Transcriptional activator–like effe

Transcriptional activator–like effectors and CRISPR/Cas systems. Accomplishing gene-
specific manipulation of DNA methylation status requires the ability to target specific components
of DNA methylation machinery to selected sequences of DNA. The ability to target DNA locations
based on sequence alone has been an area of intense focus in genetic engineering and has recently
been described with two unique sets of rapidly evolving tools. The first involves transcriptional
activator–like effectors, or TALEs, which are short (33–34-amino-acid) bacterial proteins that,
because of variable diresidues within the protein sequence, each bind to a specific nucleotide in
DNA. Linking these short sequences together in a customized arrangement can therefore generate
sequence-specific binding properties and serve as site-specific genomic anchor points (89–92).
Using this approach, recent work by Zhang and colleagues (93) describes a robust, versatile tool that
employs TALEs to target specific transcriptional machinery to selected genomic sites to modulate
gene expression. For example, TALEs targeted to various gene loci have been shown to induce
robust gene expression both in vitro and in vivo when fused to a generic transcriptional activator
(93). Importantly, this activator can be replaced with epigenetic modifiers (so-called epi-TALEs)
to cause histone deacetylation and gene repression (93). Thus, one possibility for the manipulation
of DNA methylation at specific gene targets is to fuse DNA methyltransferases (e.g., DNMT3a)
or mC hydroxylases (e.g., Tet1, Tet2, or Tet3) to customized TALEs, thereby targeting these
proteins directly to selected DNA sites (Figure 3). The feasibility of this approach has already been
demonstrated with TALE-Tet1 fusion proteins, which achieved nucleotide specific demethylation
at selected gene targets (94).

