n order to reduce sample numbers, P

n order to reduce sample numbers, PCR amplicons from replicates of sediment were pooled before loading on DGGE. Prior to pooling, a DGGE was run on the individual samples to ensure acceptable repro- ducibility (results not shown). DGGE was performed with 8% (w/v) acrylamide gel which contained a linear chemical gradient ranging from 35% to 60% denaturant (100% denaturant 7 M urea, and 40% formamide). Similar amounts of PCR products were loaded into the gel and electrophoresed in 1× TAE buffer at 60 °C and 60 V for 16 h, using a Dcode Universal Mutation Detection System (Bio-Rad Laborato- ries, Richmond Calif). After electrophoresis, the gel was stained with silver nitrate modified from Sanguinetti et al. (1994) and the image obtained with a scanner.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

n เพื่อลดจำนวนตัวอย่าง amplicons PCR จาก replicates ตะกอนถูกพูก่อนการโหลดบน DGGE ก่อนร่วมกัน การ DGGE ถูกเรียกใช้บนตัวอย่างแต่ละเพื่อให้ยอมรับ repro-ใน (ไม่แสดงผล) DGGE ได้ดำเนินการ ด้วย 8% (w/v) อะคริลาไมด์เจลซึ่งอยู่เชิงเคมีไล่ระดับสีตั้งแต่ 35%-60% denaturant (ยูเรีย 7 M denaturant 100% และ formamide 40%) จำนวนผลิตภัณฑ์ PCR คล้ายถูกโหลดลงในเจ และ electrophoresed ในบัฟเฟอร์ TAE × 1 ที่ 60 ° C และ 60 V สำหรับ 16 h ใช้ Dcode สากลระบบกลายพันธุ์การตรวจสอบ (Bio-ล้อ Laborato - ries, Calif ริชมอนด์) หลังจากอิ เจถูกย้อม ด้วยซิลเวอร์ไนเตรทที่แก้ไขจาก Sanguinetti et al. (1994) และภาพที่ได้ ด้วยเครื่องสแกน

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

n เพื่อลดตัวเลขตัวอย่าง amplicons PCR จากซ้ำของตะกอนถูกรวบรวมก่อนที่จะโหลด DGGE ก่อนที่จะร่วมกันเป็น DGGE ได้รับการทำงานในแต่ละตัวอย่างเพื่อให้แน่ใจว่า ducibility เพื่อจุดประยอมรับ (ผลไม่แสดง) DGGE ได้ดำเนินการกับ 8% (w / v) เจลริลาไมด์ที่มีการไล่ระดับสีเคมีเชิงเส้นตั้งแต่ 35% ถึง 60% denaturant (100% denaturant 7 มยูเรียและ 40% formamide) จำนวนที่ใกล้เคียงของผลิตภัณฑ์พีซีอาร์ถูกโหลดลงในเจลและ electrophoresed ใน 1 × TAE บัฟเฟอร์ที่ 60 องศาเซลเซียสและ 60 V สำหรับ 16 ชั่วโมงโดยใช้ Dcode สากลระบบตรวจจับการกลายพันธุ์ (Bio-Rad Ries Laborato- ริชมอนด์แคลิฟอร์เนีย) หลังจาก electrophoresis, เจลที่ถูกย้อมด้วยสีซิลเวอร์ไนเตรทดัดแปลงมาจาก Sanguinetti et al, (1994) และภาพที่ได้รับกับสแกนเนอร์

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

เพื่อที่จะลดจำนวนตัวอย่างเชื้อจาก amplicons ซ้ำก่อนการรวมตะกอนในการทดลอง . ก่อนว่าจะมีการทดลองใช้ในตัวอย่างแต่ละเพื่อให้แน่ใจว่ายอมรับ repro - ducibility ( ผลลัพธ์ไม่แสดง ) การทดลองแบ่งเป็น 8 % ( w / v ) อะคริลาไมด์เจล ซึ่งมีเส้นทางไล่ระดับตั้งแต่ 35% ถึง 60% ทำให้ผิดธรรมชาติ ( 100% ทำให้ผิดธรรมชาติ 7 M ยูเรีย และ 40% ฟอร์มาไมด์ ) ปริมาณที่คล้ายคลึงกันของผลิตภัณฑ์ทั้งหมดจะถูกโหลดลงในเจลและ electrophoresed ในบัฟเฟอร์เท 1 × 60 ° C และ 60 V 16 ชั่วโมง โดยใช้ระบบตรวจจับการ dcode สากล ( Bio - Rad laborato ries , ริชมอนด์ CALIF ) หลังจากอิเล็กเจลเปื้อนซิลเวอร์ไนเตรท ที่ดัดแปลงจาก sanguinetti et al . ( 1994 ) และภาพที่ได้จากสแกนเนอร์