Brazzein is an intensely sweet-tast

Brazzein is an intensely sweet-tasting protein with high water solubility, heat stability, and taste properties resembling those of carbohydrate sweeteners. In the present study, we describe the expression of the synthetic gene encoding brazzein, a sweet protein in the yeast Kluyveromyces lactis. The synthetic brazzein gene was designed based on the biased codons of the yeast, so as to optimize its expression, as well as on the extracellular secretion for expression in an active, soluble form. The synthesized brazzein gene was cloned into the secretion vector pKLAC2, which contains the yeast prepropeptide signal from the Saccharomycescerevisiae α-mating factor. The constructed plasmid pKLAC2-des-pE1M-brazzein was introduced into the yeast K. lactis GG799. The yeast transformants were cultured for high-yield secretion of the recombinant des-pE1M-brazzein in YPGal medium for 96 h at 30 °C. The expressed recombinant des-pE1M-brazzein was purified by CM-Sepharose column chromatography and approximately 104 mg/L was obtained. The purity and conformational state of the recombinant des-pE1M-brazzein were confirmed using SDS–PAGE, HPLC, and circular dichroism. The identity of the recombinant protein was also confirmed by N-terminal amino acid analysis and taste testing. The purified recombinant des-pE1M-brazzein had an intrinsic sweetness in its minor form, approximately 2130 times sweeter than sucrose on a weight basis. These results demonstrate that the K. lactis expression system is useful for producing the recombinant brazzein in active form at a high yield with attributes useful in the food industry.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

Brazzein เป็นโปรตีนละลายน้ำ ความร้อนเสถียรภาพ และคุณสมบัติรสชาติคล้ายของคาร์โบไฮเดรตสารให้ความหวานเป็นความหวานชิม ในการศึกษาปัจจุบัน เราอธิบายค่าของยีนสังเคราะห์เข้า brazzein โปรตีนยีสต์ Kluyveromyces lactis หวาน ยีนสังเคราะห์ brazzein ถูกออกแบบตาม codons biased ยีสต์ เพื่อเพิ่มประสิทธิภาพของนิพจน์ เช่นเป็นบนหลั่ง extracellular สำหรับนิพจน์ในแบบที่ใช้งานอยู่ ละลายน้ำ ยีนสังเคราะห์ brazzein เป็นโคลนเป็นการหลั่งเวกเตอร์ pKLAC2 ซึ่งประกอบด้วยสัญญาณ prepropeptide ยีสต์จากปัจจัยαผสมพันธุ์ Saccharomycescerevisiae Plasmid สร้าง pKLAC2-เดส์-pE1M-brazzein ถูกนำมาใช้เป็นยีสต์ lactis คุณ GG799 Transformants ยีสต์มีอ่างสำหรับหลั่งสูงผลตอบแทนของแบบ recombinant des-pE1M-brazzein ใน YPGal สำหรับ h 96 ที่ 30 องศาเซลเซียส การแสดง recombinant des-pE1M-brazzein ที่บริสุทธิ์ โดย CM-Sepharose คอลัมน์ chromatography และกล่าวประมาณ 104 mg/L ความบริสุทธิ์และการ recombinant des-pE1M-brazzein รัฐ conformational ถูกยืนยันโดยใช้ SDS-หน้า HPLC และวงกลม dichroism ลักษณะเฉพาะของ recombinant โปรตีนได้รับการยืนยันยังวิเคราะห์กรดอะมิโน N-เทอร์มินัลและทดสอบรสชาติ ที่บริสุทธิ์ recombinant des-pE1M-brazzein มีความหวานหอมที่ intrinsic แบบรอง หวานกว่าประมาณ 2130 ครั้งกว่าซูโครสตามน้ำหนัก ผลเหล่านี้แสดงให้เห็นที่คุณ ระบบ lactis นิพจน์มีประโยชน์สำหรับการผลิต brazzein recombinant ในแบบฟอร์มที่ใช้งานอยู่ที่ผลตอบแทนสูงมีคุณลักษณะที่มีประโยชน์ในอุตสาหกรรมอาหาร

