To investigate whether RGS19 is aff

To investigate whether RGS19 is affected by inhibition of Notch
signaling, Western blotting and flow cytometry using an RGS19-
specific Ab were used. As shown in Fig. 2B and C, decreased levels
of RGS19 was detected using both techniques. Using Western blotting,two
bands appeared as specific bands forRGS19 that were later
verified by specific gene silencing (Fig. 4B). The band with higher
molecular weight, which corresponded to approximately 29 kDa,
was considered phosphorylated RGS19 (Feigin and Malbon, 2007).
LPS treatment increased the band intensity of the phosphorylated
RG19 and GSI treatment decreased its level. LPS stimulation or GSI
treatment did not affect the level of the unphosphorylated RGS19
(Fig. 2B). Using intracellular staining,the significant decreased level
of RGS19 was observed. Because intracellular staining cannot distinguish
between phosphorylated and unphosphorylated form,this
decrease in the staining may indicate that antibody used in our
study recognizes a phosphorylated form better (Fig. 2C). When the
mRNA levels of rgs19 were compared using qPCR, LPS treatment
gradually decreased the rgs19 mRNA level, but no differences were
detected between the DAPT and DMSO treatments (Fig. 2D).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

การตรวจสอบว่า RGS19 จะมีผลต่อการยับยั้งรอยตามปกติ เวสเทิร์น blotting วิธีและขั้นตอนเซลล์โดยใช้ RGS19 เป็น-ใช้เฉพาะ Ab ตามที่แสดงใน Fig. 2B และ C ลดระดับของ RGS19 พบโดยใช้เทคนิคทั้งสอง ใช้เวส blotting วิธี 2วงปรากฏเป็น forRGS19 วงเฉพาะที่ภายหลังตรวจสอบ โดยเฉพาะยีน silencing (Fig. 4B) วงมีสูงน้ำหนักโมเลกุล ที่ corresponded การ kDa ประมาณ 29ถือเป็น phosphorylated RGS19 (Feigin และ Malbon, 2007)รักษา LPS เพิ่มความเข้มของการ phosphorylated วงการRG19 และ GSI ลดระดับ LPS กระตุ้นหรือ GSIรักษาไม่ได้ส่งผลกระทบต่อระดับของ unphosphorylated RGS19(Fig. 2B) ใช้ intracellular ย้อมสี ระดับลดลงอย่างมีนัยสำคัญของ RGS19 ถูกตรวจสอบ เนื่องจาก intracellular ย้อมสีไม่สามารถแยกแยะความแตกต่างระหว่าง phosphorylated และ unphosphorylated แบบฟอร์ม นี้ลดลงในการย้อมสีอาจบ่งชี้ว่า แอนติบอดีที่ใช้ของเราศึกษารู้จัก phosphorylated ฟอร์มดี (Fig. 2C) เมื่อการระดับ mRNA ของ rgs19 ถูกเปรียบเทียบโดยใช้ qPCR, LPS รักษาค่อย ๆ ลดระดับ mRNA rgs19 แต่ความแตกต่างไม่ได้ตรวจรักษา (Fig. 2D) ระหว่าง DAPT และ DMSO

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

เพื่อตรวจสอบว่า RGS19 รับผลกระทบจากการยับยั้งการ Notch
สัญญาณซับตะวันตกและไหล cytometry ใช้ RGS19-
เฉพาะ Ab ถูกนำมาใช้ ดังแสดงในรูป 2B และ C
ลดระดับของRGS19 ตรวจพบโดยใช้เทคนิคทั้งสอง ใช้วิธี western blotting
สองวงดนตรีวงดนตรีที่ปรากฏเฉพาะforRGS19
ที่ได้รับภายหลังการตรวจสอบโดยสมรยีนที่เฉพาะเจาะจง(รูป. 4B) วงดนตรีที่มีความสูงน้ำหนักโมเลกุลซึ่งตรงกับประมาณ 29 กิโลดาลตันได้รับการพิจารณาphosphorylated RGS19 (Feigin และ Malbon 2007). การรักษา LPS เพิ่มขึ้นความเข้มวงของ phosphorylated RG19 และการรักษา GSI ลดลงระดับ กระตุ้น LPS หรือ GSI การรักษาไม่ได้ส่งผลกระทบต่อระดับของ unphosphorylated RGS19 (รูป. 2B) ใช้การย้อมสีเซลล์อย่างมีนัยสำคัญในระดับที่ลดลงของ RGS19 พบว่า เพราะการย้อมสีเซลล์ไม่สามารถแยกแยะความแตกต่างระหว่างรูปแบบและ phosphorylated unphosphorylated นี้ลดลงในการย้อมสีอาจบ่งบอกถึงแอนติบอดี้ที่เรานำมาใช้ในการศึกษาตระหนักถึงรูปแบบphosphorylated ดีขึ้น (รูป. 2C) เมื่อระดับ mRNA ของ rgs19 ถูกนำมาเปรียบเทียบโดยใช้ qPCR รักษา LPS ค่อยๆลดลงในระดับ mRNA rgs19 แต่ไม่มีความแตกต่างถูกตรวจพบระหว่างDAPT และการรักษา DMSO (รูป. 2D)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

เพื่อตรวจสอบว่า rgs19 ได้รับผลกระทบโดยการยับยั้งบาก
การส่งสัญญาณ , Western blotting และการไหล ( ใช้ rgs19 -
เฉพาะ AB มาใช้ ดังแสดงในรูปที่ 2B และ C ลดลง ระดับของ rgs19
ถูกตรวจพบการใช้เทคนิคทั้งสอง การใช้ Western blotting สองวงปรากฏเป็นวงเฉพาะ

forrgs19 ที่ต่อมายืนยันโดยเฉพาะยีน silencing ( ภาพ 4B ) วงดนตรีที่มีสูงกว่า
น้ำหนักโมเลกุลประมาณ 29 กิโลดาลตัน ซึ่งสอดคล้องกับ , rgs19
ถือว่าฟอสฟอรีเลเตต ( feigin และ malbon , 2007 ) .
หล่อลื่นรักษาเพิ่มวงดนตรีเข้มของฟอสฟอรีเลเตต
rg19 มีค่าการลดลงในระดับของ สเปรย์กระตุ้น หรือ GSI
รักษาไม่มีผลต่อระดับของ unphosphorylated rgs19
( รูปที่ 2B ) การใช้เซลล์ staining ) อย่างมีนัยสำคัญทางสถิติที่ระดับ
ลดลงของ rgs19 ถูกสังเกต เพราะการไม่สามารถแยกความแตกต่างระหว่างรูปแบบและการ unphosphorylated ฟอสฟอรีเลเตต

ในการลดลงนี้อาจบ่งชี้ว่า แอนติบอดีที่ใช้ในการศึกษาของเรา
รู้จักฟอสฟอรีเลเตตฟอร์มดีกว่า ( รูปที่ 2 ) เมื่อเปรียบเทียบระดับ mRNA ของ rgs19

ค่อยๆใช้ qpcr , LPs รักษาระดับของ rgs19 ลดลง แต่ไม่แตกต่างกันคือ
ตรวจพบระหว่างการรักษาและ dapt DMSO ( รูปที่ 2 )