Despite its clinical importance, ju

Despite its clinical importance, just a few studies involving
the fish S. dysgalactiae have been published till now
[8,11,19,20]. Thus, little information is available about the outbreaks
and epidemiology of such pathogen in farmed fish.
Molecular typing methods permit typing of strains of the same
bacterial species that appear indistinguishable by conventional
methods, such as antibiogram or serotyping. Pulsed-field gel
electrophoresis (PFGE) is considered as a gold standard typing
method [21]. The bacterial whole genome is investigated by
PFGE to assess genetic relationships among bacterial isolates.
PFGE is useful in studying a short-term as well as a long-term
epidemiological follow-up [21]. Biased sinusoidal field gel electrophoresis
(BSFGE) is a modified PFGE [8]. Other molecular
method, such as the sequencing of tuf gene has also been allowed
the analysis of intraspecies sequence variations that
reached up to 2.6% in streptococci [22].
The most prevalent molecular assays applied for genetic
analysis of fish pathogen S. dysgalactiae are sequencing of
housekeeping genes [5,7,8,11,20,23], PFGE and BSFGE profiles
[2,8,11]. In this study, BSFGE analysis of SmaI was employed
to establish distinct genetic profiles for S. dysgalactiae
strains collected from a variety of moribund fishes and
geographical areas. In addition, the partial sequencing of tuf
gene and the phylogeny of the obtained sequences were investigated
to evaluate the applicability of these techniques in
future epidemiological studies.
Material and methods
Bacterial isolates
Twenty clinical S. dysgalactiae isolates were used in the current
study. All S. dysgalactiae isolates were isolated from lesions in
the caudal peduncle or the kidney of moribund fishes.
Geographic origin and fish species from which S. dysgalactiae
isolates were retrieved are shown in Table 1. The reference
strain S. dysgalactiae subsp. dysgalactiae ATCC43078 was included
for comparative purpose.
Growth conditions and DNA extraction
All S. dysgalactiae isolates were aerobically grown on Todd
Hewitt agar (THA; Difco, Sparks, MD, USA) plates and incubated
at 37 C for 24 h. Stock cultures were maintained frozen
at 80 C in Todd-Hewitt broth (Difco, Sparks, MD, USA).
Lancefield serotyping C [24] was confirmed by using PASTOREX
Strep (Bio-Rad, Marnes-la-Coquette, France). The identification
of the S. dysgalactiae isolates was performed by using
API 20 STREPT (bioMerieux, Marcy-l’Etoile, France).
Genomic DNA was performed from bacterial colonies by

