Explant disinfection and establishi

Explant disinfection and establishing of axenic cultures of Huperzia selago
Initial experiments in this study demonstrated that methods
commonly used to disinfect plant material prior to establishing
in vitro cultures of angiosperms were ineffective in trials
to establish axenic cultures of H. selago [12,29]. According to
the literature, H. selago is a species colonized by mycorrhizal
and endophytic fungi and bacteria [25,32–35]. Exophytes
(epiphytes) have been found on the surface of leaf epidermis
while endophytes have been observed inside the organs, tissues
and cells of gametophytes and sporophytes – in the mesophyll,
intercellular spaces of the primary cortex and in the cells of conducting
tissues [32–37]. That is why it was necessary to develop
own methods of plant material disinfection. For that purpose
various methods of surface and internal disinfection were tried
using different chemicals, altering the order at which they were
applied and the duration of explant exposure. The ultimately
developed method, based on earlier experiments, employed in
this study is highly effective and eliminates most epiphytic and
endophytic organisms and at 4–8 weeks of culture up to 90%
of explants did not show any signs of contamination [12,29].
The decontamination process was in two stages and consisted
of surface and internal disinfection. In stage one, the explants
were rinsed in a stream of tap water for 5 minutes, next soaked
in water with the detergent Tween®20 (0.1% v/w) for another
5 minutes and then underwent surface disinfection by bathing
in the following solutions: 70% ethyl alcohol for 1 minute, 5%
ACE (Procter&Gamble) in H2
O (1:5 v/v) for 10 minutes, and
7% hydrogen peroxide (v/v) for 10 minutes. In stage 2 (internal
disinfection), the plant material was rinsed several times in
sterile distilled water and transferred onto sterile Petri dishes
lined with filter paper moistened with tap water to which
Plant Preservative Mixture™ (PPM™; Plant Cell Technology,
Washington) 10 ml/l was added. After such pretreatment, the
bulbils were incubated for 3–4 weeks in a phytotron, at 18 ±1°C
(day) and 16 ±1°C (night), in light at 100 μM m−2 s−1 and 14 h
photoperiod. After incubation young sporophytes growing
from the bulbils were transferred on to Petri dishes (Fig. 2) or
into 10-ml Erlenmeyer flasks which contained suitable culture
media with the addition of PPM™ 2 ml/l.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

Explant ฆ่าเชื้อและสร้างวัฒนธรรม axenic ของ Huperzia selagoการทดลองเริ่มต้นในการศึกษานี้แสดงที่วิธีโดยทั่วไปใช้ในการกำจัดพืชวัสดุก่อนสร้างในวัฒนธรรมของ angiosperms มีผลในการทดลองการสร้างวัฒนธรรม axenic ของ H. selago [12,29] ตามที่วรรณกรรม H. selago เป็นชนิดยึดครอง โดย mycorrhizalและ endophytic เชื้อราและเชื้อแบคทีเรีย [25,32-35] Exophytesพบบนพื้นผิวของหนังกำพร้าใบไม้ (เลี้ยง)ในขณะที่ endophytes มีการตรวจสอบภายในอวัยวะ เนื้อเยื่อและเซลล์ของ gametophytes และ sporophytes – ใน mesophyllช่องว่าง intercellular cortex หลัก และ ในเซลล์ดำเนินเนื้อเยื่อ [32 – 37] นั่นคือเหตุผลว่าจำเป็นในการพัฒนาวิธีฆ่าเชื้อวัสดุโรงงานเอง สำหรับวัตถุประสงค์นั้นมีพยายามฆ่าเชื้อพื้นผิว และภายในวิธีการต่าง ๆใช้สารเคมีต่าง ๆ การเปลี่ยนแปลงใบสั่งที่พวกเขาใช้ และระยะเวลาของการสัมผัส explant ในที่สุดพัฒนาวิธี ยึดการทดลองก่อนหน้านี้ การจ้างงานในการศึกษานี้จะมีประสิทธิภาพสูง และลดสุด epiphytic และชีวิต endophytic และ 4 – 8 สัปดาห์วัฒนธรรมถึง 90%ของ explants ไม่แสดงสัญญาณใด ๆ ปนเปื้อน [12,29]การ decontamination ในขั้นที่สอง และประกอบด้วยของฆ่าเชื้อพื้นผิว และภายใน ในระยะหนึ่ง ใน explantsrinsed ในกระแสของน้ำประปา 5 นาที ถัดไป ที่เปี่ยมล้นไปด้วยในน้ำผงซักฟอก Tween ® 20 (0.1% v/w) อื่น5 นาที และรับการฆ่าเชื้อที่ผิว ด้วยการอาบน้ำในการแก้ไขปัญหาต่อไปนี้: 70% เอทิลแอลกอฮอล์ 1 นาที 5%เอส (พรอค) ใน H2O (1:5 v/v) 10 นาที และ7% ไฮโดรเจนเพอร์ออกไซด์ (v/v) 10 นาที ในขั้นตอนที่ 2 (ภายในฆ่าเชื้อ), วัสดุโรงงานถูก rinsed หลายครั้งในใส่น้ำกลั่น และโอนย้ายไปยังจาน Petri กอซเต็มไป ด้วยกระดาษกรองที่ moistened กับน้ำประปาที่โรงงานผลิต Preservative ผสม™ (PPM ™ เทคโนโลยีเซลล์พืชวอชิงตัน) เพิ่ม 10 ml/l หลังจากนั้น pretreatment การbulbils ได้ incubated สำหรับ 3-4 สัปดาห์ในการ phytotron ที่ 18 ±1 ° C(วัน) และ 16 ±1 ° C (กลางคืน), แสงที่ 100 μM m−2 s−1 14 hชั่วโมง หลังจากฟักตัวอ่อน sporophytes เติบโตbulbils ถูกโอนย้ายไปยังจาน Petri (Fig. 2) หรือลงในน้ำ 10 มล. Erlenmeyer ซึ่งประกอบด้วยวัฒนธรรมที่เหมาะสมสื่อกับการเพิ่มของ PPM ™ 2 ml/l

