2. Materials and methods2.1. Plant

2. Materials and methods
2.1. Plant materials and treatments

Shoots of bamboo (Phyllostachys violascens) were harvested at Lin’an (Zhejiang Province, China) in April 2008 and immediately transported to our laboratory, where they were selected for uniformity of shape and size. The shoots were washed in tap water and hand-peeled. About 5 cm was removed from the cut-end of the shoots with a sharp knife and the remainder was washed again with 0.04% sodium hypochlorite solution. A total of 720 bamboo shoots were divided into two equal groups, comprising three replicates of 120 in each group. In a preliminary study, the shoots were stored at 10 °C for 12 days after treatment with sodium nitroprusside (SNP, NO donor) at concentrations of between 0.1 and 1.0 mM. It was found that treatment with SNP at 0.5 mM resulted in better flesh quality and this concentration therefore was used. Shoots of one group were dipped in 0.5 mM SNP aqueous solutions for 1 h at 25 °C, and the other group was treated with water as the control. All shoots were then surface-dried with cold air. Each stack of 40 bamboo shoots were packed in 0.01 mm thick polyethylene bags (long 90 cm, wide 45 cm) with several holes for ventilation and stored at 10 ± 0.5 °C, RH 90%. Shoot firmness, browning index and ethylene production were assessed every 2 days. Tissue samples (about 100 g from each replicate) were frozen in liquid nitrogen and stored at −80 °C until used for the determination of total phenols, lignin and cellulose contents and activities of PPO, POD and PAL.

2.2. Browning index

Surface browning was assessed by measuring the extent of the total browned area on each shoot of the 10 in each replicate according to a 5 grade scale: 0, none; 1, browning area 50%. The browning index was calculated as Σ(browning level × number of shoots with that browning level)/(total number of shoots).

2.3. Determination of ethylene production

A sample of 3 shoots from each replicate (3 × 3 per treatment) was sealed in a 1 L jar for 1 h at 20 °C and then a 1 mL gas sample was collected from the jar with a syringe. The ethylene concentrations were determined using a SP-6890 gas chromatograph (Lunan Chemical Industrial Instruments Co., Shandong, China) with a flame ionization detector and a GDX-502 column held at 90 °C. Rates of ethylene production were expressed as μL ethylene kg−1 h−1 FW.

2.4. Texture measurement

Texture was measured on 10 individual shoots per treatment, comprising 3, 3, and 4 shoots from each of the three replicates. Firmness (N) was tested at the middle of the shoot using a TA-XT2i texture analyzer (Stable Micro Systems, England) fitted with a 5 mm diameter probe. The penetration rate was 1 mm/s with a final penetration depth of 10 mm and data were expressed in N.

2.5. Determination of total phenols

Total phenols were extracted by homogenizing 3 g of frozen tissue powder with 12 mL of 80% ethanol and centrifuging the homogenate at 12,000 × g for 20 min. Total phenols were estimated on the supernatant by a colorimetric assay based on procedures described by Singleton and Rossi (1965). Absorbance at 725 nm was measured using gallic acid as a standard. The phenol contents were expressed as gallic acid equivalents in milligrams on a fresh weight (FW) basis.

2.6. Determination of lignin and cellulose contents

About 5 g of frozen samples were used for lignin analysis. Lignin was gravimetrically determined according the method of Luo et al. (2008a) and the results expressed as g lignin per 100 g fresh weight.

Cellulose was extracted and measured by the method of Oomena et al. (2004) with modifications. For the isolation of cell wall material (CWM), 10 g of frozen tissue powder was extracted in a 50 mM Tris:HCl, pH 7.2 solution containing 1% SDS for 3 h at room temperature with continuous shaking. The extract was centrifuged at 16,000 × g for 20 min. The residue was washed with water, ethanol, and acetone and air-dried. Fifty milligrams of CWM was incubated for 90 min at 120 °C in 5 mL 2 M trifluoroacetic acid. The remaining cellulose was pelleted and washed with water and ethanol. The pellet was solubilized in 67% (v/v) H2SO4 at 37 °C for 60 min and diluted appropriately for the determination of cellulose content colorimetrically at 620 nm using anthrone as coloring agent and glucose as the quantification standard.

2.7. Assays of enzyme activities

Phenylalamine ammonia lyase (PAL) was extracted from 5 g frozen tissue with 0.2 M sodium borate buffer at pH 8.8 containing 40 g/L polyvinylpyrrolidone, 2 mM EDTA and 5 mM of β-mercaptoethanol. Five grams of frozen tissue was ground with 25 mL of 0.2 M sodium phosphate buffer (pH 6.5) containing 1% polyvinylpyrrolidone (PVP) for polyphenol oxidase (PPO), or with 50 mM sodium borate buffer at pH 8.7 for peroxidase (POD). All extract procedures were conducted at 4 °C. The extracts were then homogenised and centrifuged at 12,000 × g for 30 min at 4 °C. The supernatants were used for the enzyme assays.

