2.4.2. Lettuce and semi-dried tomat

2.4.2. Lettuce and semi-dried tomatoes
We used the elution–concentration method for virus recovery from
lettuce and semi-dried tomatoes as described for salad vegetables and
soft fruits in the ISO/TS, 15216-1, 2013 and ISO/TS 15216-2 (2013)
methods.
Each inoculated sample was placed in a 400 mL polypropylene bag
containing a filter compartment and was soaked in 40 mL of elution
buffer (100 mM Tris–HCl, 50 mM glycine, 1% beef extract, pH 9.5) at approximately
60 rpm for 20 min at room temperature.
The rinse fluid was removed via the filter compartment of the bag
and was centrifuged at 8000 ×g for 30 min at 4 °C to pellet the food sample
particles. The pH of the decanted supernatant was adjusted to
7.2 +/− 0.2 by the addition of 5 N HCl under constant swirling. The
neutralized supernatant was supplemented with 10% (w/v) polyethylene
glycol (PEG) 6000 (Sigma-Aldrich, Saint-Quentin-Fallavier,
France), and 0.3 M NaCl, and was then incubated for 2 h at 4 °C. Viruses
were concentrated by centrifuging the solution at 8000 ×g for 30 min at
4 °C. The supernatant was discarded and an additional centrifugation
step was performed at 8000 ×g for 5 min at 4 °C to compact the pellet.
For extraction from lettuce, the pellet was resuspended in 3 mL of
NucliSens® easyMAG™ lysis buffer (bioMérieux, Marcy l'Etoile,
France) for 10 min at room temperature and used for RNA extraction.
For extraction from soft fruits, a further clarification step was required.
The pellet was resuspended in 1 mL of ultra-pure RNase-free
water and vortexed with 1 mL of 1:1 (v/v) chloroform: butanol. The suspension
was then incubated for 5 min at room temperature, and centrifuged
at 8000 ×g for 15 min at 4 °C. The upper aqueous phase containing
viruses was supplemented with NucliSens® easyMAG™ lysis buffer
(bioMérieux) up to 3 mL and used for RNA extraction.

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.4.2 ผักกาดหอมและมะเขือเทศกึ่งแห้งเราใช้วิธีการชะเข้มข้นสำหรับการกู้คืนจากไวรัสผักกาดหอมและมะเขือเทศกึ่งแห้งตามที่อธิบายไว้สำหรับผักสลัดและผลไม้อ่อนในมาตรฐานISO / TS, 15216-1, 2013 และ ISO / TS 15216-2 ( 2013) วิธี. ตัวอย่างเชื้อแต่ละถูกวางไว้ในถุงโพรพิลีนมิลลิลิตร 400 ที่มีช่องกรองและแช่ใน 40 มิลลิลิตรชะบัฟเฟอร์(100 มิลลิ Tris-HCl, glycine 50 มิลลิสารสกัดจากเนื้อวัว 1% ค่า pH 9.5) ที่ประมาณ60 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 20 นาทีที่อุณหภูมิห้อง. ของเหลวล้างถูกลบออกผ่านทางช่องกรองของถุงและได้รับการหมุนเหวี่ยงที่ 8000 ×กรัมเป็นเวลา 30 นาทีที่ 4 ° C ถึงเม็ดตัวอย่างอาหารอนุภาค เป็นกรดเป็นด่างของสารละลาย decanted ปรับ7.2 +/- 0.2 โดยนอกเหนือจาก 5 N HCl ภายใต้การหมุนคงที่ ใสเป็นกลางได้รับการเสริมด้วย 10% (w / v) เอทิลีนไกลคอล(PEG) 6000 (Sigma-Aldrich, Saint-Quentin-Fallavier, ฝรั่งเศส) และ 0.3 M NaCl และถูกบ่มแล้วเป็นเวลา 2 ชั่วโมงที่อุณหภูมิ 4 องศาเซลเซียส ไวรัสมีความเข้มข้นโดยการเหวี่ยงการแก้ปัญหาที่ 8000 ×กรัมเป็นเวลา 30 นาทีที่ 4 ° C สารละลายทิ้งและการหมุนเหวี่ยงเพิ่มเติมขั้นตอนที่ได้รับการดำเนินการที่ 8000 ×กรัมเป็นเวลา 5 นาทีที่ 4 ° C ถึงกระชับเม็ด. สำหรับการสกัดจากผักกาดหอม, เม็ดที่ถูก resuspended ใน 3 มิลลิลิตรNucliSens® easyMAG ™บัฟเฟอร์สลาย (bioM? rieux ร์ซี่ l'Etoile, ฝรั่งเศส) เป็นเวลา 10 นาทีที่อุณหภูมิห้องและใช้ในการสกัดอาร์เอ็นเอ. สำหรับการสกัดจากผลไม้อ่อนที่มีขั้นตอนชี้แจงเพิ่มเติมที่ถูกต้อง. เม็ดที่ถูก resuspended ใน 1 มิลลิลิตร RNase ฟรีบริสุทธิ์ของน้ำและการvortex 1 มิลลิลิตร 1: 1 (v / v) คลอโรฟอร์ม: บิวทานอ ระงับถูกบ่มแล้วเป็นเวลา 5 นาทีที่อุณหภูมิห้องและหมุนเหวี่ยงที่8000 ×กรัมเป็นเวลา 15 นาทีที่ 4 ° C ในช่วงที่มีน้ำบนไวรัสได้รับการเสริมด้วยบัฟเฟอร์สลายNucliSens® easyMAG ™ (bioM? rieux) ถึง 3 มิลลิลิตรและใช้ในการสกัดอาร์เอ็นเอ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.4.2 . ผักกาดหอมและมะเขือเทศกึ่ง
เราใช้สมาธิ ใช้วิธีการกู้คืนจากไวรัส และผักกาดหอมและมะเขือเทศกึ่งแห้ง

