Materials and methods2.1. Animal ho

Materials and methods
2.1. Animal housing and semen collection
Individual semen samples designated for short-term storage and cryopreservation were collected by abdom- inal massage [25] from turkeys of the BUT Big-6 line (British United Turkeys, Limited, Chester, England) during a routine collection of semen for artificial in- semination. Immediately after semen collection, sam- ples were diluted (1:2) in Poultry Semen Extender (Ovodyl, IMV Technologies, I’Aigle, France). Semen designated for acrosin isolation was routinely collected during the reproductive period and pooled. Toms were maintained under standard husbandry conditions at the Turkey Testing Farm in Frednowy, Poland. Feed and water were available ad libitum.
Approval from the Animal Experiments Committee in Olsztyn, Poland was obtained before starting any experiments.
2.2. Semen storage
2.2.1. Short-term storage (liquid storage)
Immediately after semen collection individual se- men samples were diluted (1:2) in Poultry Semen Ex- tender (Ovodyl, IMV Technologies). Samples of ex- tended semen were stored for 48 h under refrigeration (4 °–7 °C). Semen samples (N 11) were shaken in aerobic conditions with an agitator (JW Electronic, Warsaw, Poland). Aliquots were removed from each sample 2.5, 24, and 48 h after semen collection for the measurements of semen quality parameters, such as computer-aided-sperm analysis (CASA), amidase ac-
tivity of sperm suspension, amidase activity of sperm extract, and seminal plasma Western blot analysis of spermatozoa extract and seminal plasma protein.
2.2.2. Cryopreservation
The cryopreservation procedure was performed ac- cording to the method developed by Tselutin et al. [26]. Samples of extended semen (N 6) were placed on ice and after 5 min an equal volume of 12% dimethylac- etamide (DMA) in Ovodyl (IMV Technologies) was added (final concentration of DMA was 6%). After 1 min of equilibration on ice, sperm suspensions were aspirated to a 100- L tip and small drops were pipetted directly into liquid nitrogen. The pellets were quickly thawed by placing one pellet into a prewarmed glass tube and incubated in a water bath at 55 °C for 10 sec. Aliquots were removed from fresh semen after the addition of DMA and after cryopreservation. In each sample, quality parameters were analyzed (CASA, ami- dase activity of sperm suspension, amidase activity of sperm extract and seminal plasma, Western blot anal- ysis of spermatozoa extract and seminal plasma pro- tein).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