PAL was assayed by the method described by Zucker (1968). One unit of PAL activity was defined as the amount of enzyme that causes the increase in absorbance of 0.01 at 290 nm in 1 h under the specified conditions. PPO activity was assayed following the method of Murr and Morris (1974). One unit of PPO activity was defined as the amount of enzyme that causes the increase in absorbance of 0.01 at 410 nm in 1 min under the specified conditions. POD activity was assayed using guaiacol as a donor and H2O2 as a substrate according to the method of Kochba et al. (1977). One unit of POD activity was defined as an increase of 0.01 in absorbance per minute at 460 nm under the assay conditions.

Protein content was determined according to the method of Bradford (1976), with bovine serum as the standard.

2.8. Statistical analysis

Each experiment was repeated three times and the data were processed by analysis of variance (ANOVA). Treatments were compared at P = 0.05 according to least significant difference (LSD) test.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2. วัสดุและวิธีการ2.1 การปลูกวัสดุและรักษายอดไม้ไผ่ (Phyllostachys violascens) ถูกเก็บเกี่ยวที่ Lin'an (เจ้อเจียง Province, China) ในเดือน 2008 เมษายน และทันทีที่ขนส่งไปห้องปฏิบัติการของเรา ที่พวกเขาเลือกสำหรับความรื่นรมย์ของรูปร่างและขนาด ถ่ายภาพได้ล้างในน้ำประปา และมือปอกเปลือก ประมาณ 5 ซม.ถูกเอาออกจากส่วนตัดของการถ่ายภาพ ด้วยมีดที่คม และส่วนเหลือถูกล้างอีกครั้ง ด้วยโซลูชันฟอก 0.04% จำนวน 720 หน่อไม้ได้แบ่งเป็น 2 กลุ่มเท่ากัน ประกอบด้วยสามเหมือนกับของ 120 ในแต่ละกลุ่ม ในการศึกษาเบื้องต้น การถ่ายภาพจัดเก็บที่ 10 ° C 12 วันหลังการรักษาด้วย nitroprusside โซเดียม (SNP ไม่มีผู้บริจาค) ที่ความเข้มข้นของ 0.1 ถึง 1.0 มม. พบว่า รักษา ด้วย SNP ที่ 0.5 มม.ส่งผลให้คุณภาพเนื้อดีกว่า และความเข้มข้นนี้จึงใช้ ถ่ายภาพของกลุ่มหนึ่งถูกจุ่มลงในโซลูชันอควี SNP 0.5 mM สำหรับ h 1 ที่ 25 ° C และกลุ่มได้รับน้ำเป็นตัวควบคุม ถ่ายภาพทั้งหมดได้แล้วผิวแห้ง ด้วยอากาศเย็น แต่ละกองของหน่อไม้ที่ 40 ได้บรรจุใน 0.01 mm หนาพลาสติกถุง (ยาว 90 ซม. กว้าง 45 ซม.) หลายหลุมสำหรับระบายอากาศ และเก็บที่ 10 ± 0.5 ° C, RH 90% ยิง ไอซ์ browning ดัชนี และการผลิตเอทิลีนถูกประเมินทุก 2 วัน ตัวอย่างเนื้อเยื่อ (ประมาณ 100 กรัมจากแต่ละจำลอง) ถูกแช่แข็งในไนโตรเจนเหลว และเก็บไว้ที่ −80 ° C จนกระทั่งใช้ใน phenols รวม lignin และเซลลูโลสเนื้อหาและกิจกรรมของ PPO ฝัก และ PAL2.2 การดัชนีที่เกิดสีน้ำตาลผิว browning ถูกประเมิน โดยการวัดขอบเขตของพื้นที่ browned ในการยิงแต่ละ 10 ในแต่ละซ้ำตามระดับชั้นประถมศึกษาปีที่ 5:0 ไม่มี 1, browning ตั้ง < 10% 2, browning ตั้ง 10 – 25% 3, browning ตั้ง 25 – 50% 4, browning ตั้ง > 50% มีคำนวณดัชนี browning เป็นΣ (browning จำนวนฟิลด์ระดับถ่ายภาพที่มีระดับ browning) / (จำนวนของการถ่ายภาพ)2.3 การกำหนดของการผลิตเอทิลีนตัวอย่างของการถ่ายภาพ 3 จาก (3 × 3 ต่อรักษา) แต่ละซ้ำถูกปิดผนึกอยู่ในกระปุก 1 L สำหรับ h 1 ที่ 20 ° C แล้ว ตัวอย่างก๊าซ 1 มล.รวบรวมจากขวดที่ มีเข็มเป็น ความเข้มข้นเอทิลีนมีกำหนด chromatograph ก๊าซเป็น SP-6890 (Lunan เคมีอุตสาหกรรมเครื่องมือ Co. ซานตง จีน) ด้วยเครื่องตรวจจับในการ ionization เปลวไฟ และคอลัมน์ GDX 502 ขึ้นที่ 90 องศาเซลเซียส อัตราการผลิตเอทิลีนได้แสดงเป็นเอทิลีน μL kg−1 h−1 FW2.4. เนื้อวัดพื้นผิวเป็นวัดบนยอดละ 10 ต่อการรักษา 3, 3 และ 4 ถ่ายภาพจากแต่ละเหมือนกับสาม ไอซ์ (N) ได้รับการทดสอบที่ตรงกลางของการถ่ายภาพโดยใช้การ XT2i ตาเนื้อวิเคราะห์ (ระบบไมโครมีเสถียรภาพ อังกฤษ) กับโพรบมีเส้นผ่าศูนย์กลาง 5 มม. อัตราการเจาะเป็น 1 mm/s ที่ความลึกสุดท้ายเจาะ 10 มม.