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ฆ่าเชื้อชิ้นส่วนและการสร้างวัฒนธรรมปลอดเชื้อของ Huperzia selago
ทดลองเริ่มต้นในการศึกษานี้แสดงให้เห็นว่าวิธีการ
ที่ใช้กันทั่วไปในการฆ่าเชื้อวัสดุปลูกก่อนที่จะมีการสร้าง
วัฒนธรรมในการเพาะเลี้ยงเนื้อเยื่อของพืชดอกที่ได้รับไม่ได้ผลในการทดลอง
ที่จะสร้างวัฒนธรรมที่ปลอดเชื้อเอช selago [12,29] ตาม
วรรณคดีเอช selago เป็นสายพันธุ์อาณานิคมโดยไมคอไรซา
และเชื้อราเอนโดไฟต์และแบคทีเรีย [25,32-35] Exophytes
(epiphytes) ถูกพบบนพื้นผิวของหนังกำพร้าใบ
ในขณะที่ได้รับการคัดสังเกตภายในอวัยวะเนื้อเยื่อ
และเซลล์ของแกและสปอร์ - ใน mesophyll,
ช่องว่างระหว่างเซลล์ของเยื่อหุ้มสมองหลักและในเซลล์ของการดำเนิน
เนื้อเยื่อ [32 37] นั่นคือเหตุผลที่มันเป็นสิ่งจำเป็นในการพัฒนา
วิธีการของตัวเองของการฆ่าเชื้อวัสดุปลูก เพื่อวัตถุประสงค์ที่
วิธีการต่างๆของพื้นผิวและการฆ่าเชื้อโรคภายในกำลังพยายาม
ใช้สารเคมีที่แตกต่างกัน, การแก้ไขเพื่อที่พวกเขาจะถูก
นำมาใช้และระยะเวลาของการเปิดรับชิ้นส่วน ในที่สุด
วิธีการพัฒนาอยู่บนพื้นฐานของการทดลองก่อนหน้านี้ลูกจ้างใน
การศึกษาครั้งนี้มีประสิทธิภาพสูงและกำจัดส่วนใหญ่อิงอาศัยและ
ชีวิตเอนโดไฟต์และใน 4-8 สัปดาห์ของวัฒนธรรมได้ถึง 90%
ของชิ้นส่วนไม่ได้แสดงสัญญาณใด ๆ ของการปนเปื้อน [12,29] .
ขั้นตอนการปนเปื้อนอยู่ในขั้นตอนที่สองและมี
พื้นผิวและฆ่าเชื้อภายใน ในขั้นตอนหนึ่งชิ้น
ถูกล้างในกระแสของน้ำประปาเป็นเวลา 5 นาทีต่อไปแช่
ในน้ำที่มีTween®20ผงซักฟอก (0.1% ปริมาตร / w) อีก
5 นาทีและจากนั้นได้รับการฆ่าเชื้อพื้นผิวโดยการอาบน้ำ
ในการแก้ปัญหาดังต่อไปนี้ : เอทิลแอลกอฮอล์ 70% เป็นเวลา 1 นาที, 5%
ACE (Procter & Gamble) ใน H2
O (1: 5 v / v) เป็นเวลา 10 นาทีและ
7% ไฮโดรเจนเปอร์ออกไซด์ (v / v) เป็นเวลา 10 นาที ในขั้นตอนที่ 2 (ภายใน
การฆ่าเชื้อโรค) วัสดุจากพืชได้รับการล้างหลายครั้งใน
น้ำกลั่นผ่านการฆ่าเชื้อและโอนไปยังจานเลี้ยงเชื้อหมัน
เรียงรายไปด้วยกระดาษกรองชุบน้ำประปาที่
โรงงานผสมสารกันบูด™ (PPM ™โรงเทคโนโลยีเซลล์,
วอชิงตัน) 10 มิลลิลิตร / ลิตรถูกเพิ่มเข้ามา หลังจากปรับสภาพดังกล่าว
bulbils ถูกบ่มเป็นเวลา 3-4 สัปดาห์ใน phytotron ที่ 18 ± 1 ° C
(วัน) และ 16 ± 1 ° C (คืน) อยู่ในแสงไฟที่ 100 ไมครอน M-2 s-1 และ 14 ชั่วโมง
ช่วงแสง หลังจากที่สปอร์หนุ่มบ่มที่เพิ่มขึ้น
จาก bulbils ถูกถ่ายโอนไปยังจานเลี้ยงเชื้อ (รูปที่. 2) หรือ
เข้าไปในขวดรูปกรวย 10 มล. ซึ่งมีวัฒนธรรมที่เหมาะสม
สื่อด้วยนอกเหนือจาก PPM ™ 2 มิลลิลิตร / ลิตร