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

effectors กระตุ้นเช่นการถอดรหัสและ CRISPR / ระบบ Cas บรรลุ gene-
speci สายการจัดการคสถานะดีเอ็นเอ methylation
ต้องใช้ความสามารถในการกำหนดเป้าหมายส่วนประกอบคระบุไว้ของเครื่องจักรmethylation ดีเอ็นเอลำดับที่เลือกของดีเอ็นเอ ความสามารถในการกำหนดเป้าหมายสถานดีเอ็นเอตามลำดับคนเดียวที่ได้รับพื้นที่ของการมุ่งเน้นที่รุนแรงในพันธุวิศวกรรมและเมื่อเร็ว ๆ นี้ได้รับการอธิบายด้วยสองชุดที่ไม่ซ้ำกันของเครื่องมือการพัฒนาอย่างรวดเร็ว แรกสายที่เกี่ยวข้องกับการถอดรหัสeffectors กระตุ้นเหมือนหรือนิทานที่มีระยะสั้น (33-34-กรดอะมิโน) โปรตีนจากแบคทีเรียที่เพราะdiresidues ตัวแปรที่อยู่ในลำดับโปรตีนแต่ละผูกไว้กับเบื่อหน่าย speci สายคในดีเอ็นเอ การเชื่อมโยงลำดับสั้นเหล่านี้ร่วมกันในการจัดเรียงที่กำหนดเองจึงสามารถสร้างสายลำดับ speci คคุณสมบัติผูกพันและทำหน้าที่เป็นไฟเว็บไซต์ speci จุดยึดจีโนมค (89-92). ใช้วิธีนี้ในการทำงานที่ผ่านมาโดยจางและเพื่อนร่วมงาน (93) อธิบายที่มีประสิทธิภาพที่หลากหลายเครื่องมือที่มีพนักงานนิทานที่จะกำหนดเป้าหมาย speci สายคเครื่องจักรถอดรหัสจีโนมไปยังเว็บไซต์ที่เลือกที่จะปรับเปลี่ยนการแสดงออกของยีน ยกตัวอย่างเช่นนิทานกำหนดเป้าหมายไปยังตำแหน่งของยีนต่างๆที่ได้รับการแสดงที่จะทำให้เกิดการแสดงออกของยีนที่แข็งแกร่งทั้งในหลอดทดลองและในร่างกายเมื่อหลอมรวมไปกระตุ้นการถอดรหัสทั่วไป(93) ที่สำคัญการกระตุ้นนี้จะถูกแทนที่ด้วย ERS Modi สาย epigenetic (ที่เรียกว่า EPI-Tales) ที่จะทำให้เกิดสิกสโตนและการปราบปรามยีน (93) ดังนั้นหนึ่งความเป็นไปได้สำหรับการจัดการของดีเอ็นเอ methylation ที่เป้าหมายยีนไฟค speci คือการหลอมรวม methyltransferases ดีเอ็นเอ (เช่น DNMT3a) หรือ mC hydroxylases (เช่น Tet1, Tet2 หรือ Tet3) นิทานที่กำหนดเองจึงกำหนดเป้าหมายเหล่านี้โปรตีนโดยตรงไปยังเว็บไซต์ของดีเอ็นเอที่เลือก(รูปที่ 3) ความเป็นไปได้ของวิธีนี้ได้รับการแสดงให้เห็นถึงกับนิทาน-Tet1 โปรตีนฟิวชั่นที่ประสบความสำเร็จเบื่อหน่าย speci สายค demethylation ที่เป้าหมายที่เลือกยีน (94)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ม– particle เช่นอีกครั้งหนึ่ง และระบบ crispr / CAS ยีน -
กาาจัดการของ DNA methylation สถานะ C จึงต้องใช้ความสามารถในการถ่ายทอดเป้าหมายประเภท C ส่วนประกอบของ DNA methylation
เครื่องจักรเลือกลำดับของดีเอ็นเอ ความสามารถในการกำหนดเป้าหมายของดีเอ็นเอสถานที่
ตามลำดับคนเดียวได้รับพื้นที่เข้มเน้นทางพันธุวิศวกรรมและเพิ่ง
ถูกอธิบายไว้สองชุดเฉพาะของการพัฒนาอย่างรวดเร็วเครื่องมือ จึงเกี่ยวข้องกับการกระตุ้น– particle RST
ชอบอีกครั้งหนึ่ง หรือนิทานที่สั้น ( 33 - 34 กรดอะมิโนโปรตีนแบคทีเรียที่
เพราะตัวแปร diresidues ภายในลำดับโปรตีนแต่ละประเภทจึงผูกกับลำดับเบสในดีเอ็นเอ C
. การเชื่อมโยงลำดับสั้นเหล่านี้เข้าด้วยกันในการจัด เอง จึงสามารถสร้าง
ลำดับประเภท คุณสมบัติ และหน้าที่ผูกพันจึง C เป็นเว็บไซต์ประเภทจึง C ที่มีจุดยึด ( 89 - 92 )
โดยใช้วิธีการนี้ ผลงานล่าสุดโดย Zhang และเพื่อนร่วมงาน ( 93 ) อธิบายประสิทธิภาพ , เครื่องมืออเนกประสงค์ที่ใช้นิทาน
เป้าหมาย speci จึงลองเลือก C เครื่องจักรสร้างเว็บไซต์ที่จะผัน
การแสดงออกของยีน ตัวอย่างนิทานเป้าหมายของยีนต่างๆได้รับการแสดงเพื่อก่อให้เกิด
การแสดงออกของยีนที่แข็งแกร่งทั้งในหลอดทดลองและในสัตว์ทดลอง เมื่อผสมกับ
Activator particle ทั่วไป ( 93 ) ที่สำคัญ การกระทำนี้จะถูกแทนที่ด้วย Epigenetic Modi ERS ( นิทานจึงเรียกว่า EPI )
ให้ช่วยเตรียมการ และยีน ( 93 ) ดังนั้น ความเป็นไปได้สำหรับการจัดการของ methylation ดีเอ็นเอที่ speci
c ยีนเป้าหมาย ฟิวส์จึง methyltransferases ดีเอ็นเอ ( เช่น dnmt3a )
หรือพิธีกร hydroxylases ( เช่น tet1 tet2 , หรือ tet3 ) เพื่อปรับแต่งนิทาน ซึ่งโปรตีนเหล่านี้ได้โดยตรงเพื่อเลือกเป้าหมาย
เว็บไซต์ดีเอ็นเอ ( รูปที่ 3 ) ความเป็นไปได้ของวิธีการนี้ได้ถูก
tale-tet1 ฟิวชั่นให้กับโปรตีน ซึ่งได้รับถ่ายทอดยีนประเภท C demethylation
เลือกยีนเป้าหมาย
( 94 )