Anaerobic biotransformation of DNAN

Anaerobic biotransformation of DNAN was performed with
resting cells of Enterobacter strain DM7 (our lab), Shewanella oneidensis
strain MR-1 (ATCC 700550), Pseudomonas fluorescens I–C
(NRRL B-59269) and Burkholderia cepacia strain JS872 (ATCC
700450). Cells were grown anaerobically, in LB (MR-1, I–C and
JS872) or M9 minimal medium (Maniatis et al., 1982) plus
10 mM NaNO3 (DM7), in the presence of 50 lM DNAN. The cells
were harvested at late exponential phase, washed twice in sterile
double-distilled water (ddH2O), and resuspended at an optical density
(at 600 nm) of 3.3 in ddH2O containing 200 lM DNAN. The
reactions were performed in triplicate in serum bottles that were
sealed and made anaerobic by briefly degassing (1 min) and then
purging with argon for 10 min at 5 psi. The bottles were incubated
at 25 C in the dark. Samples were collected at selected times (1–
22 h) for analysis of DNAN and its products as described below.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ไม่ใช้ biotransformation ของ DNAN ทำด้วยอย่างเซลล์ต้องใช้ Enterobacter DM7 (ของห้องปฏิบัติการ), Shewanella oneidensisสายพันธุ์นาย-1 (ATCC 700550), Pseudomonas fluorescens ฉัน – C(NRRL B-59269) และต้องใช้ cepacia Burkholderia JS872 (ATCC700450) มีการเติบโตเซลล์ anaerobically ปอนด์ (นาย-1 -C และJS872) หรือ M9 กลางน้อยที่สุด (Maniatis และ al., 1982) บวก10 มม. NaNO3 (DM7), ในต่อหน้าของ 50 lM DNAN เซลล์ได้เก็บเกี่ยวในช่วงปลายระยะเนน ล้างสองครั้งในกอซน้ำกลั่นคู่ (ddH2O), และ resuspended ที่มีความหนาแน่นออปติคอล(ที่ 600 nm) ของ 3.3 ใน ddH2O ประกอบด้วย 200 lM DNAN ที่ปฏิกิริยาดำเนินใน triplicate ในเซรั่มขวดที่ปิดผนึก และการไม่ใช้สั้น ๆ degassing (1 นาที) แล้วล้าง ด้วยอาร์กอนใน 10 นาทีที่ 5 psi ขวดได้ incubatedที่ 25 C ในมืด ตัวอย่างรวบรวมที่เลือกเวลา (1-22 h) สำหรับการวิเคราะห์ DNAN และผลิตภัณฑ์ตามที่อธิบายไว้ด้านล่าง

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

เปลี่ยนรูปทางชีวภาพของ Anaerobic DNAN ได้ดำเนินการกับ
เซลล์พักผ่อนของสายพันธุ์ Enterobacter DM7 (ห้องปฏิบัติการของเรา) Shewanella oneidensis
ความเครียด MR-1 (ATCC 700550) Pseudomonas fluorescens I-C
(NRRL B-59269) และ Burkholderia cepacia ความเครียด JS872 (ATCC
700450) เซลล์ที่ถูกปลูกแบบไม่ใช้อากาศใน LB (MR-1 I-C และ
JS872) หรือ M9 กลางน้อยที่สุด (Maniatis et al., 1982) บวก
10 มิลลิ NaNO3 (DM7) ในการปรากฏตัวของ 50 LM DNAN เซลล์
ที่ถูกเก็บเกี่ยวในระยะปลายชี้แจงล้างครั้งที่สองในการฆ่าเชื้อ
น้ำสองครั้งที่กลั่น (ddH2O) และ resuspended ความหนาแน่นแสง
(ที่ 600 นาโนเมตร) ของ? 3.3 ใน ddH2O มี LM 200 DNAN
ปฏิกิริยาที่ได้ดำเนินการในเพิ่มขึ้นสามเท่าในขวดเซรั่มที่ถูก
ปิดผนึกและทำแบบไม่ใช้ออกซิเจนโดย degassing สั้น ๆ (1 นาที) แล้ว
กวาดล้างกับอาร์กอนเป็นเวลา 10 นาทีที่ 5 ปอนด์ต่อตารางนิ้ว ขวดถูกบ่ม
ที่อุณหภูมิ 25 องศาเซลเซียสในที่มืด เก็บตัวอย่างครั้งเลือกที่ (1-
22 ชั่วโมง) สำหรับการวิเคราะห์ DNAN และผลิตภัณฑ์ของ บริษัท ตามที่ระบุไว้ด้านล่าง

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การไม่ใช้ dnan แสดงกับ
อัมพิลของ Enterobacter dm7 สายพันธุ์ ( ห้องทดลอง ) shewanella oneidensis
เมื่อย mr-1 ( ATCC 700550 ) , Pseudomonas fluorescens ฉัน– C
( Burkholderia cepacia สายพันธุ์ NRRL b-59269 ) และ js872 ( ATCC
700450 ) เซลล์ปลูกพ ในปอนด์ ( mr-1 ฉัน– C
js872 ) หรือ M9 minimal medium ( maniatis et al . , 1982 ) บวก
10 มม. ( dm7 NaNO3 )ในการแสดงตนของ 50 กล. dnan . เซลล์เก็บในช่วงระยะ exponential

คู่หมัน , ล้างสองครั้งในน้ำกลั่น ( ddh2o ) และ resuspended ที่ซิกแซ็ก
( 600 nm ) ของ  3.3 ddh2o ที่มี 200 กล. dnan .
ปฏิกิริยาแสดงทั้งสามใบในขวดเซรั่มที่ผนึกไว้โดยคร่าว ๆและ
ใช้ขจัด ( 1 นาที ) จากนั้น
ชำระล้างด้วยอาร์กอนสำหรับ 10 นาทีที่ 5 psi . ขวดที่ถูกบ่ม
ที่ 25  องศาเซลเซียสในที่มืด ตัวอย่างที่เลือกเวลา ( 1 )
2 H ) สำหรับการวิเคราะห์ dnan และผลิตภัณฑ์ของ บริษัท ตามที่อธิบายไว้ด้านล่าง