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ฆ่าเชื้อต่อและการสร้างวัฒนธรรม axenic ของฮิวเปอซี่ selago
เริ่มต้นการทดลองในการศึกษานี้แสดงให้เห็นว่าวิธีการที่ใช้กันทั่วไปเพื่อฆ่าเชื้อวัสดุพืช

ก่อนที่จะสร้างวัฒนธรรมในหลอดทดลองของพืชดอกมีประสิทธิภาพในการทดลอง
สร้างวัฒนธรรม axenic . selago [ 12,29 ] ตามวรรณคดี
H selago เป็นเมืองขึ้น
คอร์ไรซาชนิดและ ราและแบคทีเรีย 25,32 ) [ 35 ] exophytes
( อาศัย ) ถูกพบบนพื้นผิวของใบ ใบ
ในขณะที่ endophytes ได้รับการตรวจสอบภายใน อวัยวะ เนื้อเยื่อ และเซลล์ของ gametophytes
sporophytes –และในเมโซฟิลล์
intercellular , ช่องว่างของเปลือกหลักและในเซลล์เนื้อเยื่อของการทํา
[ 32 - 37 ] นั่นคือเหตุผลที่มันเป็นสิ่งจำเป็นที่จะพัฒนา
วิธีการฆ่าเชื้อวัสดุปลูกเอง สำหรับวัตถุประสงค์
วิธีการต่าง ๆ ของผิวและฆ่าเชื้อโรคภายในพยายาม
ใช้สารเคมีที่แตกต่างกันการเปลี่ยนแปลงเพื่อที่พวกเขา
ประยุกต์และระยะเวลาต่อการสัมผัส ที่สุด
วิธีที่พัฒนาขึ้นบนพื้นฐานของการทดลองก่อนหน้านี้ โดยในการศึกษานี้มีประสิทธิภาพสูง

ส่วนใหญ่และขจัดและอิงอาศัยราเอนโดไฟต์ที่ 4 – 8 สัปดาห์ในวัฒนธรรมถึง 90%
ของอาหารไม่ได้แสดงสัญญาณใด ๆของการปนเปื้อน [ 12,29 ] .
กระบวนการขจัดสิ่งปนเปื้อนอยู่ใน 2 ขั้นตอน และประกอบด้วย
ของพื้นผิวและฆ่าเชื้อโรคภายใน ในขั้นตอนที่หนึ่ง เนื้อเยื่อ
ถูกล้างในลำธารน้ำ 5 นาที ต่อไปแช่ในน้ำผงซักฟอกด้วย
® Tween 20 ( 0.1 % V / w ) อีก
5 นาทีและจากนั้นได้รับการฆ่าเชื้ออะไรผิวโดยการอาบน้ำ
ในการแก้ปัญหาต่อไปนี้ : แอลกอฮอล์ 70% เอธิล 1 นาที , 5 %
เอซ ( เอกสาร&เล่นการพนัน ) H2
o ( 1 : 5 v / v ) เป็นเวลา 10 นาทีและ
7 % ไฮโดรเจนเปอร์ออกไซด์ ( v / v ) เป็นเวลา 10 นาที ในขั้นตอนที่ 2 ( ฆ่าเชื้อโรคภายใน
) , วัสดุโรงงานล้างหลาย ๆครั้งใน
เป็นหมันน้ำกลั่นและโอนไปยังจาน Petri เป็นหมัน
เรียงรายไปด้วยกระดาษกรองชุบน้ำที่ผสมสารกันบูด ™
พืช ( ppm ™ ; เซลล์พืช เทคโนโลยี
วอชิงตัน ) 10 มิลลิลิตร / ลิตร ได้เพิ่ม หลังการบำบัด ,
bulbils ถูกบ่ม 3 – 4 สัปดาห์ใน phytotron ที่ 18  ± 1 ° C
( วัน ) และ 16 ± 1 ° C ( กลางคืน ) ในแสงที่ 100 μ m m − 2 s − 1 และ 14 ไหม H
แสง . หลังจากบ่มเพาะเด็ก sporophytes เติบโต
จาก bulbils ถูกโอนไปยังจานเลี้ยงเชื้อ ( รูปที่ 2 ) หรือออกเป็น 10 ml ขวด
เออร์เลนเมเยอร์ ซึ่งมีวัฒนธรรมสื่อ
เหมาะกับการเพิ่มของ ppm ™ 2 มล. / ล.