และข้อมูลที่แสดงใน N.2.5 การกำหนด phenols รวมPhenols รวมถูกสกัด โดย homogenizing g 3 ของเนื้อเยื่อแช่แข็งผงกับ 12 mL ของเอทานอล 80% และ centrifuging homogenate ที่ 12000 × g สำหรับ phenols รวมประมาณ 20 นาทีได้ประเมินใน supernatant ที่ โดยวิเคราะห์เทียบเคียงที่ตามขั้นตอนที่อธิบายไว้โดยเดี่ยว Rossi (1965) Absorbance ที่ 725 nm ถูกวัดโดยใช้กรด gallic เป็นมาตรฐาน วางเนื้อหาที่แสดงเป็นอัตรากรด gallic milligrams ตามน้ำหนักสด (FW)2.6 การกำหนดสารบัญ lignin และเซลลูโลสประมาณ 5 กรัมแช่แข็งอย่างถูกใช้สำหรับวิเคราะห์ lignin Lignin ได้ gravimetrically กำหนดตามวิธีการของ Luo et al. (2008a) และผลลัพธ์ที่แสดงเป็น lignin g ต่อน้ำหนักสด 100 กรัมเซลลูโลสที่สกัด และวัด โดยวิธีของ Oomena et al. (2004) มีการปรับเปลี่ยน การแยกวัสดุผนังเซลล์ (CWM), 10 กรัมของเนื้อเยื่อแช่แข็งผงถูกสกัดในตัว 50 มม. Tris:HCl โซลูชัน pH 7.2 ประกอบด้วย 1% SDS สำหรับ h 3 ที่อุณหภูมิห้องด้วยการสั่นอย่างต่อเนื่อง การดึงข้อมูลถูก centrifuged ที่ 16000 × g สำหรับ 20 นาที สารตกค้างในเครื่องซักผ้า กับน้ำ เอทานอล อะซีโตน และ air-dried 50 milligrams ของ CWM ถูก incubated สำหรับ 90 นาทีที่ 120 ° C ในกรด 5 mL 2 เมตร trifluoroacetic เซลลูโลสเหลือ pelleted และล้าง ด้วยน้ำและเอทานอล เม็ดที่ solubilized 67% (v/v) กำมะถันที่ 37 ° C สำหรับ 60 นาที และทำให้เหมาะสมสำหรับการกำหนดเนื้อหาเซลลูโลส colorimetrically ที่ 620 nm โดยใช้ anthrone เป็นสีแทนและกลูโคสที่นับเป็นมาตรฐาน2.7. assays ของกิจกรรมของเอนไซม์Phenylalamine lyase แอมโมเนีย (PAL) ถูกสกัดจาก 5 กรัมแช่แข็งเนื้อเยื่อ ด้วย 0.2 M borate โซเดียมบัฟเฟอร์ที่ pH 8.8 มี 40 g/L polyvinylpyrrolidone, EDTA 2 มม. และ 5 มม.ของβ-mercaptoethanol 5 กรัมของเนื้อเยื่อแช่แข็งถูกล่าง 25 mL ของ 0.2 M โซเดียมฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (pH 6.5) มี 1% polyvinylpyrrolidone (PVP) สำหรับ polyphenol oxidase (PPO), หรือ 50 mM โซเดียม borate บัฟเฟอร์ที่ pH 8.7 สำหรับ peroxidase (POD) ขั้นตอนการสกัดทั้งหมดได้ดำเนินการที่ 4 องศาเซลเซียส สารสกัดได้ homogenised แล้ว centrifuged ที่ 12000 × g ใน 30 นาทีที่ 4 องศาเซลเซียส Supernatants ถูกใช้สำหรับ assays เอนไซม์PAL ได้ assayed โดยวิธีการอธิบายไว้ โดย Zucker (1968) หน่วยหนึ่งของ PAL กิจกรรมถูกกำหนดเป็นจำนวนของเอนไซม์ที่ทำให้เกิดการเพิ่มขึ้นใน absorbance ของ 0.01 ที่ 290 nm ใน h 1 ภายใต้เงื่อนไขที่ระบุ กิจกรรม PPO มี assayed ตามวิธีของ Murr และมอร์ริส (1974) กิจกรรม PPO หน่วยหนึ่งถูกกำหนดเป็นจำนวนของเอนไซม์ที่ทำให้เกิดการเพิ่มขึ้นใน absorbance ของ 0.01 ที่ 410 nm ใน 1 นาทีภายใต้เงื่อนไขที่ระบุ กิจกรรมฝักถูก assayed ใช้ guaiacol เป็นผู้บริจาคและ H2O2 เป็นพื้นผิวตามวิธีของ Kochba et al. (1977) หน่วยหนึ่งของ POD กิจกรรมถูกกำหนดเป็นการเพิ่มขึ้นของ 0.01 ใน absorbance ต่อนาทีที่ 460 nm ภายใต้เงื่อนไขการทดสอบโปรตีนที่ถูกกำหนดตามวิธีการของแบรดฟอร์ด (1976), กับเซรั่มวัวเป็นมาตรฐาน2.8. สถิติวิเคราะห์แต่ละการทดลองทำซ้ำสามครั้ง และข้อมูลถูกประมวลผล โดยการวิเคราะห์ผลต่างของ (การวิเคราะห์ความแปรปรวน) รักษาได้เทียบที่ P = 0.05 ตามทดสอบความแตกต่าง (LSD) อย่างมีนัยสำคัญน้อยที่สุด

