Total RNA from 100 mg of fresh-weig

Total RNA from 100 mg of fresh-weight rice seedlings
was isolated by grinding with mortar and pestle in liquid
nitrogen until a fine powder appeared and using Trizol
reagent (Invitrogen) according to the manufacturer’s
instructions. DNA-free total RNA (5 μg) from different
treatments was used for first-strand cDNA synthesis in a
20-μl reaction volume containing 2.5 U of avian myeloblastosis
virus reverse transcriptase XL (TaKaRa Bio Inc.,
Dalian, China) and 2.5 μM random primer. Polymerase
chain reaction (PCR) was performed using 2 μl of a 20-
fold dilution of the cDNA, 10 pmol of each oligonucleotide
primer, and 1 U of Taq polymerase (TaKaRa Bio
Inc., Dalian, China) in a 25-μl reaction volume.
cDNA was amplified by PCR using the following
primers: for rice APXb (accession number
AB053297), forward (5′-CCAAGTGACAAAGCCCT
CAT-3′) and reverse (5′-AAGGCGCAAAATAC
AAATCG-3′), amplifying a 198-bp fragment; for
CATB (accession number NM_001065170), forward
(5′-GCTTGCTTTCTGCCCAGCGATAAT-3′) and reverse
(5′-AAATAGTTTGGGCCAAGACGGTGC-3′),
amplifying a 120-bp fragment; for Cu/Zn-SOD (accession
number L36320), forward (5′-ATTCCAAACCA
GCAGGAGTCGC-3′) and reverse (5′-CCTTTCC
GGCAGGATTGTAGTG-3′), amplifying a 288-bp fragment;
for Mn-SOD (accession number
NM_001061730), forward (5′-ATCTGGATGGGTGT
GGCTAGCTTT-3′) and reverse (5′-AGTACGCATGC
TCCCAGACATCAA-3′), amplifying a 140-bp fragment;
for 18S rRNA (accession number AK059783),
forward (5′-TACCGTCCTAGTCTCAACCA-3′) and
reverse (5′-AGAACATCTAAGxGGCATCACA-3′),
amplifying a 451-bp fragment. To standardize the
results, the relative abundance of 18S rRNA was determined
and used as the internal standard.
The cycle numbers of the PCRs were adjusted for
each gene to obtain visible bands in agarose gels. Aliquots
of the PCRs were loaded on 2.0 % agarose gels with the
use of ethidium bromide. Specific amplification products
of the expected size were observed, and their identities
were confirmed by sequencing.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

อาร์เอ็นเอรวมจากกล้าไม้สดน้ำหนักข้าว 100 มก.ถูกแบ่งแยกบดด้วยโกร่งในของเหลวไนโตรเจนจนปรากฏเป็นฝุ่นละอองและใช้ Trizolรีเอเจนต์ (Invitrogen) ตามของผู้ผลิตคำแนะนำ อาร์เอ็นเอดีเอ็นเอฟรีรวม (5 μg) จากความแตกต่างกันรักษาใช้สำหรับสังเคราะห์ cDNA แรกสาระการ20 μl ปฏิกิริยาไดรฟ์ข้อมูล 2.5 U ของนก myeloblastosisไวรัสกลับ transcriptase XL (TaKaRa ชีวภาพ Inc.ต้าเหลียน จีน) และสุ่มรองพื้น 2.5 μM พอลิเมอเรสทำปฏิกิริยาลูกโซ่ (PCR) โดยใช้ μl 2 ของ 20 แบบพับเจือจางของ cDNA, 10 pmol ของ oligonucleotide แต่ละสีรองพื้น และพอลิเมอเรส U Taq 1 (TaKaRa ไบโออิงค์ ต้าเหลียน จีน) ในไดรฟ์ข้อมูลปฏิกิริยา 25-μlcDNA ถูกขยาย โดย PCR โดยใช้ต่อไปนี้ไพรเมอร์: สำหรับข้าว APXb (เลขทะเบียนAB053297), ไปข้างหน้า (5′-CCAAGTGACAAAGCCCTCAT-3′) และย้อน (5′-AAGGCGCAAAATACAAATCG-3′), มือส่วน 198 bp สำหรับส่งต่อ CATB (เลขทะเบียน NM_001065170),(5′-GCTTGCTTTCTGCCCAGCGATAAT-3′) และย้อนกลับ(5′-AAATAGTTTGGGCCAAGACGGTGC-3′),ส่วน 120 bp มือ สำหรับ Cu/Zn-SOD (ภาคยานุวัติหมายเลข L36320), ไปข้างหน้า (5′-ATTCCAAACCAGCAGGAGTCGC-3′) และย้อน (5′-CCTTTCCGGCAGGATTGTAGTG-3′), มือส่วน 288 bpสำหรับ Mn-SOD (เลขทะเบียนNM_001061730), ไปข้างหน้า (5′-ATCTGGATGGGTGTGGCTAGCTTT-3′) และย้อน (5′-AGTACGCATGCTCCCAGACATCAA-3′), มือส่วน 140 bpสำหรับ 18S rRNA (เลขทะเบียน AK059783),ไปข้างหน้า (5′-TACCGTCCTAGTCTCAACCA-3′) และย้อนกลับ (5′-AGAACATCTAAGxGGCATCACA-3′),มือส่วน 451-bp เพื่อกำหนดมาตรฐานการผล มาย 18S กำหนด rRNA ญาติและใช้เป็นมาตรฐานภายในจำนวนรอบ PCRs ถูกปรับปรุงแต่ละยีนสามารถมองเห็นวงใน agarose เจ Aliquotsของ PCRs ถูกโหลดบน agarose 2.0% ด้วยการใช้ของโบรไมด์ ethidium ขยายเฉพาะผลิตภัณฑ์ขนาดที่คาดสุภัค และข้อมูลเฉพาะตัวของพวกเขาได้ยืนยันตามลำดับ