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

แม้ มีความสำคัญทางคลินิก เกี่ยวข้องกับการศึกษาเพียงไม่กี่ปลา S. dysgalactiae มีการเผยแพร่จนถึงปัจจุบัน[8,11,19,20] . ดังนั้น เล็กน้อยมีข้อมูลเกี่ยวกับการแพร่ระบาดและระบาดวิทยาของการศึกษาดังกล่าวในปลา farmedวิธีพิมพ์โมเลกุลอนุญาตพิมพ์ของสายพันธุ์เดียวกันสายพันธุ์แบคทีเรียที่จำแนกไม่ได้ปรากฏ โดยทั่วไปวิธี เช่น antibiogram serotyping ฟิลด์สูงเจelectrophoresis (PFGE) ถือเป็นมาตรฐานทองคำพิมพ์วิธี [21] จีโนมทั้งแบคทีเรียถูกตรวจสอบโดยPFGE เพื่อประเมินความสัมพันธ์ทางพันธุกรรมระหว่างเชื้อแบคทีเรียที่แยกได้PFGE มีประโยชน์ในการเรียนแบบระยะสั้นเป็นระยะยาวเป็นความติดตามผล [21] ลำเอียงฟิลด์ sinusoidal เจ electrophoresis(BSFGE) เป็น PFGE แก้ไข [8] โมเลกุลอื่น ๆวิธี เช่นลำดับของยีน tuf ยังได้รับอนุญาตการวิเคราะห์รูปแบบ intraspecies ลำดับที่ถึงถึง 2.6% ใน streptococci [22]Assays โมเลกุลแพร่หลายมากที่สุดที่ใช้สำหรับทางพันธุกรรมวิเคราะห์ของปลาการศึกษา S. dysgalactiae มีลำดับเบสของยีนที่ทำความสะอาด [5,7,8,11,20,23] PFGE และ BSFGE ค่า[2,8,11] ถูกจ้างวิเคราะห์ SmaI BSFGE ในการศึกษานี้การสร้างโพรไฟล์พันธุกรรมแตกต่างกันสำหรับ S. dysgalactiaeสายพันธุ์ที่รวบรวมจากความหลากหลายของปลา moribund และพื้นที่ทางภูมิศาสตร์ นอกจากนี้ ลำดับบางส่วนของ tufสอบสวนยีนและ phylogeny ของลำดับที่ได้รับการประเมินความเกี่ยวข้องของเทคนิคเหล่านี้ในการศึกษาความในอนาคตวัสดุและวิธีการแบคทีเรียที่แยกได้20 คลินิก S. dysgalactiae แยกใช้ในปัจจุบันศึกษา ทั้งหมด S. dysgalactiae แยกถูกแยกต่างหากจากได้ในcaudal peduncle หรือไตของปลา moribundสายพันธุ์ต้นกำเนิดและปลาจาก S. dysgalactiae ที่ทางภูมิศาสตร์แยกถูกดึงมาแสดงในตารางที่ 1 การอ้างอิงต้องใช้ S. dysgalactiae ถั่ว dysgalactiae ATCC43078 ถูกรวมสำหรับวัตถุประสงค์เปรียบเทียบสภาพการเจริญเติบโตและการสกัดดีเอ็นเอAerobically ได้ปลูกทั้งหมด S. dysgalactiae แยกในทอดด์Agar ฮิววิท (ท่า แผ่น Difco สปาร์ค MD สหรัฐอเมริกา) และ incubatedที่ 37 C สำหรับวัฒนธรรม 24 h. หุ้นถูกเก็บ แช่แข็งที่ C 80 ในซุปฮิววิททอดด์ (Difco สปาร์ค MD สหรัฐอเมริกา)Lancefield serotyping C [24] ได้รับการยืนยันโดย PASTOREXอาการ (Bio Rad, Marnes-ลา-Coquette ฝรั่งเศส) รหัสของ S. dysgalactiae แยกทำโดยAPI 20 STREPT (bioMerieux, Marcy l'Etoile ฝรั่งเศส)ทำ genomic DNA จากแบคทีเรียอาณานิคมโดย

