MATERIALS AND METHODSChemicals. (+)

MATERIALS AND METHODS
Chemicals. (+)-Catechin, (+)-gallocatechin, (-)-catechin gallate,(-)-gallocatechin gallate, (-)-epicatechin, (-)-epicatechin gallate, (-)-epigallocatechin, and (-)-epigallocatechin gallate were purchased from Funakoshi Co. Ltd. (Tokyo, Japan), and their purities were more than 98%. Oolongtheanin gallate and dehydrodicatechin A were enzymati-cally synthesized as described below. Oolong tea polymerized poly-phenols (OTPP) were fractionated from oolong tea by HPLC. Other dimeric polyphenols used in this study had previously been isolated from green tea, oolong tea, and black tea (11-18). And purities of dimeric polyphenols were more than 90% in HPLC. The structures of the monomeric and dimeric polyphenols are shown in Figure 1. Tannase was purchased from Funakoshi Co. (Tokyo, Japan). Pancreatic lipase(type VI-S, from porcine pancreas) and 4-methylumbelliferyl oleate were purchased from Sigma Chemical Co. (St. Louis, MO). The other reagents were of analytical grade, and all solvents used were of HPLC grade (Nacalai Tesque Co., Kyoto, Japan).Preparation of OTPP. Ten grams of oolong tea leaves was steeped in 1.5 L of boiling water for 5 min. After filtration, the extract was lyophilized, and the yield of the dry matter was about 20% of the weight of the leaves. The concentrations of flavanols (flavan-3-ols and flavan-3-ol gallate esters) in the extract were analyzed by HPLC with UV detection at 280 nm. The analysis was performed with a reversed-phase HPLC column (Develosil C30-UG-5, 4.6 mm × 150 mm, Nomura Chemical Co., Aichi, Japan) at 40 °C. Compounds were eluted (solventA, 0.05% trifluoroacetic acid, 10% acetonitrile in water; solvent B,0.05% trifluoroacetic acid, 80% acetonitrile in water) at a flow rate of 1 mL/min using a gradient program (solvent B content: isocratic elution of 0% for 5 min, gradient elution of 0-8% for 3 min, gradient elution of 8-10% for 3 min, isocratic elution of 10% for 9 min, gradient elution of 10-100% for 1 min, and isocratic elution of 100% for 9 min). The quantitative analysis of flavanols was made using standard calibration curves for authentic specimens using a 280 nm area, and OTPP was quantified using a calibration curve that was derived from polyphenols isolated from oolong tea by HPLC. The chromatograph of oolong tea extract is shown in Figure 2.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

วัสดุและวิธีการ
เคมี ()-สารสกัดจาก, ()-gallocatechin, (-) -สารสกัดจาก gallate (-) -gallocatechin gallate, (-) -epicatechin, (-) -epicatechin gallate, (-) -epigallocatechin (-) และ -epigallocatechin gallate ซื้อจาก Funakoshi จำกัด (โตเกียว ญี่ปุ่น), และ purities ของพวกเขาได้มากกว่า 98% Oolongtheanin gallate และ dehydrodicatechin A ได้ enzymati cally สังเคราะห์ตามที่อธิบายไว้ด้านล่าง Oolong ชา polymerized โพลี-phenols (OTPP) ได้แบ่งจาก oolong ชา โดย HPLC โพลี dimeric อื่น ๆ ที่ใช้ในการศึกษานี้ได้ก่อนหน้านี้ถูกแยก จากชาเขียว oolong ชา ชาดำ (11-18) และกว่า 90% ใน HPLC มี purities โพลี dimeric โครงสร้างของโพลีฟีน monomeric และ dimeric จะแสดงในรูปที่ 1 Tannase ที่ซื้อจาก บริษัท Funakoshi (โตเกียว ญี่ปุ่น) ตับอ่อนเอนไซม์ไลเปส (ประเภท VI-S จากตับอ่อนช่วง) และ 4-methylumbelliferyl oleate ถูกซื้อจาก บริษัทเคมีซิก (St. Louis, MO) Reagents อื่น ๆ ถูกเกรดวิเคราะห์ และหรือสารทำละลายทั้งหมดที่ใช้ก็เกรด HPLC (Nacalai Tesque Co. เกียวโต ญี่ปุ่น)การเตรียม OTPP 10 กรัมของใบชา oolong ถูกดองต้มน้ำ 5 นาที 1.5 L หลังจากกรอง การดึงข้อมูลเป็น lyophilized แล้วผลตอบแทนเรื่องแห้งได้ประมาณ 20% ของน้ำหนักของใบ ความเข้มข้นของ flavanols (flavan-3-ols และ flavan-3-ol gallate esters) ในการดึงข้อมูลได้วิเคราะห์ ด้วย HPLC กับตรวจจับ UV ที่ 280 nm ทำการวิเคราะห์ ด้วยคอลัมน์ HPLC ขั้นตอนย้อนกลับ (Develosil C30-ยูจี-5, 4.6 มม. × 150 มม. พัฒนสินเคมีจำกัด ไอจิ ญี่ปุ่น) ที่ 40 องศาเซลเซียส สารมี eluted (solventA, 0.05% trifluoroacetic กรด acetonitrile 10% ในน้ำ ตัวทำละลายกรด trifluoroacetic B,0.05%, acetonitrile 80% ในน้ำ) ที่อัตราการไหล 1 มิลลิลิตร/นาทีโดยใช้โปรแกรมไล่ระดับสี (ตัวทำละลาย B เนื้อหา: elution isocratic คิด 0% สำหรับ 5 นาที elution ไล่ระดับ 0 8% สำหรับ 3 นาที elution ไล่ระดับ 8-10% ใน 3 นาที elution isocratic คิด 10% ในนาทีที่ 9, elution ไล่ระดับ 10-100% ใน 1 นาที และ elution isocratic คิด 100% ในนาทีที่ 9) ทำการวิเคราะห์เชิงปริมาณของ flavanols ใช้เส้นโค้งมาตรฐานเทียบไว้เป็นตัวอย่างอาหารที่ใช้พื้นที่ 280 nm และ OTPP ถูก quantified โดยใช้เส้นโค้งเทียบที่รับมาจากโพลีฟีนที่แยกต่างหากจาก oolong ชา โดย HPLC Chromatograph ของสารสกัดจากชา oolong จะแสดงในรูปที่ 2

