2.4. 2-D DIGE analysis2-D DIGE gels

2.4. 2-D DIGE analysis
2-D DIGE gels of each group of T and NT soybean leaf protein
species were prepared in quadruplicate. Protein samples were
labelled according to the manufacturer's protocol for minimal
labelling (GE Healthcare). The precipitate of the protein was
resolubilised in a lysis buffer (7 M urea, 2 M thiourea, 4% (m/v)
CHAPS, and 20 mM Tris, pH 8.8, without reducing agent), prior
to dye labelling. For labelling with CyDye DIGE Fluor minimal
dyes, 50 μg (pH range 4–7) of each sample was labelled with
400 pM CyDye DIGE Fluor minimal dyes (GE Healthcare) and
incubated on ice in the dark for 30 min. For each replicate
reaction, one sample was labelled with Cy3, the other sample
with Cy5, and the internal standard with Cy2. Two T and two
NT leaf samples were labelled with Cy5 and Cy3, respectively.
For the third replicate, the CyDyes were swapped to correct for
any bias introduced by the different fluorescence characteristics
of acrylamide at the different excitation wavelengths of
Cy3 and Cy5. The internal standard, labelled with Cy2,
consisted of a pooled sample comprised of equal amounts of
each T and NT leaf sample used for each quadruplicate. The
Cy2 dye itself is considered to be a normaliser [23], increasing
the statistical confidence for quantification among different
gels. The reactions were quenched by adding 1 μL of 10 mM
lysine followed by incubation for an additional 10 min. Each
labelled protein sample was diluted with rehydration

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.4. 2-D DIGE วิเคราะห์เจ DIGE 2 D ของแต่ละกลุ่มของโปรตีนใบถั่วเหลือง T และ NTสายพันธุ์เตรียมไว้ใน quadruplicate ตัวอย่างโปรตีนถูกฉลากตามคอของผู้ผลิตสำหรับน้อยที่สุดติดฉลาก (GE สุขภาพ) ตะกอนของโปรตีนได้resolubilised ในบัฟเฟอร์ lysis (ยูเรีย 7 M, 2 M thiourea, 4% (m/v)CHAPS และ 20 มม.ทริ ค่า pH 8.8 ไม่ มีแทนลด), ก่อนการย้อมการติดฉลาก สำหรับติดฉลากด้วยฟลูออ DIGE CyDye น้อยที่สุดสีย้อม ฉลาก 50 ไมโครกรัม (ช่วง pH 4-7) ของแต่ละอย่างด้วย400 น.ฟลูออ DIGE CyDye น้อยสี (GE สุขภาพ) และได้รับการกกบนน้ำแข็งในมืด 30 นาที สำหรับจำลองแต่ละแบบปฏิกิริยา ฉลากอย่างหนึ่งกับ Cy3 ตัวอย่างCy5 และห้อง Cy2 มาตรฐานภายใน T สองและสองตัวอย่างใบ NT ถูกฉลาก Cy3 และ Cy5 ตามลำดับสำหรับการจำลองแบบสาม CyDyes ถูกสลับการแก้ไขสำหรับอคติใด ๆ จากลักษณะเรืองแสงแตกต่างกันของอะคริลาไมด์ที่ความยาวคลื่นกระตุ้นแตกต่างกันของCy3 และ Cy5 มาตรฐานภายใน ฉลากกับ Cy2ประกอบด้วยตัวอย่าง pooled ที่ประกอบด้วยจำนวนเท่ากันแต่ละ T และ NT ใบอย่างใช้สำหรับแต่ละ quadruplicate การCy2 ย้อมเองถือเป็นการให้ [23], เพิ่มความเชื่อมั่นทางสถิติสำหรับด้านในแตกต่างกันเจ ปฏิกิริยาได้ดับ โดยการเพิ่ม μL 1 10 มม.ไลซีนตาม ด้วยกกไข่สำหรับ 10 นาทีการเติมแต่ละตัวอย่างโปรตีนติดป้ายถูกเจือจาง ด้วยแร่