ไว้สำหรับสลัดผักผลไม้ที่นิ่มและในมาตรฐาน ISO / TS 15216-1 แห้ง , 2013 และ ISO / TS 15216-2 ( 2013 )

แต่ละตัวอย่าง วิธีการปลูกไว้ในถุงโพลีโพรพิลีน 400 มล.
ที่มีตัวกรองและถูกแช่ในช่อง 40 ml (
บัฟเฟอร์ ( 100 มม. และ 50 มม. หรือ HCl , ไกลซีน , 1 % สารสกัดจากเนื้อ , pH 9.5 ) ประมาณ
60 รอบต่อนาทีนาน 20 นาที ที่อุณหภูมิห้อง
บ้วนของเหลวออกผ่านตัวกรอง ช่องของกระเป๋า
และระดับที่ 8 × G สำหรับ 30 นาทีที่ 4 ° C เม็ดอย่าง
อาหารอนุภาค pH ของรินนำปรับ

7.2 / − 0.2 โดยนอกเหนือจาก 5 N HCl ภายใต้การควบคุมที่ตก
เป็นกลางสูงเสริมด้วย 10% ( w / v )
polyethylene glycol ( PEG ) 6000 ( ซิกม่า Aldrich เซนต์เควนติน fallavier
, ฝรั่งเศส ) , และ 0.3 โมลาร์และถูกบ่ม 2 ชั่วโมงที่อุณหภูมิ 4 องศา ไวรัส
มีความเข้มข้นจากสารโซลูชันที่ 8 × g
30 นาทีที่ 4 ° C น่านถูกทิ้งและมี
3 เพิ่มเติมขั้นตอนดำเนินการโดย 8000 × G สำหรับ 5 นาทีที่ 4 ° C เพื่ออัดเม็ด .
สำหรับสกัดจากผักกาดหอม เม็ดก็ resuspended 3 มล.
nuclisens ® easymag ™การสลายบัฟเฟอร์ ( biom é rieux มาร์ซี่ l'etoile
, ฝรั่งเศส ) 10 นาที ที่อุณหภูมิห้อง และที่ใช้ในการสกัด DNA .
เพื่อสกัดจากผลไม้อ่อน ขั้นตอนชี้แจงเพิ่มเติมถูกต้อง
เม็ดเป็น resuspended ใน 1 มิลลิลิตรของ Ultra บริสุทธิ์เลสฟรี
น้ำและ vortexed 1 มิลลิลิตร 1 : 1 ( v / v ) คลอโรฟอร์ม : บิวทานอล . การระงับ
จากนั้นบ่มนาน 5 นาที ที่อุณหภูมิห้อง และที่ระดับ
ที่ 8000 × G สำหรับ 15 นาทีที่ 4 องศา บนเฟสน้ำที่มีไวรัสที่ถูกเสริมด้วย
nuclisens ® easymag ™การสลายบัฟเฟอร์
( biom é rieux ) ถึง 3 ml และใช้สำหรับการสกัด RNA