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

วัสดุและวิธีการ
เคมี (+)-Catechin, (+) gallocatechin, (-)-catechin ที่ gallate - gallate-gallocatechin, () (-)-epicatechin, (-)-epicatechin gallate, (-)-epigallocatechin และ (-) - epigallocatechin gallate ซื้อมาจากโกชิ จำกัด (โตเกียวประเทศญี่ปุ่น) และ purities ของพวกเขามากขึ้นกว่า 98% gallate Oolongtheanin และ dehydrodicatechin ถูกสังเคราะห์ enzymati-ถอนรากถอนโคนตามที่อธิบายไว้ด้านล่าง ชาอูหลง polymerized โพลีฟีนอล-(OTPP) มีส่วนที่เหลือจากชาอูหลงโดย HPLC โพลีฟีน dimeric อื่น ๆ ที่ใช้ในการศึกษาครั้งนี้ได้รับก่อนหน้านี้ที่แยกได้จากชาเขียวชาอูหลงและชาดำ (11-18) และ purities ของโพลีฟีน dimeric ได้มากขึ้นกว่า 90% ใน HPLC โครงสร้างของโพลีฟีน monomeric และ dimeric จะแสดงในรูปที่ 1. Tannase ซื้อจากโกชิ จำกัด (โตเกียวประเทศญี่ปุ่น) ไลเปสตับอ่อน (ประเภท VI-S, จากตับอ่อนหมู) และ 4 methylumbelliferyl oleate ซื้อมาจากซิกเคมี จำกัด (เซนต์หลุยส์) สารเคมีอื่น ๆ ของนักเรียนชั้นประถมศึกษาวิเคราะห์และตัวทำละลายที่ใช้เป็นเกรด HPLC (Nacalai Tesque จำกัด , เกียวโต, ญี่ปุ่น). การเตรียม OTPP สิบกรัมของใบชาอูหลงเป็นที่แพร่หลายใน 1.5 ลิตรของน้ำเดือดเป็นเวลา 5 นาที หลังจากการกรองสารสกัดที่แห้งและผลผลิตของวัตถุแห้งประมาณ 20% ของน้ำหนักของใบ ความเข้มข้นของ flavanols (flavan-3-OLS และ flavan-3-ol เอสเทอ gallate) ในสารสกัดจากการวิเคราะห์โดยวิธี HPLC มีการตรวจสอบรังสียูวีที่ 280 นาโนเมตร การวิเคราะห์ได้ดำเนินการกับคอลัมน์ HPLC เฟสตรงกันข้าม (Develosil C30-UG-5, 4.6 มม. × 150 มม. , โนมูระ จำกัด เคมี, จังหวัดไอจิ, ญี่ปุ่น) ที่ 40 ° C สารที่ถูกชะ (solventA กรด 0.05% Trifluoroacetic 10% acetonitrile ในน้ำเป็นตัวทำละลาย B, กรด Trifluoroacetic 0.05%, 80% acetonitrile ในน้ำ) ที่อัตราการไหลของ 1 มิลลิลิตร / นาทีใช้โปรแกรมลาด (เนื้อหา B ตัวทำละลาย: isocratic elution 0% เป็นเวลา 5 นาที, elution ลาด 0-8% เป็นเวลา 3 นาที, elution ลาด 8-10% เป็นเวลา 3 นาที, elution isocratic จาก 10% เป็นเวลา 9 นาที elution ลาดของ 10-100% เป็นเวลา 1 นาที และ elution isocratic 100% 9 นาที) การวิเคราะห์เชิงปริมาณของ flavanols ถูกสร้างขึ้นมาโดยใช้เส้นโค้งการสอบเทียบมาตรฐานสำหรับตัวอย่างที่แท้จริงของการใช้พื้นที่ 280 นาโนเมตรและ OTPP ถูกวัดโดยใช้เส้นโค้งการสอบเทียบที่ได้มาจากโพลีฟีนที่แยกได้จากชาอูหลงโดย HPLC Chromatograph ของสารสกัดจากชาอูหลงที่แสดงในรูปที่ 2

