[0219] Early การสร้างเซลล์ประสาทใหม

[0219] Early การสร้างเซลล์ประสาทใหม่ was first observed 24 hours after switching to the neural differentiation อาหารเพาะเลี้ยง with the treatments of DHA at a concentration of 1 OµM. See รูป 5A. [0220] Early การสร้างเซลล์ประสาทใหม่ was also, observed 24 hours after treating the hADSCs with N-(R,S)-อัลฟา-ไฮดรอกซีโดดีคาโนอิล-D-อีริโธรสฟิงโกซีน at a concentration of 40µM See รูป
58.

[0221] The hADSCs, in the control wells with no treatment maintained their putative morpohology as large, flat and spread cells on the culture surface, suggesting no obvious การสร้างเซลล์ประสาทใหม่ at this time point See รูป 5C.
[0222] Further, the treatment of N-(R,S)-อัลฟา-ไฮดรอกซีโดดีคาโนอิล-D- อีริโธรสฟิงโกซีน, when compared with DHA, showed moderate effects to promote การสร้างเซลล์ประสาทใหม่. นอกจากนี้, the treatment of hADSCs with N-(R,S)-อัลฟา-ไฮดรอกซีโดดีคาโนอิล• D-อีริโธรสฟิงโกซีน did show obvious neuronal changes in terms of morphology, suggesting that N-(R,S)-อัลฟา-ไฮดรอกซีโดดีคาโนอิล-D-อีริโธรสฟิงโกซีน may have a different การสร้างเซลล์ประสาทใหม่ pathway from that of DHA
[0223] Similarly, แลคโตซิลเซราไมด์ was found to promote การสร้างเซลล์ประสาทใหม่ on hADSCs.

แลคโตซิลเซราไมด์, also known as lactocerebroside, is found in small amounts in most animal tissues, but has a number of significant biological functions, และ is of great importance as the biosynthetic precursor of most of the neural oligoไกลโคsylเซราไมด์s, sulfatides and แกงกลิโอไซด์s.
[0224] แลคโตซิลเซราไมด์ was obtained from Metreya (Cat. #1500) and dissolved in

100% ethanol at a concentration of 9mM. Using the aforementioned procedure as described above for N-(R,S)-อัลฟา-ไฮดรอกซีโดดีคาโนอิล-D-อีริโธรสฟิงโกซีน, แลคโตซิลเซราไมด์ at a

testing concentration of 1 OµM was found to exhibit การสร้างเซลล์ประสาทใหม่ action on hADSCs. See. รูป

50.

[0225] นอกจากนี้, N-ออกทาโนอิล-D-ธรีโอ-สฟิงโกซีน was found to promote การสร้างเซลล์ประสาทใหม่ on hNSCs. N-ออกทาโนอิล-D-ธรีโอ-สฟิงโกซีน was dissolved in 100% ethanol at
11. 7 m M and stored at -80°C as a stock สารละลาย. Human neuronal stem cells were purchased from Millipore® with a genetic modification to constitutively express green fluorescent protein. The hNSCs were cultured, seeded and exposed to N-ออกทาโนอิล-D-ธรีโอ-สฟิงโกซีน according to the procedure described in Example 3.
[0226] N-ออกทาโนอิล-0-ธรีโอ-สฟิงโกซีน at 1 OµM dramatically promoted การสร้างเซลล์ประสาทใหม่ as the hNSCs appeared with shrinking cellular bodies, projecting นิวไรต์ and developing
dendrites. See รูป 5E.

[0227] Moreover, N-ออกทาโนอิล-D-ธรีโอ-สฟิงโกซีน at an experimental concentration of

10 µMis synergetic with 10 µM DHA to further promote การสร้างเซลล์ประสาทใหม่. See. รูป 5G. This is compared to the ชุดควบคุมเชิงบวก group containing DHA alone See รูป 5F, and the negative control group containing no treatment. See รูป 5H.
[0228] นอกจากนี้, it was discovered that N-ออกทาโนอิล-D-ธรีโอ-สฟิงโกซีน is able to synergize with other brain สารอาหาร to dramatically promote การสร้างเซลล์ประสาทใหม่ as early as three hours after application. See. รูป 51, which shows the neuronal morphological changes 3 hours after application of 0.1 µM N-ออกทาโนอิล-D-ธรีโอ-สฟิงโกซีน together with12.5µM CDP-โคลีน and other brain สารอาหาร, including 5 µM DHA, 20 µM ยูริดีน, 25 µM โคเลสเทอรอล, 8.8 µM เรสเวราทรอล, และ 0.3 µM ลูทีน in a purified or natural form. The neuronal morphological changes are shown as appearing more toward oligodendrocyte differentiation, suggesting a myelination function.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