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2. วัสดุและวิธีการ
2.1 วัสดุพืชและการรักษาข้าวกล้าจากไม้ไผ่ (violascens Phyllostachys) ได้รับการเก็บเกี่ยว Lin'an (Zhejiang Province, จีน) ในเดือนเมษายน 2008 และส่งทันทีที่ห้องปฏิบัติการของเราที่พวกเขาได้รับการคัดเลือกสำหรับความสม่ำเสมอของรูปร่างและขนาด หน่อถูกล้างในน้ำประปาและมือปอกเปลือก ประมาณ 5 ซม. จะถูกลบออกจากการตัดปลายของหน่อด้วยมีดที่คมชัดและส่วนที่เหลือจะถูกล้างอีกครั้งกับ 0.04% วิธีการแก้ปัญหาโซเดียมไฮโปคลอไรต์ รวม 720 หน่อไม้ถูกแบ่งออกเป็นสองกลุ่มเท่ากันประกอบไปด้วยสามซ้ำ 120 ในแต่ละกลุ่ม ในการศึกษาเบื้องต้นหน่อที่ถูกเก็บไว้ที่ 10 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 12 วันหลังการรักษาด้วยโซเดียม nitroprusside (SNP ผู้บริจาค NO) ที่ระดับความเข้มข้นระหว่าง 0.1 และ 1.0 มิลลิ ผลการศึกษาพบว่าการรักษาด้วย SNP ที่ 0.5 มิลลิส่งผลให้มีคุณภาพที่ดีกว่าและเนื้อเข้มข้นนี้จึงถูกนำมาใช้ ข้าวกล้าของกลุ่มหนึ่งถูกจุ่มลงใน 0.5 มิลลิ SNP สารละลายเป็นเวลา 1 ชั่วโมงที่ 25 ° C และกลุ่มอื่น ๆ ที่ได้รับการรักษาที่มีน้ำเป็นตัวควบคุม ยอดทั้งหมดถูกแล้วผิวแห้งที่มีอากาศเย็น สแต็คของ 40 หน่อไม้แต่ละคนได้รับการบรรจุในถุง 0.01 มมเอทิลีนหนา (ยาว 90 ซม. กว้าง 45 ซม.) ที่มีรูระบายอากาศหลายและเก็บไว้ที่ 10 ± 0.5 องศาเซลเซียสความชื้นสัมพัทธ์ 90% ยิงแน่นดัชนีการเกิดสีน้ำตาลและผลิตเอทิลีได้รับการประเมินทุก 2 วัน ตัวอย่างเนื้อเยื่อ (ประมาณ 100 กรัมจากการทำซ้ำในแต่ละ) ถูกแช่แข็งในไนโตรเจนเหลวและเก็บไว้ที่ -80 องศาเซลเซียสจนกว่าจะใช้สำหรับการวัดของฟีนอลรวมเนื้อหาและลิกนินเซลลูโลสและกิจกรรมของ PPO, POD และ PAL. 2.2 บราวนิ่งดัชนีการเกิดสีน้ำตาลพื้นผิวได้รับการประเมินโดยการวัดขอบเขตของพื้นที่สีน้ำตาลทั้งหมดในการถ่ายภาพใน 10 ในแต่ละทำซ้ำตามระดับชั้นประถมศึกษาปีที่ 5: 0 ไม่มี; 1, พื้นที่สีน้ำตาล <10%; 2 พื้นที่สีน้ำตาล 10-25%; 3 พื้นที่สีน้ำตาล 25-50%; 4 พื้นที่สีน้ำตาล> 50% ดัชนีการเกิดสีน้ำตาลที่ถูกคำนวณเป็นΣ (ระดับการเกิดสีน้ำตาลจำนวน×ของหน่อที่มีระดับการเกิดสีน้ำตาลที่) / (จำนวนรวมของยอด). 2.3 การกำหนดผลิตเอทิลีตัวอย่าง 3 หน่อจากแต่ละซ้ำ (3 × 3 ต่อการรักษา) ถูกปิดผนึกไว้ในขวด 1 ลิตรเป็นเวลา 1 ชั่วโมงที่ 20 ° C และจากนั้นตัวอย่างก๊าซมิลลิลิตร 1 ขวดที่เก็บได้จากที่มีเข็มฉีดยาที่ ความเข้มข้นของเอทิลีนได้รับการพิจารณาโดยใช้ SP-6890 ก๊าซ Chromatograph (Lunan เครื่องมือเคมีอุตสาหกรรม จำกัด มณฑลซานตงประเทศจีน) ที่มีการตรวจจับไอออนไนซ์เปลวไฟและคอลัมน์ GDX-502 จัดขึ้นที่ 90 องศาเซลเซียส อัตราการผลิตเอทิลีนถูกแสดงเป็นเอทิลีนไมโครลิตรกิโลกรัม 1 ชั่วโมง 1 FW. 2.4 วัดพื้นผิวพื้นผิวที่วัดในวันที่ 10 ของแต่ละบุคคลต่อยอดการรักษาประกอบด้วย 3, 3 และ 4 หน่อจากแต่ละสามซ้ำ ความแน่น (N) ได้รับการทดสอบในช่วงกลางของการถ่ายภาพโดยใช้การวิเคราะห์พื้นผิว TA-XT2i (ที่ระบบไมโคร Stable อังกฤษ) ติดตั้ง 5 มิลลิเมตรเส้นผ่าศูนย์กลางสอบสวน อัตราการเจาะเป็น 1 มิลลิเมตร / วินาทีด้วยการเจาะลึกสุดท้ายของ 10 มมและข้อมูลที่ได้มาแสดงในเอ็น2.5 ความมุ่งมั่นของฟีนอลรวมฟีนอลทั้งหมดถูกสกัดโดย homogenizing 3 กรัมผงแช่แข็งเนื้อเยื่อกับ 12 มิลลิลิตรของเอทานอล 80% และเหวี่ยง homogenate ที่ 12,000 ×กรัมเป็นเวลา 20 นาที