10] มีปรับเปลี่ยนเล็กน้อย Nanograms ห้าร้อยของดีเอ็นเอบริสุทธิ์ที่แยกต่างหากจากเลือดต่อพ่วง mononuclear เซลล์ (PBMCs) ถูกย่อยจนเสร็จสมบูรณ์ด้วย HinfI และ RsaI ต้องการตัวอย่างและขนาดของเครื่องหมาย (32P ตอนท้ายมีป้ายชื่อว่า DNA บวกฐานบันได 1 และแลมบ์ดา HindIII ตัดดีเอ็นเอ) ได้แบ่งในวุ้น agarose 0.5% ภายในเจ ดีเอ็นเอถูก denatured สภาวะด่าง neutralized แล้ว ผสมพันธุ์กับตัว P ที่ 32 สุดท้ายมีป้ายชื่อว่า oligonucleotide (CCCTAA) โพรบ 4 ค้างคืนที่ 55 องศาเซลเซียส กันบล็อทถูกล้างเอาไม่เฉพาะโพรบผูก และ visualized ใช้ PhosPhorImager (โมเลกุล Dynamics Sunnyvale, CA) คำนวณความยาวเฉลี่ยเมธีเป็น:Σ(ODi)/Σ(ODi/Li), (1)radioactivity รวมเหนือพื้นหลังในช่วงจากฉันและ Li ได้ความยาวเฉลี่ยของฉันในฐานคู่ (bp) ดีเอ็นเอ genomic ถูกตรวจสอบจะมีน้ำหนักโมเลกุลสูง โดย electrophoresing ตัวอย่างดีเอ็นเอ undigested บน 0.5% agarose gels ที่ได้มาสีกับโบรไมด์ ethidium ที่ > 99% ของดีเอ็นเอวิ่งที่เคลื่อนไหวจำกัด

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

มาตรการ
หลักผล
ความยาวทาง telomeric ถูกกำหนดโดยใช้ค่าเฉลี่ยส่วนข้อ จำกัด ขั้ว (สกว) ความยาวตามที่อธิบายไว้โดย Lorenzini และคณะ [10] ที่มีการปรับเปลี่ยนเล็กน้อย ห้าร้อยนาโนของดีเอ็นเอบริสุทธิ์ที่แยกได้จากเซลล์ในเลือดโมโนนิวเคลียร์ (PBMCs) ถูกย่อยที่จะเสร็จสิ้นกับ HinfI และ RsaI ตัวอย่างย่อยและเครื่องหมายขนาด (32P-end ที่มีสัญลักษณ์ 1 กิโลไบต์บันไดดีเอ็นเอ Plus และดีเอ็นเอแลมบ์ดา HindIII ตัด) ถูกแยกออกใน 0.5% agarose เจล ภายในเจลดีเอ็นเอเอทิลแอลกอฮอล์ภายใต้เงื่อนไขที่อัลคาไลน์, เป็นกลาง, และไฮบริดแล้วด้วย 32P-end ที่มีสัญลักษณ์ oligonucleotide (CCCTAA) 4 สอบสวนค้างคืนที่ 55 ° C บลถูกล้างเพื่อเอาสอบสวนที่ไม่ใช่เฉพาะที่ถูกผูกไว้และมองเห็นการใช้ PhosPhorImager (Molecular Dynamics ซันนีเวล, แคลิฟอร์เนีย) ความยาวสกวหมายถึงได้รับการคำนวณดังนี้Σ (ODI) / Σ (ODI / Li) (1) ที่ ODI เป็นกัมมันตภาพรังสีทั้งหมดด้านบนพื้นหลังในช่วงเวลาที่ฉันและหลี่คือความยาวเฉลี่ยของฉันในฐานคู่ (bp) ดีเอ็นเอถูกตรวจสอบว่ามีน้ำหนักโมเลกุลสูงโดย electrophoresing ตัวอย่างดีเอ็นเอไม่ได้แยกแยะบน 0.5% agarose เจลที่มีการย้อมต่อมากับโบรไมด์ ethidium แสดงให้เห็นว่า> 99% ของดีเอ็นเอวิ่งที่ขีด จำกัด การเคลื่อนไหว

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

มาตรการหลักผล

เทโลเมียร์ยาว ตัดสินใจใช้หมายถึงส่วนเทอร์มินัลจำกัด ( TRF ) ความยาวตามที่อธิบายไว้โดย lorenzini et al . [ 10 ] มีการปรับเปลี่ยนเล็กน้อย 500 นาโนกรัมของดีเอ็นเอที่แยกได้จากเซลล์ปกติให้เม็ดเลือดขาว ( PBMCs ) ถูกย่อยให้สมบูรณ์ด้วย hinfi และ rsai .ตัวอย่างขนาดย่อยและเครื่องหมาย ( 32p จบป้าย 1 กิโลพร้อมบันไดดีเอ็นเอ - ตัดแลมบ์ดาดีเอ็นเอ ) แยกกัน เจล ( 0.5 % ภายในเจลดีเอ็นเอถูกใช้ภายใต้สภาวะด่างเป็นกลาง แล้วผสมพันธุ์กับ 32p จบข้อความ ซึ่ง ( ccctaa ) 4 โพรบค้างคืนที่ 55 องศา คือล้างเอาเฉพาะไม้ไม่ผูกพันด้วยและการมองเห็นการใช้ phosphorimager ( พลศาสตร์โมเลกุล Sunnyvale , CA ) หมายถึงความยาวของสกว. มีค่าเป็น :

Σ ( ODI ) / Σ ( ODI / หลี่ ) , ( 1 )
ที่ ODI คือรังสีทั้งหมดข้างต้นในช่วงหลัง และหลี่ มีความยาวเฉลี่ยของผมในคู่เบส ( BP ) การตรวจสอบดีเอ็นเอเป็นโมเลกุลสูง โดย electrophoresing ตัวอย่างดีเอ็นเอที่ไม่ถูกย่อยใน 0เจล ( 5% ) และย้อมด้วยคู่โบรไมด์ เพื่อแสดงให้เห็นว่า > 99% ของ ดีเอ็นเอ วิ่งที่ จำกัด การเคลื่อนไหว