วัสดุและวิธีการ2.1. คอลเลกชันสัตว์ที่อยู่อาศัยและน้ำเชื้อน้ำอสุจิแต่ละตัวอย่างที่กำหนดสำหรับระยะสั้นเก็บและช่วยรวบรวม โดย abdom inal นวด [25] จากไก่งวงแต่การใหญ่ 6 บรรทัด (อังกฤษสหไก่งวง จำกัด เชสเตอร์ อังกฤษ) ระหว่างชุดกิจวัตรประจำวันของน้ำเชื้อสำหรับประดิษฐ์ใน semination ทันทีหลังจากเก็บน้ำเชื้อ sam ples ถูกเจือจาง (1:2) ในสัตว์ปีกน้ำเชื้อ Extender (Ovodyl เอ็มเทคโนโลยี I'Aigle ฝรั่งเศส) น้ำเชื้อที่กำหนดสำหรับ acrosin แยกเป็นประจำรวบรวมช่วงสืบพันธุ์ และพู ทอมส์ถูกเก็บรักษาไว้ภายใต้เงื่อนไขมาตรฐานเลี้ยงที่ฟาร์มไก่งวงการทดสอบ Frednowy โปแลนด์ อาหารและน้ำมี ad libitumอนุมัติจากคณะกรรมการทดลองสัตว์ใน Olsztyn โปแลนด์ได้รับก่อนที่จะเริ่มการทดลองใด ๆ2.2. น้ำเชื้อเก็บ2.2.1. ระยะสั้นเก็บ (เก็บของเหลว)ทันทีหลังจากเก็บน้ำเชื้อคน se แต่ละตัวอย่างถูกเจือจาง (1:2) ในสัตว์ปีกน้ำเชื้อเช่น - การชำระเงิน (Ovodyl เอ็มเทคโนโลยี) ตัวอย่างของแนวโน้มอดีต-น้ำเชื้อที่ถูกเก็บไว้สำหรับ 48 ชั่วโมงภายใต้ความเย็น (4 °-7 ° C) ตัวอย่างน้ำอสุจิ (N 11) ถูกเขย่าในสภาพแอโรบิกด้วยตัวกวน (เจดับบลิวอิเล็กทรอนิกส์ วอร์ซอ โปแลนด์) Aliquots ถูกเอาออกจากแต่ละตัวอย่าง 2.5, 24 และ 48 ชั่วโมงหลังจากเก็บน้ำเชื้อสำหรับการวัดพารามิเตอร์คุณภาพน้ำเชื้อ เช่นวิเคราะห์คอมพิวเตอร์ aided สเปิร์ม (CASA), ac amidase-tivity ระงับสเปิร์ม กิจกรรม amidase ของสเปิร์มสารสกัด และพลาสม่าบรรลุการวิเคราะห์น้าตะวันตกแยกตัวอสุจิและบรรลุพลาสมาโปรตีน2.2.2. ช่วยขั้นตอนเพื่อช่วยแก้ไขดำเนิน ac-cording เป็นวิธีพัฒนาโดย Tselutin et al. [26] ตัวอย่างของน้ำเชื้อขยาย (N 6) ถูกวางไว้บนน้ำแข็ง และเพิ่มปริมาณเท่ากับ 12% dimethylac-etamide (DMA) ใน Ovodyl (เอ็มเทคโนโลยี) หลังจาก 5 นาที (ความเข้มข้นสุดท้ายของ DMA คือ 6%) หลังจาก 1 นาทีของ equilibration บนน้ำแข็ง ฟโรสเปิร์มได้สำลักให้ทิป 100 ลิตร และหยดเล็ก ๆ ถูก pipetted โดยตรงลงในไนโตรเจนเหลว เม็ดเตรียม โดยวางเม็ดหนึ่งลงในหลอดแก้ว prewarmed อย่างรวดเร็ว และได้รับการกกในอ่างน้ำที่ 55 ° C สำหรับ 10 วินาที Aliquots ถูกเอาออกจากน้ำเชื้อสดหลัง จากการเพิ่มของ DMA และ หลังเพื่อช่วย ในแต่ละอย่าง ถูกวิเคราะห์พารามิเตอร์ที่มีคุณภาพ (CASA, ami dase กิจกรรมของสเปิร์มระงับ กิจกรรม amidase ของสารสกัดจากสเปิร์มและบรรลุพลาสมา เวสเทิร์นซับทวาร ysis สารสกัดจากตัวอสุจิและพลาสม่าบรรลุ pro-เทียน)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

วัสดุและวิธีการ
2.1 ที่อยู่อาศัยของสัตว์น้ำอสุจิและคอลเลกชัน
ตัวอย่างน้ำอสุจิส่วนบุคคลที่กำหนดไว้สำหรับการจัดเก็บข้อมูลระยะสั้นและการเก็บรักษาที่ถูกเก็บรวบรวมโดย abdom- นวด Inal [25] จากไก่งวงของ แต่บิ๊ก 6 สาย (บริติชสหไก่งวง, Limited เชสเตอร์ประเทศอังกฤษ) ในระหว่างชุดประจำ ของน้ำอสุจิสำหรับ semination หเทียม ทันทีหลังจากที่คอลเลกชันน้ำอสุจิ Ples ตัวอย่างทดสอบไว้เจือจาง (1: 2) ในสัตว์ปีกน้ำเชื้อ Extender (Ovodyl, IMV Technologies, I'Aigle ฝรั่งเศส) น้ำอสุจิที่กำหนดไว้สำหรับการแยก acrosin ถูกเก็บรวบรวมเป็นประจำในช่วงระยะเวลาการสืบพันธุ์และรวบรวม ทอมส์ได้รับการดูแลภายใต้เงื่อนไขการเลี้ยงมาตรฐานฟาร์มทดสอบตุรกีใน Frednowy, โปแลนด์ ฟีดและน้ำได้เต็มที่ใช้ได้.