ฟีนอลรวมอยู่ที่ประมาณในสารละลายโดยการทดสอบสีขึ้นอยู่กับขั้นตอนการอธิบายโดยซิงเกิลและรอสซี (1965) การดูดกลืนแสงที่ 725 นาโนเมตรได้รับการวัดโดยใช้กรดฝรั่งเศสเป็นมาตรฐาน เนื้อหาฟีนอลถูกแสดงเป็นรายการเทียบเท่าฝรั่งเศสกรดในมิลลิกรัมในน้ำหนักสด (FW) พื้นฐาน. 2.6 ความมุ่งมั่นของลิกนินเซลลูโลสและเนื้อหาเกี่ยวกับ 5 กรัมแช่แข็งของกลุ่มตัวอย่างที่ใช้ในการวิเคราะห์ลิกนิน ลิกนินถูกกำหนด gravimetrically ตามวิธีการของลูเอตอัล (2008a) และผลที่แสดงเป็นลิกนินกรัมต่อ 100 กรัมน้ำหนักสด. เซลลูโลสถูกสกัดและวัดโดยวิธี Oomena et al, (2004) มีการปรับเปลี่ยน สำหรับการแยกของวัสดุผนังเซลล์ (CWM) 10 กรัมผงแช่แข็งเนื้อเยื่อถูกสกัดใน 50 มิลลิทริส: HCl, pH 7.2 วิธีการแก้ปัญหาที่มี 1% SDS เวลา 3 ชั่วโมงที่อุณหภูมิห้องที่มีอย่างต่อเนื่องเขย่า สารสกัดถูกหมุนเหวี่ยงที่ 16,000 ×กรัมเป็นเวลา 20 นาที ที่เหลือถูกล้างด้วยน้ำเอทานอลและอะซีโตนและอากาศแห้ง ห้าสิบมิลลิกรัมของ CWM ถูกบ่มเป็นเวลา 90 นาทีที่ 120 องศาเซลเซียสใน 5 มิลลิลิตร 2 M กรด TRIFLUOROACETIC เซลลูโลสเหลือเม็ดและล้างด้วยน้ำและเอทานอล เม็ดถูกละลายใน 67% (v / v) H2SO4 ที่ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 60 นาทีและเจือจางที่เหมาะสมสำหรับการกำหนดเนื้อหาเซลลูโลส colorimetrically ที่ 620 นาโนเมตรโดยใช้ anthrone เป็นตัวแทนสีและน้ำตาลในปริมาณที่เป็นมาตรฐานได้. 2.7 การตรวจของเอนไซม์ไอเลสแอมโมเนีย Phenylalamine (PAL) ถูกสกัดจาก 5 กรัมแช่แข็งเนื้อเยื่อที่มี 0.2 M โซเดียมบอเรตบัฟเฟอร์ที่ pH 8.8 ที่มี 40 g / L polyvinylpyrrolidone 2 มิลลิ EDTA 5 มิลลิของβ-mercaptoethanol ห้ากรัมของเนื้อเยื่อถูกแช่แข็งพื้นดินที่มี 25 มิลลิลิตร 0.2 M โซเดียมฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (pH 6.5) ที่มี polyvinylpyrrolidone 1% (PVP) สำหรับเอนไซม์โพลีฟีน (PPO) หรือบัฟเฟอร์โซเดียมบอเรต 50 มิลลิที่ pH 8.7 สำหรับ peroxidase (POD) สารสกัดจากขั้นตอนทั้งหมดถูกดำเนินการที่ 4 ° C สารสกัดอยู่แล้ว homogenised และหมุนเหวี่ยงที่ 12,000 ×กรัมเป็นเวลา 30 นาทีที่อุณหภูมิ 4 องศาเซลเซียส supernatants ถูกนำมาใช้สำหรับการตรวจเอนไซม์. PAL ได้รับการวิเคราะห์โดยวิธีการที่อธิบายโดยซัคเกอร์ (1968) หนึ่งหน่วยของกิจกรรม PAL ถูกกำหนดเป็นปริมาณของเอนไซม์ที่เป็นสาเหตุของการเพิ่มขึ้นของการดูดกลืนแสง 0.01 ที่ 290 นาโนเมตรใน 1 ชั่วโมงภายใต้เงื่อนไขที่ระบุไว้ กิจกรรม PPO ได้รับการวิเคราะห์ต่อไปนี้วิธีการ Murr และมอร์ริส (1974) หนึ่งหน่วยของกิจกรรม PPO ถูกกำหนดเป็นปริมาณของเอนไซม์ที่เป็นสาเหตุของการเพิ่มขึ้นของการดูดกลืนแสง 0.01 ที่ 410 นาโนเมตรใน 1 นาทีภายใต้เงื่อนไขที่ระบุไว้ กิจกรรม POD ได้รับการวิเคราะห์โดยใช้ guaiacol เป็นผู้บริจาคและ H2O2 เป็นสารตั้งต้นตามวิธีการของ Kochba et al, (1977) หนึ่งหน่วยของกิจกรรม POD ถูกกำหนดเป็นเพิ่มขึ้นจาก 0.01 ในการดูดกลืนแสงต่อนาทีที่ 460 นาโนเมตรภายใต้เงื่อนไขการทดสอบได้. ปริมาณโปรตีนที่ถูกกำหนดตามวิธีการของแบรดฟอนี้ (1976) กับซีรั่มวัวเป็นมาตรฐาน. 2.8 การวิเคราะห์ทางสถิติการทดลองแต่ละซ้ำสามครั้งและข้อมูลที่ได้มาประมวลผลโดยการวิเคราะห์ความแปรปรวน (ANOVA) การรักษาที่ถูกนำมาเปรียบเทียบ p = 0.05 ตามอย่างน้อยแตกต่างกัน (LSD) การทดสอบ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2 . วัสดุและวิธีการ
2.1 . พืชและการรักษา