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

Brazzein เป็นโปรตีนเข้มข้นรสชาติหวานด้วยการละลายน้ำสูงเสถียรภาพความร้อนและคุณสมบัติรสชาติคล้ายของสารให้ความหวานคาร์โบไฮเดรต ในการศึกษาครั้งนี้เราจะอธิบายการแสดงออกของยีนสังเคราะห์เข้ารหัส brazzein, โปรตีนหวานใน lactis Kluyveromyces ยีสต์ ยีน brazzein สังเคราะห์ได้รับการออกแบบบนพื้นฐานของ codons ลำเอียงของยีสต์เพื่อที่จะเพิ่มประสิทธิภาพของการแสดงออกเช่นเดียวกับที่หลั่งสารสำหรับการแสดงออกในการใช้งานในรูปแบบที่ละลายน้ำได้ ยีน brazzein สังเคราะห์ถูกโคลนเข้าไป pKLAC2 หลั่งเวกเตอร์ที่มีสัญญาณยีสต์ prepropeptide จากปัจจัยα-ผสมพันธุ์ Saccharomycescerevisiae สร้างพลาสมิด pKLAC2-des-pE1M-brazzein ถูกนำเข้ายีสต์เค lactis GG799 transformants ยีสต์เพาะเลี้ยงเพื่อการหลั่งผลตอบแทนสูงของ recombinant des-pE1M-brazzein ใน YPGal สื่อกลางในการ 96 ชั่วโมงที่ 30 ° C. แสดง recombinant des-pE1M-brazzein บริสุทธิ์โดย CM-Sepharose โคคอลัมน์และประมาณ 104 mg / L ที่ได้รับ ความบริสุทธิ์และโครงสร้างของรัฐ recombinant des-pE1M-brazzein ได้รับการยืนยันโดยใช้ SDS-PAGE, HPLC และ dichroism วงกลม ตัวตนของโปรตีนนอกจากนี้ยังได้รับการยืนยันโดยการวิเคราะห์ n-ขั้วกรดอะมิโนและการทดสอบรสชาติ บริสุทธิ์ recombinant des-pE1M-brazzein มีความหวานที่แท้จริงในรูปแบบเล็ก ๆ น้อย ๆ ของมันประมาณ 2,130 ครั้งความหวานมากกว่าน้ำตาลซูโครสบนพื้นฐานน้ำหนัก ผลการศึกษานี้แสดงให้เห็นว่าระบบการแสดงออก lactis K. เป็นประโยชน์สำหรับการผลิต brazzein recombinant ในรูปแบบการใช้งานที่ให้ผลตอบแทนสูงที่มีคุณลักษณะที่มีประโยชน์ในอุตสาหกรรมอาหาร

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

บราซเซอินเป็นโปรตีนมีกรดอะมิโนที่รสชาติหวานเข้มข้น น้ำสูงเสถียรภาพความร้อนและรสชาติ คุณสมบัติคล้ายพวกคาร์โบไฮเดรตสารให้ความหวาน ในการศึกษา เราอธิบายการแสดงออกของยีนสังเคราะห์โปรตีนบราซเซอินการเข้ารหัสหวานในยีสต์ kluyveromyces lactis . ยีนบราซเซอินสังเคราะห์ถูกออกแบบบนพื้นฐานของอคติซิสของยีสต์เพื่อเพิ่มประสิทธิภาพของการแสดงออก ตลอดจนการหลั่งภายนอกสำหรับการแสดงออกในรูปแบบที่ใช้งาน , . ยีนสังเคราะห์บราซเซอินโคลนเข้าหลั่งเวกเตอร์ pklac2 ซึ่งมียีสต์ prepropeptide สัญญาณจาก saccharomycescerevisiae แอลฟาปัจจัยที่ผสมพันธุ์ การสร้างพลาสมิด pklac2-des-pe1m-brazzein ใช้เป็นยีสต์ K . lactis gg799 .สำหรับการเพาะเลี้ยงยีสต์พลาสมิดพาหะสูงของ des-pe1m-brazzein ใน ypgal ขนาดกลางสำหรับ 96 H ที่ 30 องศา สามารถแสดง des-pe1m-brazzein บริสุทธิ์โดยคอลัมน์โครมาโทกราฟีซม. เกี่ยวข้องประมาณ 104 มิลลิกรัมต่อลิตรได้ . ความบริสุทธิ์และสภาพโครงสร้างของโปรตีนที่เป็น des-pe1m-brazzein ยืนยันใช้ SDS - หน้า , HPLC ,และการปิดฉลาก . เอกลักษณ์ของโปรตีนรีคอมบิแนนท์ยังยืนยันโดยการวิเคราะห์กรดอะมิโน กรดอะมิโน และทดสอบรสชาติ โปรตีนบริสุทธิ์ des-pe1m-brazzein มีความหวานตามธรรมชาติ ในรูปแบบของผู้เยาว์ หวานกว่าซูโครสบนพื้นฐานน้ำหนักประมาณ 2130 ครั้ง ผลลัพธ์เหล่านี้แสดงให้เห็นว่า K .ระบบการแสดงออกทางสีหน้า lactis เป็นประโยชน์สำหรับการผลิตรีคอมบิแนนท์บราซเซอินในรูปแบบใช้งานที่ผลตอบแทนสูง ด้วยคุณลักษณะที่เป็นประโยชน์ในอุตสาหกรรมอาหาร