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.4 2-D วิเคราะห์ซิมบ
2 มิติเจลซิมบของแต่ละกลุ่ม T และ NT
ถั่วเหลืองโปรตีนใบชนิดที่ได้จัดทำขึ้นquadruplicate ตัวอย่างโปรตีนที่ถูกติดป้ายตามโปรโตคอลของผู้ผลิตที่น้อยที่สุดสำหรับการติดฉลาก(GE Healthcare) ตะกอนของโปรตีนที่ถูกresolubilised ในบัฟเฟอร์สลาย (7 M ยูเรีย 2 M thiourea, 4% (m / v) CHAPS และ 20 มิลลิ Tris ค่า pH 8.8 โดยไม่ต้องรีดิวซ์) ก่อนที่จะย้อมติดฉลาก สำหรับการติดฉลากที่มีซิมบ CyDye Fluor น้อยสี, 50 ไมโครกรัม (ช่วง pH 4-7) ของกลุ่มตัวอย่างแต่ละคนถูกกำกับด้วย400 CyDye นซิมบ Fluor สีน้อยที่สุด (GE Healthcare) และบ่มบนน้ำแข็งในความมืดเป็นเวลา 30 นาที สำหรับแต่ละซ้ำปฏิกิริยาหนึ่งตัวอย่างเป็นป้ายที่มี Cy3, ตัวอย่างอื่น ๆ ที่มี Cy5 และภายในที่มีมาตรฐาน CY2 สอง T และสองNT ตัวอย่างใบกำกับด้วย Cy5 และ Cy3 ตามลำดับ. สำหรับการทำซ้ำที่สาม CyDyes ถูกเปลี่ยนเพื่อแก้ไขสำหรับอคติใดๆ ที่นำมาใช้โดยลักษณะเรืองแสงที่แตกต่างกันของริลาไมด์ที่ความยาวคลื่นที่แตกต่างกันของการกระตุ้นCy3 และ Cy5 มาตรฐานภายในกำกับด้วย CY2, ประกอบด้วยตัวอย่าง pooled ประกอบด้วยปริมาณที่เท่ากันของแต่ละT และตัวอย่างใบ NT ใช้สำหรับแต่ละ quadruplicate ย้อม CY2 ตัวเองถือว่าเป็น normaliser [23] การเพิ่มความเชื่อมั่นทางสถิติสำหรับปริมาณที่แตกต่างกันในหมู่เจล ปฏิกิริยาถูกดับโดยการเพิ่ม 1 ไมโครลิตรของมิลลิ 10 ไลซีนตามด้วยการบ่มสำหรับอีก 10 นาที แต่ละตัวอย่างโปรตีนที่มีข้อความถูกเจือจางด้วยการคืน

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.4 . การวิเคราะห์ dige สองมิติ2 dige เจลของแต่ละกลุ่มและ NT ใบถั่วเหลืองโปรตีนชนิดที่เตรียมไว้ในประกอบด้วยสี่ส่วน . ตัวอย่างโปรตีน คือว่า ตามขั้นตอนของผู้ผลิตให้น้อยที่สุดการติดฉลาก ( GE Healthcare ) การตกตะกอนของโปรตีนคือresolubilised ในการสลายบัฟเฟอร์ ( 6 M ยูเรีย Thiourea , 2 ม. 4 % ( M / V )Chaps และ 20 มม. โดยพีเอช 8.8 , โดยไม่ต้องลดเจ้าหน้าที่ ) ก่อนย้อมติดฉลาก . สำหรับการติดฉลากด้วย cydye dige Fluor น้อยที่สุดสี , μ 50 กรัม ( pH ช่วงที่ 4 – 7 ) ของแต่ละตัวอย่างถูกป้ายด้วย400 00 cydye dige Fluor น้อยที่สุด ( GE Healthcare ) และสีย้อมเติมน้ำแข็งในที่มืดเป็นเวลา 30 นาที ทำซ้ำสำหรับแต่ละปฏิกิริยาหนึ่งตัวอย่างคือ labelled กับ cy3 ตัวอย่างอื่น ๆกับ cy5 และ Internal standard กับ cy2 . สองและสองจำนวนข้อความ cy5 NT ใบด้วย และ cy3 ตามลำดับครั้งที่สาม จําลอง , cydyes ถูกสลับที่ถูกต้องสำหรับอคติใด ๆนำโดยลักษณะการต่าง ๆของอะคริลาไมด์ที่ความยาวคลื่นกระตุ้นต่าง ๆและ cy3 cy5 . มาตรฐานภายใน cy2 labelled ด้วย ,ประกอบด้วยจำนวนรวมของปริมาณที่เท่ากันแต่ละที และ NT ใบวัตถุประสงค์แต่ละประกอบด้วยสี่ส่วน . ที่cy2 ย้อมเองถือว่าเป็น normaliser [ 23 ] เพิ่มความเชื่อมั่นทางสถิติสำหรับปริมาณของต่าง ๆเจล ปฏิกิริยาที่ถูกดับโดยการเพิ่ม 1 μ L 10 มม.ไลซีน ตามด้วยการทดสอบเพิ่มเติม 10 นาทีแต่ละข้อความตัวอย่างที่เจือจางด้วยศึกษาโปรตีน