หน่อของไผ่ ( phyllostachys ไวโอแล ซน ) ถูกเก็บเกี่ยวใน Lin ' an ( จังหวัด Zhejiang , จีน ) ในเดือนเมษายน 2008 และส่งตัวไปยังห้องปฏิบัติการของเรา , ที่พวกเขาเลือกสำหรับความสม่ำเสมอของรูปร่างและขนาด ยอดชำระในน้ำประปาและมือปอกประมาณ 5 ซม. จะถูกลบออกจากการตัดปลายยอดด้วยมีดคมและส่วนที่เหลือถูกล้างอีกทีด้วย 0.04 % โซเดียม ไฮโปคลอไรท์ โซลูชั่น ทั้งหมด 720 หน่อไม้ออกเป็นสองกลุ่มเท่ากัน ประกอบด้วย 3 ซ้ำ 120 ในแต่ละกลุ่ม ในการศึกษาเบื้องต้นยอดที่เก็บรักษาที่อุณหภูมิ 10 องศา C เป็นเวลา 12 วัน หลังการรักษาด้วยโซเดียม nitroprusside ( SNP ,ไม่มีผู้บริจาค ) ที่ความเข้มข้นระหว่าง 0.1 และ 1.0 มม. พบว่า การรักษาด้วย SNP ที่ 0.5 มิลลิเมตร ส่งผลให้คุณภาพเนื้อได้ดีขึ้น และสมาธินี้จึงใช้ หน่อของกลุ่มหนึ่งถูกจุ่มลงในสารละลาย 0.5 มม. SNP 1 H ที่ 25 ° C และกลุ่มอื่น ๆคือการรักษาด้วยน้ำเป็นตัวควบคุม ทุกยอดแล้วพื้นผิวแห้งด้วยอากาศเย็นแต่ละกอง 40 หน่อไม้บรรจุในถุงโพลีเอทธิลีน ( 0.01 มิลลิเมตร หนา ยาว 90 ซม. กว้าง 45 ซม. ) ที่มีหลุมหลายสำหรับการระบายอากาศและเก็บรักษาที่อุณหภูมิ 10 ± 0.5 ° C ความชื้นสัมพัทธ์ 90% ยิงแน่น บราวนิ่ง ดัชนีการผลิตเอทิลีนมีการประเมินทุก 2 วันตัวอย่างเนื้อเยื่อ ( ประมาณ 100 กรัม จากแต่ละซ้ํา ) ถูกแช่แข็งในไนโตรเจนเหลวที่อุณหภูมิ 80 องศา C และ บริษัท เวสเทิร์น จนกระทั่งใช้หาปริมาณลิกนินและเซลลูโลสฟีนอลรวม เนื้อหาและกิจกรรมของ PPO , ฝักและเพื่อน