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

แม้จะมีความสำคัญทางคลินิกเพียงไม่กี่ศึกษาเกี่ยวกับ
ปลา S. dysgalactiae ได้รับการเผยแพร่จนถึงขณะนี้
[8,11,19,20] ดังนั้นข้อมูลเล็ก ๆ น้อย ๆ ที่มีอยู่เกี่ยวกับการระบาดของโรค
และระบาดวิทยาของเชื้อโรคดังกล่าวในปลาทำไร่ไถนา.
พิมพ์วิธีโมเลกุลใบอนุญาตการพิมพ์ของสายพันธุ์เดียวกัน
สายพันธุ์แบคทีเรียที่ปรากฏแยกไม่ออกโดยทั่วไป
วิธีการเช่น antibiogram หรือ serotyping เจลชีพจรสนาม
electrophoresis (PFGE) ถือเป็นทองพิมพ์มาตรฐาน
วิธีการ [21] ทั้งจีโนมของแบคทีเรียถูกตรวจสอบโดย
PFGE เพื่อประเมินความสัมพันธ์ทางพันธุกรรมของแบคทีเรีย.
PFGE จะเป็นประโยชน์ในการศึกษาระยะสั้นเช่นเดียวกับในระยะยาว
ทางระบาดวิทยาติดตาม [21] ข้อมูลไบแอสซายน์เจลอิเล็ก
(BSFGE) เป็น PFGE แก้ไข [8] โมเลกุลอื่น ๆ
วิธีเช่นการหาลำดับเบสของยีน TUF ยังได้รับอนุญาต
การวิเคราะห์ intraspecies รูปแบบลำดับที่
สูงถึง 2.6% ใน streptococci [22].
การวิเคราะห์โมเลกุลที่แพร่หลายมากที่สุดที่ใช้สำหรับทางพันธุกรรม
การวิเคราะห์ของเชื้อโรคปลา S. dysgalactiae เป็นลำดับ ของ
ยีนแม่บ้านทำความสะอาด [5,7,8,11,20,23] PFGE และโปรไฟล์ BSFGE
[2,8,11] ในการศึกษานี้วิเคราะห์ BSFGE ของเบสถูกจ้างมา
เพื่อสร้างรูปแบบทางพันธุกรรมที่แตกต่างกันสำหรับเอ dysgalactiae
สายพันธุ์ที่รวบรวมจากความหลากหลายของปลาตายและ
พื้นที่ทางภูมิศาสตร์ นอกจากนี้ยังมีการเรียงลำดับบางส่วนของ TUF
ของยีนและเชื้อชาติของลำดับได้ถูกตรวจสอบ
เพื่อประเมินผลการบังคับใช้เทคนิคเหล่านี้ในการ
ศึกษาทางระบาดวิทยาในอนาคต.
วัสดุและวิธีการ
แยกเชื้อแบคทีเรีย
ยี่สิบคลินิกเอสไอโซเลท dysgalactiae ถูกนำมาใช้ในปัจจุบัน
การศึกษา ทั้งหมดเอไอโซเลท dysgalactiae ถูกแยกออกจากแผลใน
คอดหางหรือไตของปลาตาย.
กำเนิดทางภูมิศาสตร์และพันธุ์ปลาจากที่เอส dysgalactiae
เชื้อถูกดึงมาจะแสดงในตารางที่ 1 การอ้างอิง
สายพันธุ์เอ subsp dysgalactiae dysgalactiae ATCC43078 ถูกรวม
เพื่อการเปรียบเทียบ.
สภาพการเจริญเติบโตและการสกัดดีเอ็นเอ
ทั้งหมดเอไอโซเลท dysgalactiae มีปลูก aerobically บนโทดด์
เฮวิตต์วุ้น (THA; Difco, ประกายไฟ, MD, USA) แผ่นและบ่ม
ที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 24 ชั่วโมง? วัฒนธรรมหุ้นถูกเก็บรักษาแช่แข็ง
ที่? 80? C ในน้ำซุปทอดด์-เฮวิตต์ (Difco, ประกายไฟ, MD, USA).
Lancefield serotyping C [24] ได้รับการยืนยันโดยใช้ PASTOREX
Strep (Bio-Rad, Marnes-la-Coquette, ฝรั่งเศส) . บัตรประจำตัว
ของเชื้อ S. dysgalactiae ได้รับการดำเนินการโดยใช้
API 20 STREPT? (bioMerieux, Marcy-l'Etoile, ฝรั่งเศส).
ดีเอ็นเอจีโนมได้รับการดำเนินการจากแบคทีเรียโดย

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

แม้จะมีคลินิกที่สำคัญเพียงไม่กี่การศึกษาที่เกี่ยวข้องกับ
ปลา . dysgalactiae ได้รับการเผยแพร่จนถึงตอนนี้
[ 8,11,19,20 ] ดังนั้น ข้อมูลเล็ก ๆน้อย ๆสามารถใช้ได้เกี่ยวกับการแพร่ระบาดของเชื้อดังกล่าว และระบาดวิทยา