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

อาร์เอ็นเอจากทั้งหมด 100
มิลลิกรัมของต้นกล้าข้าวสดน้ำหนักที่แยกได้โดยการบดด้วยโกร่งบดยาในของเหลวไนโตรเจนจนเป็นผงละเอียดปรากฏตัวขึ้นและใช้
Trizol
สาร (Invitrogen)
ตามของผู้ผลิตคำแนะนำ ดีเอ็นเออาร์เอ็นเอฟรีรวม (5 ไมโครกรัม)
ที่แตกต่างกันจากการรักษาที่ถูกนำมาใช้สำหรับการสังเคราะห์ยีนแรกสาระในปริมาณปฏิกิริยา
20 ไมโครลิตรที่มี 2.5 U ของ myeloblastosis
นกไวรัสกลับtranscriptase XL (Takara Bio
อิงค์ต้าเหลียนประเทศจีน) และ 2.5 ไมครอน ไพรเมอร์แบบสุ่ม โพลีเมอปฏิกิริยาลูกโซ่ (PCR) ได้รับการดำเนินการโดยใช้ 2 ไมโครลิตรของ 20 เจือจางพับของ cDNA 10 pmol ของแต่ละ oligonucleotide ไพรเมอร์และ 1 U โพลิเมอร์ Taq (Takara Bio อิงค์ต้าเหลียนประเทศจีน) ในปฏิกิริยา 25 ไมโครลิตร ปริมาณ. cDNA ถูกขยายโดยวิธี PCR โดยใช้ต่อไปนี้ไพรเมอร์: ข้าว APXb (เข้าจำนวนAB053297) ไปข้างหน้า (5'-CCAAGTGACAAAGCCCT CAT-3 ') และย้อนกลับ (5'-AAGGCGCAAAATAC AAATCG-3') ขยาย 198-bp ส่วน; สำหรับCATB (เข้าจำนวน NM_001065170) ไปข้างหน้า(5'-GCTTGCTTTCTGCCCAGCGATAAT-3) และย้อนกลับ(5'-AAATAGTTTGGGCCAAGACGGTGC-3 ') ขยายส่วน 120 bp; สำหรับ Cu / Zn-SOD (เข้าจำนวนL36320) ไปข้างหน้า (5'-ATTCCAAACCA GCAGGAGTCGC-3) และย้อนกลับ (5'-CCTTTCC GGCAGGATTGTAGTG-3 ') ขยายส่วน 288 bp; สำหรับ Mn-SOD (เข้าจำนวนNM_001061730) ไปข้างหน้า (5'-ATCTGGATGGGTGT GGCTAGCTTT-3) และย้อนกลับ (5'-AGTACGCATGC TCCCAGACATCAA-3 ') ขยายส่วน 140 bp; สำหรับ 18S rRNA (เข้าจำนวน AK059783) ไปข้างหน้า (5'-TACCGTCCTAGTCTCAACCA- 3) และย้อนกลับ(5'-AGAACATCTAAGxGGCATCACA-3 ') ขยายส่วน-451 bp เพื่อสร้างมาตรฐานผลอุดมสมบูรณ์ญาติของ 18S rRNA ถูกกำหนดและใช้เป็นมาตรฐานภายใน. หมายเลขวงจรของ PCRs ถูกปรับในแต่ละยีนจะได้รับวงดนตรีที่มองเห็นได้ในเจลagarose aliquots ของ PCRs ถูกโหลดใน 2.0% agarose เจลที่มีการใช้งานของโบรไมด์ethidium ผลิตภัณฑ์เฉพาะการขยายขนาดที่คาดว่าจะถูกตั้งข้อสังเกตและตัวตนของพวกเขาได้รับการยืนยันโดยลำดับ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