ได้รับอนุมัติจากคณะกรรมการการทดลองในสัตว์ใน Olsztyn, โปแลนด์ได้รับก่อนที่จะเริ่มการทดลองใด ๆ .
2.2 การเก็บรักษาน้ำเชื้อ
2.2.1 การจัดเก็บข้อมูลระยะสั้น (การเก็บรักษาของเหลว)
ทันทีหลังจากที่น้ำอสุจิคอลเลกชันของแต่ละบุคคลตัวอย่างซีเอ็ดคนถูกเจือจาง (1: 2) ในสัตว์ปีกน้ำเชื้ออดีตซื้อหลักทรัพย์ (Ovodyl, IMV เทคโนโลยี) ตัวอย่างของอดีตมีแนวโน้มที่น้ำอสุจิที่เก็บไว้เป็นเวลา 48 ชั่วโมงภายใต้เครื่องทำความเย็น (4 ° -7 ° C) ตัวอย่างน้ำเชื้อ (N 11) ถูกเขย่าแอโรบิกในสภาพที่มีปลุกปั่น (เจดับบลิวอิเล็กทรอนิกส์วอร์ซอประเทศโปแลนด์) aliquots ถูกถอดออกจากแต่ละตัวอย่าง 2.5, 24, และ 48 ชั่วโมงหลังการเก็บน้ำเชื้อสำหรับการตรวจวัดค่าพารามิเตอร์ของคุณภาพน้ำเชื้อเช่นการวิเคราะห์คอมพิวเตอร์ช่วย-สเปิร์ม (CASA) amidase ทํา
ประสิทธิภาพในการระงับอสุจิกิจกรรมของสารสกัดจากสเปิร์ม amidase, และเชื้อพลาสม่าตะวันตกวิเคราะห์เปื้อนของสารสกัดจากสเปิร์มและโปรตีนในพลาสมาน้ำเชื้อ.
2.2.2 เก็บรักษา
ขั้นตอนการเก็บรักษาที่ได้ดำเนินการไปแสงตามวิธีการที่พัฒนาโดย Tselutin et al, [26] ตัวอย่างของน้ำอสุจิขยาย (N 6) ถูกวางไว้บนน้ำแข็งและหลังจากนั้น 5 นาทีปริมาตรที่เท่ากันของ etamide dimethylac- 12% (DMA) ใน Ovodyl (IMV เทคโนโลยี) ถูกบันทึก (ความเข้มข้นสุดท้ายของ DMA เป็น 6%) หลังจาก 1 นาทีของการปรับสมดุลบนน้ำแข็งแขวนลอยสเปิร์มที่จะสำลักปลาย 100 L และหยดเล็ก ๆ ปิเปตโดยตรงลงในไนโตรเจนเหลว เม็ดมาละลายอย่างรวดเร็วโดยการวางหนึ่งเม็ดลงในหลอดแก้ว prewarmed และบ่มในอ่างน้ำที่ 55 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 10 วินาที aliquots ถูกถอดออกจากน้ำเชื้อสดหลังจากที่นอกเหนือจาก DMA และหลังการเก็บรักษา ในแต่ละตัวอย่างพารามิเตอร์ที่มีคุณภาพที่ได้มาวิเคราะห์ (CASA กิจกรรม Dase ami- ของการระงับอสุจิกิจกรรม amidase ของสารสกัดจากสเปิร์มและพลาสม่าน้ำเชื้อดวงตะวัน ysis anal- ของสารสกัดจากสเปิร์มและเชื้อพลาสม่าโปร Tein)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