โมเลกุล farmed ปลา วิธีการอนุญาตให้พิมพ์พิมพ์ของสายพันธุ์ของแบคทีเรียชนิดเดียวกัน
ที่ปรากฏแยกโดยวิธีปกติ
,เช่น antibiogram หรือการสำรวจ . พัลฟิลด์เจล
electrophoresis ( PFGE ) ถือว่าเป็นมาตรฐานทองคำพิมพ์
) [ 21 ] จีโนมทั้งหมดของตรวจสอบโดย
PFGE เพื่อประเมินความสัมพันธ์ทางพันธุกรรมของเชื้อที่แยกได้ .
PFGE เป็นประโยชน์ในการเรียนระยะสั้น รวมทั้งการระบาดวิทยาระยะยาว
[ 21 ] ลำเอียงไซน์ฟิลด์เจล
( bsfge ) เป็นการดัดแปลง PFGE [ 8 ] วิธีอณู
อื่นๆ เช่น การหาลำดับเบสของยีนโดยได้รับอนุญาต
การวิเคราะห์ intraspecies ลำดับการเปลี่ยนแปลงที่
ถึงถึง 2.6% ในเชื้อ [ 22 ] .
ที่แพร่หลายมากที่สุดที่ใช้สำหรับการวิเคราะห์ทางพันธุกรรมระดับโมเลกุลหรือเชื้อโรคของปลา . dysgalactiae

เป็นลำดับของยีน 5,7,8,11,20,23 PFGE แม่บ้าน [ ] , และ bsfge โปรไฟล์
[ 2,8,11 ]ในการศึกษานี้ใช้ในการวิเคราะห์ bsfge ของ
สร้างโปรไฟล์สำหรับ S
dysgalactiae แตกต่างทางพันธุกรรมสายพันธุ์ที่รวบรวมจากความหลากหลายของปลาและร่อแร่
พื้นที่ทางภูมิศาสตร์ นอกจากนี้ การบางส่วนของยีนโดย
และระบบเชื้อชาติของได้ดังนี้ คือ
ประเมินความเกี่ยวข้องของเทคนิคเหล่านี้ในการศึกษาด้านระบาดวิทยา

ในอนาคต .วัสดุและวิธีการ

20 คลินิก แบคทีเรียที่คัดเลือกสายพันธุ์ S dysgalactiae ถูกใช้ในการศึกษาปัจจุบัน

ทั้งหมด dysgalactiae ไอโซเลทที่แยกได้จากรอยโรคใน
ก้านหาง หรือ ไตของปลาร่อแร่ .
ที่มาทางภูมิศาสตร์และสายพันธุ์ปลาจากที่เอส dysgalactiae
ไอโซเลทได้แสดงในตารางที่ 1 อ้างอิง
สายพันธุ์ S dysgalactiae subsp .dysgalactiae atcc43078 อยู่

การเจริญเติบโตเพื่อเปรียบเทียบ เงื่อนไขและ
การสกัดดีเอ็นเอทั้งหมด dysgalactiae ไอโซเลท aerobically ปลูกในทอดด์
Hewitt ( ท่า ; difco , ประกายไฟ , MD , USA ) แผ่นและบ่มที่ 37 
C เป็นเวลา 24 ชั่วโมง หุ้นวัฒนธรรมยังคงแช่แข็ง
ที่  80  C ใน ทอดด์ ฮิววิตต์ น้ำซุป ( difco , ประกายไฟ , MD , USA )
c [ 24 ] แลนส์ฟิลด์การสำรวจได้รับการยืนยันโดยการใช้ pastorex
( ไบโอ ราด marnes Strep , ลา คอเคทท ฝรั่งเศส ) การแยกของ S . dysgalactiae

ถูกดำเนินการโดยใช้ API 20 strept  ( biomerieux marcy-l'etoile , ฝรั่งเศส ) .
genomic DNA ที่ได้จากแบคทีเรียอาณานิคมโดย