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

วัสดุและวิธีการ
สารเคมี ( ) - ( ) - gallocatechin Catechin , ( - ) - แคทิชินแกลเลต , ( - ) - gallocatechin แกลเลต , ( - ) - แคเทชิน ( - - ) ( - ) - แคเทชินศึกษา epigallocatechin และ ( - ) - gallate ซื้อมาจากจาก จำกัด ( โตเกียว , ญี่ปุ่น ) และความบริสุทธิ์ได้มากกว่า 98%oolongtheanin และศึกษา dehydrodicatechin ได้ enzymati คอลลี่ได้ตามที่อธิบายไว้ด้านล่าง ชาอู่หลง polymerized ลุกลี้ลุกลน ( otpp ) เป็นลำดับจากชาอูหลง 2 . โพลีฟีนอล ท้องเฟ้ออื่น ๆที่ใช้ในการศึกษาก่อนหน้านี้ได้ถูกแยกจาก ชาเขียว ชาอู่หลง และชาดำ ( 11-18 ) ความบริสุทธิ์ของโพลีฟีนอล และท้องเฟ้อมากกว่า 90% ใน HPLC .โครงสร้างของ polyphenols วิธีท้องเฟ้อจะแสดงในรูปที่ 1 แทนเนสถูกซื้อจากจากบริษัท ( โตเกียว , ญี่ปุ่น ) ตับอ่อนเอนไซม์ไลเปส ( ประเภท vi-s จากจากตับอ่อน ) และ 4-methylumbelliferyl โอลีเอท ซื้อมาจาก Sigma Chemical Co . ( St . Louis , MO ) ส่วนอื่น ๆของสารเคมีอิตเทอร์เบียม และสารละลายที่ใช้เป็นเกรด HPLC ( nacalai tesque Co . , เกียวโต , ญี่ปุ่น )การเตรียม otpp . 10 กรัมของใบชาได้แพร่หลายใน 1.5 ลิตรของน้ำเดือด 5 นาทีหลังจากการกรองสาร คือ แห้ง และผลผลิตของวัตถุแห้งประมาณ 20 % ของน้ำหนักของใบ ความเข้มข้นของ ( flavan-3-ols flavan-3-ol flavanols และแกลเลตเอสเทอร์ ) ในการแยกวิเคราะห์โดย HPLC ตรวจจับยูวีที่ 280 nm .ผลจากการวิเคราะห์ด้วย HPLC คอลัมน์ reversed-phase ( develosil c30-ug-5 4.6 มิลลิเมตร× 150 มิลลิเมตร โนมูระ Chemical Co . , ไอจิ , ญี่ปุ่น ) ที่ 40 ° C เป็นสารตัวอย่าง ( solventa 0.05 % กรดไตรฟลูออโรอะซิติก , Acetonitrile 10% ในน้ำ สารละลาย B , 0.05 % กรดไตรฟลูออโรอะซิติก , Acetonitrile 80% ในน้ำ ) ที่ อัตราการไหล 1 มิลลิลิตรต่อนาทีโดยใช้โปรแกรมไล่ระดับ ( ตัวทำละลาย B เนื้อหา :เจ๊สัว Isocratic 0 % เป็นเวลา 5 นาทีการใช้ 0-8 % นาน 3 นาทีการใช้ 8-10 % นาน 3 นาที ใช้ Isocratic 10% 9 นาที , การไล่ระดับสี ( 10-100 % นาน 1 นาที และใช้ Isocratic 100% 9 min ) การวิเคราะห์เชิงปริมาณได้จากการสอบเทียบมาตรฐาน flavanols เส้นโค้งกับชิ้นงานจริงโดยใช้พื้นที่ 280 นาโนเมตรotpp quantified และถูกใช้เป็นรูปโค้ง ที่ได้มาจาก โพลีฟีนอล ที่แยกได้จากชาอูหลง 2 . โดยโครมาโตกราฟของสารสกัดจากชาอูหลง จะแสดงในรูปที่ 2