2.2 . ดัชนีการเกิดสีน้ำตาล

ผิวเป็นสีน้ำตาลที่ประเมินโดยวัดขอบเขตของพื้นที่ทั้งหมด สีน้ําตาลในแต่ละยิงของ 10 ในแต่ละซ้ำตาม 5 เกรดระดับ : 0ไม่ ; 1 , สีน้ำตาลบริเวณ < 10% 2 บราวนิ่ง พื้นที่ 10 – 25 % 3 สีน้ำตาล พื้นที่ 25 – 50 % 4 พื้นที่สีน้ำตาล > 50% สีน้ำตาล ( browning Σดัชนีคำนวณเป็นจำนวน×ระดับยิงด้วย ( สีน้ำตาล ) / ( จำนวนหน่อ ) .

2.3 การหาปริมาณการผลิตเอทิลีน

ตัวอย่างที่ 3 ยิงจากแต่ละซ้ํา ( 3 × 3 ต่อรักษา ) ถูกเก็บไว้ในโถที่ 1 เป็นเวลา 1 ชั่วโมง ที่อุณหภูมิ 20 ° C แล้ว 1 มิลลิลิตร ก๊าซ การเก็บตัวอย่างจากขวดด้วยกระบอกฉีดยา เอทิลีนความเข้มข้นสารละลาย โดยใช้แก๊สโครมาโตกราฟ ( sp-6890 Lunan เครื่องมือเคมีอุตสาหกรรม จำกัด , Shandong , จีน ) กับเฟลมไอออไนเซชันตรวจจับและ gdx-502 คอลัมน์จัดขึ้นที่ 90 องศาอัตราการผลิตเอทธิลีนถูกแสดงเป็นμ L − 1 H − 1 กก. ลด FW .

2.4 . เนื้อวัด

เนื้อวัดใน 10 บุคคลยอดต่อ การรักษา จำนวน 3 , 3 , และ 4 หน่อจากทั้งสาม ได้แก่ ( n ) คือทดสอบความแน่นที่ตรงกลางของยอดใช้ ta-xt2i เนื้อ Analyzer ( มั่นคง Micro ระบบ อังกฤษ ) พอดีกับขนาดเส้นผ่าศูนย์กลาง 5 มม. ด้วยอัตราการแทรกซึม 1 mm / s กับความลึกของการสอดใส่สุดท้าย 10 มม. และข้อมูลที่แสดงใน N .