การสร้างเซลล์ประสาทใหม่ต้น [0219] ถูกสังเกตอาการ 24 ชั่วโมงหลังจากสลับอาหารเพาะเลี้ยงประสาทสร้างความแตกต่างกับการรักษาของดีเอชเอที่เข้มข้นของ 1 OµM ครั้งแรก ดูรูปของ 5A การสร้างเซลล์ประสาทใหม่ต้น [0220] ยังมี 24 ชั่วโมงสังเกตหลังจากรักษา hADSCs กับ N-(R,S)-อัลฟา-ไฮดรอกซีโดดีคาโนอิล-D-อีริโธรสฟิงโกซีน ที่ความเข้มข้นของ 40µM ดูรูป58[0221] hADSCs ในบ่อควบคุมด้วยรักษาไม่รักษาของพวกเขา morpohology putative เป็นใหญ่ แบนและแพร่กระจายเซลล์บนพื้นผิว วัฒนธรรมแนะนำการสร้างเซลล์ประสาทใหม่ไม่ชัดเจนในรูปดูจุดนี้เวลาราว 5[0222] เพิ่มเติม N-(R,S)-อัลฟา-ไฮดรอกซีโดดีคาโนอิล-D-อีริโธรสฟิงโกซีน เมื่อเปรียบเทียบกับดีเอชเอ รักษาที่แสดงให้เห็นว่าผลกระทบปานกลางเพื่อส่งเสริมการสร้างเซลล์ประสาทใหม่ นอกจากนี้ ของ hADSCs กับ-(R,S)-อัลฟา-ไฮดรอกซีโดดีคาโนอิล• N D-อีริโธรสฟิงโกซีนไม่ได้แสดงการเปลี่ยนแปลง neuronal ชัดเจนในด้านสัณฐานวิทยา แนะนำว่า N-(R,S)-อัลฟา-ไฮดรอกซีโดดีคาโนอิล-D-อีริโธรสฟิงโกซีน อาจจะแตกต่างกันการสร้างเซลล์ประสาทใหม่ทางเดินจากดีเอชเอ[0223] ในทำนองเดียวกัน แลคโตซิลเซราไมด์พบการสร้างเซลล์ประสาทใหม่บน hADSCs ส่งเสริมแลคโตซิลเซราไมด์ lactocerebroside กัน อยู่ในเงินในเนื้อเยื่อสัตว์มากที่สุด แต่มีหน้าที่สำคัญทางชีวภาพ และมีความสำคัญมากเป็น biosynthetic ของ oligoไกลโคsylเซราไมด์s ประสาท sulfatides และ แกงกลิโอไซด์sแลคโตซิลเซราไมด์ [0224] ได้รับจาก Metreya (Cat. #1500) และละลายใน100% ethanol at a concentration of 9mM. Using the aforementioned procedure as described above for N-(R,S)-อัลฟา-ไฮดรอกซีโดดีคาโนอิล-D-อีริโธรสฟิงโกซีน, แลคโตซิลเซราไมด์ at a testing concentration of 1 OµM was found to exhibit การสร้างเซลล์ประสาทใหม่ action on hADSCs. See. รูป50.[0225] นอกจากนี้, N-ออกทาโนอิล-D-ธรีโอ-สฟิงโกซีน was found to promote การสร้างเซลล์ประสาทใหม่ on hNSCs. N-ออกทาโนอิล-D-ธรีโอ-สฟิงโกซีน was dissolved in 100% ethanol at11. 7 m M and stored at -80°C as a stock สารละลาย. Human neuronal stem cells were purchased from Millipore® with a genetic modification to constitutively express green fluorescent protein. The hNSCs were cultured, seeded and exposed to N-ออกทาโนอิล-D-ธรีโอ-สฟิงโกซีน according to the procedure described in Example 3.[0226] N-ออกทาโนอิล-0-ธรีโอ-สฟิงโกซีน at 1 OµM dramatically promoted การสร้างเซลล์ประสาทใหม่ as the hNSCs appeared with shrinking cellular bodies, projecting นิวไรต์ and developingdendrites. See รูป 5E.[0227] Moreover, N-ออกทาโนอิล-D-ธรีโอ-สฟิงโกซีน at an experimental concentration of10 µMis synergetic with 10 µM DHA to further promote การสร้างเซลล์ประสาทใหม่. See. รูป 5G. This is compared to the ชุดควบคุมเชิงบวก group containing DHA alone See รูป 5F, and the negative control group containing no treatment. See รูป 5H.[0228] นอกจากนี้, it was discovered that N-ออกทาโนอิล-D-ธรีโอ-สฟิงโกซีน is able to synergize with other brain สารอาหาร to dramatically promote การสร้างเซลล์ประสาทใหม่ as early as three hours after application. See. รูป 51, which shows the neuronal morphological changes 3 hours after application of 0.1 µM N-ออกทาโนอิล-D-ธรีโอ-สฟิงโกซีน together with12.5µM CDP-โคลีน and other brain สารอาหาร, including 5 µM DHA, 20 µM ยูริดีน, 25 µM โคเลสเทอรอล, 8.8 µM เรสเวราทรอล, และ 0.3 µM ลูทีน in a purified or natural form. The neuronal morphological changes are shown as appearing more toward oligodendrocyte differentiation, suggesting a myelination function.