อาร์เอ็นเอรวมจาก 100 มิลลิกรัมของน้ำหนักสด
ต้นกล้าข้าวแยกบดด้วยครกและสากในไนโตรเจนเหลว
จนผงก็ได้ปรากฏตัวขึ้นและใช้ trizol
Reagent ( Invitrogen ) ตามคำแนะนำของ
ผู้ผลิต ดีเอ็นเออาร์เอ็นเอทั้งหมดฟรี ( 5 μกรัม ) จากการรักษาที่แตกต่างกัน
ใช้ก่อนเกลียวดีเอ็นเอการสังเคราะห์ใน
20 - μ L ปฏิกิริยาปริมาณที่มี 2.5 U ของสัตว์ปีก myeloblastosis
ไวรัส reverse transcriptase XL ( ทาการะ ไบโอ อิงค์ ,
Dalian , จีน ) และ 2.5 μ M แบบรองพื้น ปฏิกิริยาลูกโซ่ ( PCR ) โดยใช้
2 μลิตร 20 -
พับการเจือจางของ cDNA , 10 pmol แต่ละซึ่ง
primer และ 1 U ของแท็กการ ( ทาคาระไบ
อิงค์ , Dalian , จีน ) ใน 25 - μปฏิกิริยาปริมาณ L .
cDNA ถูกขยายโดยวิธี PCR โดยใช้
วิธีต่อไปนี้ :ข้าว apxb ( เข้าเบอร์
ab053297 ) ส่งต่อ ( 5 ’ - ccaagtgacaaagccct
cat-3 School ) และกลับ ( 5 ’ - aaggcgcaaaatac
aaatcg-3 School ) , ขยายขนาด 198 BP ;
catb ( เข้าเบอร์ nm_001065170 ) ส่งต่อ
( 5 ’ - ’ gcttgctttctgcccagcgataat-3 ) และย้อนกลับ
( 5 - aaatagtttgggccaagacggtgc-3 ’ดูแล )
ขยายขนาด 120 บีพี เพราะทองแดง / สังกะสี SOD ( หมายเลขภาคยานุวัติ
l36320 ) ส่งต่อ ( 5 ’ - attccaaacca
gcaggagtcgc-3 School ) และกลับ ( 5 ’ - cctttcc
ggcaggattgtagtg-3 School ) , ขยายขนาด 288 BP ;
สำหรับ MN SOD ( หมายเลขภาคยานุวัติ
nm_001061730 ) ส่งต่อ ( 5 ’ - atctggatgggtgt
ggctagcttt-3 School ) และกลับ ( 5 ’ - agtacgcatgc
tcccagacatcaa-3 School ) , ขยายขนาด 140 BP ;
สำหรับ 18S rRNA ( หนังสือเลขที่ ak059783 )
ไปข้างหน้า ( 5 ’ - ’ taccgtcctagtctcaacca-3 )
ย้อนกลับ ( 5 ’ - ’
agaacatctaagxggcatcaca-3 )ขยายขนาด 451 BP . มาตรฐาน
ผลความอุดมสมบูรณ์สัมพัทธ์ของ 18S rRNA ตั้งใจ
และใช้เป็นมาตรฐานภายใน
รอบหมายเลขของ pcrs กำลังปรับ
แต่ละยีนที่จะได้รับวงดนตรีที่มองเห็นได้ในกาโรสเจล เฉยๆ
ของ pcrs ถูกโหลดใน 2.0% , เจลกับ
ใช้ทิเดียมโบรไมด์ . ผลิตภัณฑ์ที่เฉพาะเจาะจง (
ของคาดขนาดที่พบ ,และอัตลักษณ์ของพวกเขาได้รับการยืนยันโดยลำดับ
.