2.5 วิเคราะห์ปริมาณฟีนอล

รวมฟีนอลถูกสกัดโดยการเติมผง 3 กรัมเนื้อเยื่อแช่แข็ง 12 มิลลิลิตรเอทานอล 80% และการแยกสารที่ 12000 × G 20 นาทีฟีนอลทั้งหมด ผลที่นำโดยวิธี Colorimetric ตามขั้นตอนที่อธิบายโดยโรงพยาบาล รอสซี่ ( 1965 ) การดูดกลืนแสงที่ 725 nm การวัดเพิ่มขึ้นเป็นมาตรฐาน เนื้อหาฟีนอลมีการแสดงออกที่เพิ่มขึ้นเทียบเท่าในมิลลิกรัมในน้ำหนักสด ( FW ) พื้นฐาน

2.6 การหาปริมาณลิกนินและเซลลูโลสเนื้อหา

ประมาณ 5 กรัมแช่แข็งตัวอย่าง สถิติที่ใช้ในการวิเคราะห์ของลิกนิน ลิกนิน gravimetrically พิจารณาตามวิธีการของ Luo et al . ( 2008a ) และผลแสดงเป็นกรัมต่อ 100 กรัมน้ำหนักสด ปริมาณ

เซลลูโลสถูกสกัดและวัดด้วยวิธี oomena et al . ( 2004 ) มีการปรับเปลี่ยน สำหรับการแยกวัสดุผนังเซลล์ ( คัม )10 กรัมของผงสกัด ในเนื้อเยื่อแช่แข็ง 50 มม. โดย : กรดไฮโดรคลอริก pH 7.2 สารละลายที่มี 1% SDS 3 H ที่อุณหภูมิห้องสั่นอย่างต่อเนื่อง สารสกัดที่เป็นระดับที่ 16000 × G 20 นาที ที่เหลือก็ล้างด้วยน้ำ เอทานอล และอะซิโตน และอากาศแห้ง 50 มิลลิกรัม คือ 20% โดย Cwm 90 นาทีที่ 120 ° C ใน 5 ml 2 M กรดไตรฟลูออโรอะซิติก .เซลลูโลสเป็นเม็ดที่เหลือ และล้างด้วยน้ำและเอทานอล เม็ดถูกสร้างใน 67 เปอร์เซ็นต์ ( v / v ) กรดซัลฟิวริกที่ 37 องศา C นาน 60 นาที และเจือจางที่เหมาะสมสำหรับการวิเคราะห์ปริมาณเซลลูโลสที่ colorimetrically 620 nm ใช้แอนโทรนเป็นสีแทนและกลูโคสเป็นมาตรฐานปริมาณ

2.7 . พบกิจกรรม

เอนไซม์เฟนิล ลามีน แอมโมเนีย lyase ( PAL ) สกัดจาก 5 กรัมเนื้อเยื่อแช่แข็ง 0.2 M โซเดียมบอเรตบัฟเฟอร์พีเอช 8.8 ที่มี 40 กรัม / ลิตรพอลิวินิลไพร์โรลิโดน 2 mM EDTA และ 5 มม. ของบีตา - mercaptoethanol . 5 กรัมเนื้อเยื่อแช่แข็งพื้นดิน 25 มล. 0.2 M โซเดียมฟอสเฟตบัฟเฟอร์ pH 6.5 ) ที่ประกอบด้วย 1% พอลิวินิลไพร์โรลิโดน ( PVP ) สำหรับ polyphenol oxidase ( PPO )หรือโซเดียมบอเรตบัฟเฟอร์กับ 50 มม. ที่ pH 8.7 สำหรับ peroxidase ( POD ) กระบวนการสกัดทั้งหมดจำนวน 4 ° C ที่สกัดแล้ว homogenised ไฟฟ้าที่ 12000 × G สำหรับ 30 นาทีที่ 4 ° C supernatants ถูกใช้เพื่อตรวจเอนไซม์

เพื่อนซีรั่มโดยวิธีบรรยายโดย ซัคเกอร์ ( 1968 )หน่วยหนึ่งของกิจกรรมเพื่อนถูกกำหนดเป็นปริมาณของเอนไซม์ที่ทำให้เกิดการเพิ่มค่าการดูดกลืนแสงของ 0.01 ที่ 290 nm ใน 1 ชั่วโมง ในการระบุเงื่อนไข กิจกรรมของเอนไซม์ PPO ซีรั่มตามวิธีการและ murr มอร์ริส ( 1974 ) หน่วยหนึ่งของกิจกรรมของเอนไซม์ PPO ได้กำหนดปริมาณของเอนไซม์ที่ทำให้เกิดการเพิ่มค่าการดูดกลืนแสงของ 0.01 เท่ากับ 410 nm ใน 1 นาที ภายใต้เงื่อนไขที่ระบุไว้ .กิจกรรมฝักซีรั่มใช้ค่าเป็นผู้บริจาคและสลายเป็นสารตั้งต้นตามวิธีการของ kochba et al . ( 1977 ) หน่วยหนึ่งของกิจกรรมที่ถูกกำหนดไว้เป็นฝักเพิ่มขึ้น 0.01 ในการดูดกลืนแสงต่อนาทีที่ 460 nm ภายใต้เงื่อนไขการทดสอบ

โปรตีนที่ถูกกำหนดตามวิธีการของแบรดฟอร์ด ( 1976 ) , กับเซรั่ม วัวเป็นมาตรฐาน

2.8 .

ทางสถิติการวิเคราะห์