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

[0219] ในช่วงต้นของการสร้างเซลล์ประสาทใหม่พบว่า 24 ชั่วโมงแรกหลังจากเปลี่ยนความแตกต่างของระบบประสาทอาหารเพาะเลี้ยงกับการรักษาของดีเอชเอที่ความเข้มข้น 1 OμM ดูรูป 5A [0220] ในช่วงต้นของการสร้างเซลล์ประสาทใหม่ก็ยังตั้งข้อสังเกต 24 ชั่วโมงหลังการรักษา hADSCs กับ ที่ความเข้มข้น40μMดูรูป
58 [0221] hADSCs ในหลุมควบคุมกับการรักษาไม่มีการบำรุงรักษา morpohology สมมุติของพวกเขาที่มีขนาดใหญ่แบนและการแพร่กระจายบนพื้นผิวเซลล์วัฒนธรรมบอกไม่ชัดเจนการสร้างเซลล์ประสาทใหม่จุดในเวลานี้ ดูรูป 5C. [0222] นอกจากนี้การรักษา N- (R, S) - อัลฟา - ไฮดรอกซีโดดีคาโนอิล -D- อีริโธรสฟิงโกซีนเมื่อเทียบกับดีเอชเอ แสดงให้เห็นผลกระทบในระดับปานกลางในการส่งเสริมการสร้างเซลล์ประสาทใหม่ นอกจากนี้การรักษา hADSCs กับ N- (R, S) - อัลฟา - ไฮดรอกซีโดดีคาโนอิล• D- อีริโธรสฟิงโกซีนไม่แสดงการเปลี่ยนแปลงที่เห็นได้ชัดของเซลล์ประสาทในแง่ของลักษณะทางสัณฐานวิทยา ชี้ให้เห็นว่า อาจจะมีความแตกต่างกันการสร้างเซลล์ประสาทใหม่เดินจากที่ของดีเอชเอ[0223] กันแลคโตซิลเซราไมด์พบว่าการส่งเสริมการสร้างเซลล์ประสาทใหม่ใน hADSCs. แลคโตซิลเซราไมด์ยังเป็นที่รู้จักกัน เป็น lactocerebroside จะพบในปริมาณที่น้อยมากที่สุดในเนื้อเยื่อของสัตว์ แต่มีจำนวนของการทำงานทางชีวภาพอย่างมีนัยสำคัญและมีความสำคัญมากเป็นสารตั้งต้นชีวสังเคราะห์ของที่สุดของ Oligo ประสาทไกลโคไลย์เซราไมด์ s, sulfatides และแกงกลิ โอไซด์เอส. [0224] แลคโตซิลเซราไมด์ที่ได้รับจาก Metreya (Cat. # 1500) และละลายในเอทานอล 100% ที่ความเข้มข้น 9mm ใช้วิธีการดังกล่าวตามที่อธิบายไว้ข้างต้น แลคโตซิลเซราไมด์ที่ความเข้มข้นของการทดสอบ 1 OμMพบว่าแสดงการสร้างเซลล์ประสาทใหม่ดำเนินการใน hADSCs เห็น รูป50 [0225] นอกจากนี้, N-ออกทาโนอิล -D- ธ รีโอ - สฟิงโกซีนถูกพบเพื่อส่งเสริมการสร้างเซลล์ประสาทใหม่ใน hNSCs N- ออกทาโนอิล -D- ธ รีโอ - สฟิงโกซีนถูกละลายในเอทานอล 100% ที่11 7 เมตร M และเก็บไว้ที่ -80 องศาเซลเซียสเป็นหุ้นสารละลาย มนุษย์เซลล์ต้นกำเนิดประสาทถูกซื้อมาจากMillipore®ที่มีการดัดแปลงพันธุกรรมกับโปรตีนเรืองแสงสีเขียวด่วน constitutively hNSCs เพาะเลี้ยงเมล็ดและสัมผัสกับ n- ออกทาโนอิล -D- ธ รีโอ - สฟิงโกซีนตามขั้นตอนที่อธิบายในตัวอย่างที่ 3 [0226] N- ออกทาโนอิล -0- ธ รีโอ - สฟิงโกซีนที่ 1 การเลื่อนตำแหน่งอย่างรวดเร็วOμMการสร้างเซลล์ประสาทใหม่เป็น hNSCs ปรากฏตัวขึ้นพร้อมการหดตัวของเซลล์ร่างกายฉายนิวไรต์และการพัฒนาdendrites ดูรูป 5E. [0227] นอกจากนี้ N- ออกทาโนอิล -D- ธ รีโอ - สฟิงโกซีนที่ความเข้มข้นของการทดลอง10 μMisถก 10 ไมครอนดีเอชเอที่จะช่วยส่งเสริมการสร้างเซลล์ประสาทใหม่ เห็น รูป 5G นี้เมื่อเทียบกับชุดควบคุมเชิงบวกกลุ่มที่มีดีเอชเอคนเดียวดูรูป 5F และกลุ่มควบคุมเชิงลบที่มีไม่มีการรักษา . ดูรูป 5H [0228] นอกจากนี้มันก็พบว่า N-ออกทาโนอิล -D- ธ รีโอ - สฟิงโกซีนสามารถ synergize กับสมองอื่น ๆ สารอาหารไปอย่างรวดเร็วส่งเสริมการสร้างเซลล์ประสาทใหม่ เร็วที่สุดเท่าที่สามชั่วโมงหลังจากการประยุกต์ใช้ เห็น รูปที่ 51 ซึ่งแสดงให้เห็นการเปลี่ยนแปลงทางสัณฐานวิทยาประสาท 3 ชั่วโมงหลังจากการประยุกต์ใช้ 0.1 ไมครอน N- ออกทาโนอิล -D- ธ รีโอ - สฟิงโกซีนด้วยกันwith12.5μM CDP- โคลีนและสมองสารอาหารอื่น ๆ , รวมทั้ง 5 ไมครอน DHA 20 ไมครอนยูริดีน, 25 ไมครอนโคเลสเทอรอล, 8.8 ไมครอนเรสเวราทรอล, และ 0.3 ไมครอนลูทีนในรูปแบบที่บริสุทธิ์หรือธรรมชาติ การเปลี่ยนแปลงทางสัณฐานวิทยาของเซลล์ประสาทจะปรากฏเป็นที่ปรากฏขึ้นต่อความแตกต่างของโอลิโกเดนโดรไซต์แนะนำฟังก์ชั่น myelination