วัสดุและวิธีการ2.1 . สัตว์ที่อยู่อาศัยและการรีดเก็บน้ำเชื้อตัวอย่างน้ำเชื้อแต่ละเขตสำหรับการจัดเก็บในระยะสั้นและการเก็บรักษามีจำนวน abdom - inal นวด [ 25 ] จากไก่งวงของแต่ big-6 บรรทัด ( อังกฤษ United ไก่งวง , จำกัด , เชสเตอร์ , อังกฤษ ) ในชุดประจำของน้ำอสุจิสำหรับเทียม - semination . ทันทีหลังจากเก็บน้ำเชื้อ แซม - ples ถูกเจือจาง ( 1 : 2 ) ในสัตว์ปีก ( ovodyl Extender น้ำเชื้อ IMV , เทคโนโลยี i"aigle , ฝรั่งเศส ) น้ำเชื้อเขตแยก acrosin ถูกตรวจเก็บในช่วงระยะเวลาการเจริญพันธุ์และพู . ทอมยังคงภายใต้เงื่อนไขมาตรฐานการเลี้ยงที่ฟาร์มไก่งวง การทดสอบใน frednowy , โปแลนด์ ให้อาหารและน้ำหยาบโฆษณาที่มีอยู่ได้รับอนุมัติจากคณะกรรมการสัตว์ทดลองใน Olsztyn , โปแลนด์ ได้ก่อนที่จะเริ่มการทดลอง2.2 . เก็บน้ำอสุจิ2.2.1 . กระเป๋าสั้นการเก็บ ( ของเหลว )ทันทีหลังจากการรีดเก็บน้ำเชื้อของผู้ชายแต่ละคน เซ - จำนวน ( 1 : 2 ) ในสัตว์ปีกเจือจางน้ำเชื้อ EX - ประกวดราคา ( เทคโนโลยี IMV ovodyl ) ตัวอย่างของอดีตมีน้ำเชื้อที่ถูกเก็บไว้เป็นเวลา 48 ชั่วโมงภายใต้ความเย็น ( 4 °– 7 ° C ) ตัวอย่างน้ำอสุจิ ( 11 ) สั่นสะเทือนในเงื่อนไขแอโรบิกที่มีใบกวน ( JW อิเล็กทรอนิกส์ , วอร์ซอ , โปแลนด์ ) เฉยๆถูกถอดออกจากแต่ละตัวอย่าง 2.5 , 24 และ 48 ชั่วโมงหลังจากการรีดเก็บน้ำเชื้อสำหรับการวัดพารามิเตอร์คุณภาพน้ำเชื้ออสุจิ เช่น การใช้คอมพิวเตอร์ช่วยวิเคราะห์ ( CASA ) amidase AC -tivity อสุจิ amidase ระงับกิจกรรมของอสุจิ สารสกัด และน้ำอสุจิ Western blot การวิเคราะห์แยกพลาสมาโปรตีนอสุจิและอสุจิ2.2.2 . การเก็บรักษาขั้นตอนการเก็บรักษาคือใช้ cording AC - วิธีการที่พัฒนาโดย tselutin et al . [ 26 ] ตัวอย่างน้ำเชื้อ ( 6 ) ถูกวางไว้บนน้ำแข็งและหลัง 5 นาทีปริมาณเท่ากับ 12 % dimethylac - etamide ( DMA ) ใน ovodyl ( เทคโนโลยี ( IMV ) เพิ่มความเข้มข้นสุดท้าย DMA 6 % ) หลังจาก 1 นาที equilibration บนน้ำแข็งแขวนลอยอสุจิถูกลมไป 100 - ปลาย และ อนุภาคขนาดเล็ก pipetted โดยตรงลงในไนโตรเจนเหลว เม็ดได้อย่างรวดเร็วละลายโดยการวางหนึ่งเม็ดเป็น prewarmed ท่อแก้วและบ่มในน้ำอาบที่ 55 องศา C เป็นเวลา 10 วินาที เฉยๆถูกถอดออกจากน้ำเชื้อสดหลังจากเติม DMA และหลังจากเชื้อ ในแต่ละตัวอย่าง พารามิเตอร์คุณภาพวิเคราะห์ ( คาซา อามิ - เดสกิจกรรมของสเปิร์มแขวน amidase กิจกรรมของสารสกัดอสุจิและน้ำอสุจิ , Western blot ทวารหนัก - ysis ของอสุจิที่แยกและน้ำอสุจิ Pro - เทียน )