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

[ 0219 ] ต้นการสร้างเซลล์ประสาทใหม่เป็นครั้งแรกที่สังเกตตลอด 24 ชั่วโมงหลังจากเปลี่ยนความแตกต่างอาหารเพาะเลี้ยงประสาทกับการรักษาของ DHA ที่ความเข้มข้น 1 O µเมตร เห็นรูป 5A [ 0220 ] ต้นการสร้างเซลล์ประสาทใหม่ยังพบ 24 ชั่วโมงหลังการรักษา hadscs กับ N ( r ,ด้วย ) - อัลฟา - ไฮดรอกซีโดดีคาโนอิล - D - อีริโธรสฟิงโกซีนความเข้มข้น 40 µ M ดูรูป

[ 58 ] 0221 hadscs ในบ่อที่ไม่มีการควบคุมรักษา morpohology ซึ่งตนเป็นใหญ่ แบน และแพร่กระจายเซลล์ผิววัฒนธรรม บอกไม่ชัดการสร้างเซลล์ประสาทใหม่เวลานี้เห็นรูป 5 จุด .
[ 0222 ] เพิ่มเติม การรักษาของ เอ็น - ( R , S ) - อัลฟา - ไฮดรอกซีโดดีคาโนอิล - D - อีริโธรสฟิงโกซีนเมื่อเทียบกับ DHA พบปานกลาง ผลการส่งเสริมการสร้างเซลล์ประสาทใหม่ . นอกจากนี้ , การรักษาของ hadscs กับ N ( r ,ด้วย ) - อัลฟา - ไฮดรอกซีโดดีคาโนอิล• D - อีริโธรสฟิงโกซีนแสดงให้เห็นชัดเจนและการเปลี่ยนแปลงในแง่ของการศึกษาชี้ให้เห็นว่า N ( r , s ) - อัลฟา - ไฮดรอกซีโดดีคาโนอิล - D - อีริโธรสฟิงโกซีนอาจมีแตกต่างกันการสร้างเซลล์ประสาทใหม่ทางเดินจากที่ของ DHA
[ 0223 ] เช่นเดียวกันแลคโตซิลเซราไมด์พบเพื่อส่งเสริมการสร้างเซลล์ประสาทใหม่บน hadscs

แลคโตซิลเซราไมด์ , ยังเป็นที่รู้จัก lactocerebroside ถูกพบในปริมาณน้อยในเนื้อเยื่อสัตว์มากที่สุด แต่ยังหมายเลขของฟังก์ชันทางชีวภาพที่สำคัญและเป็นสำคัญเป็นสารตั้งต้นของการผลิตมากที่สุดของระบบประสาท โอลิโกไกลโคซิลเซราไมด์ S และ S .
[ sulfatides แกงกลิโอไซด์ 0224 ] แลคโตซิลเซราไมด์ได้จาก metreya ( แมว # 1500 ) และละลาย

100 % เอทานอลความเข้มข้น 9 มม. โดยใช้วิธีการดังกล่าวตามที่อธิบายไว้ข้างต้นสำหรับ n - R ,ด้วย ) - อัลฟา - ไฮดรอกซีโดดีคาโนอิล - D - อีริโธรสฟิงโกซีนแลคโตซิลเซราไมด์ , ที่

ทดสอบความเข้มข้นของ 1 O µ M พบว่ามีการกระทำการสร้างเซลล์ประสาทใหม่ hadscs . เห็น รูป

50

[ ] นอกจากนี้ 0225 ,- ออกทาโนอิล - D - ธรีโอ - สฟิงโกซีนพบเพื่อส่งเสริมการสร้างเซลล์ประสาทใหม่บน hnscs . - ออกทาโนอิล - D - ธรีโอ - สฟิงโกซีนละลายได้ในเอทานอล 100% ที่
11 7 M M และเก็บที่อุณหภูมิ - 80 องศา C เป็นสารละลาย Stockมนุษย์และสเต็มเซลล์ ซื้อมาจากมิลลิ®กับการปรับเปลี่ยนพันธุกรรมใน constitutively แสดงออกโปรตีนเรืองแสงสีเขียว การเพาะเลี้ยง hnscs , seeded และตาก - ออกทาโนอิล - D - ธรีโอ - สฟิงโกซีนตามขั้นตอนที่อธิบายไว้ในตัวอย่างที่ 3