A. Denaturing elution1. Place the t

A. Denaturing elution
1. Place the tube (from step 7 in "Immunoprecipitation of Target Antigen") on the
magnet and remove the supernatant.
2. Add 20 µL Elution Buffer, and 10 µL premixed NuPAGE® LDS Sample Buffer and
NuPAGE® Sample Reducing Agent (mixed as per manufacturer’s instructions).
3. Gently pipette to resuspend the Dynabeads®-Ab-Ag complex.
4. Heat for 10 min at 70ºC.
5. Place the tube on the magnet and load the supernatant/sample onto a gel.
Note: As an alternative, the Dynabeads®-Ab-Ag complex can be resuspended in a
sample buffer of your choice (e.g. SDS sample buffer). Follow the recommended
temperatures and heating times for these buffers prior to gel loadi ng.
B. Non-denaturing elution
1. Place the tube (from step 7 in "Immunoprecipitation of Target Antigen") on the
magnet and remove the supernatant.
2. Add 20 µL Elution Buffer and gently pipette to resuspend the Dynabeads®-Ab-Ag
complex. Avoid foaming.
3. Incubate with rotation for 2 min at room temperature to dissociate the complex.
4. Place the tube on the magnet and transfer the supernatant containing eluted Ab
and Ag to a clean tube. If the eluted protein is to be used for functional assays or
stored, the pH of the eluate can be adjusted by adding 1 M Tris, pH 7.5.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

A. Denaturing elution1. วางท่อ (จากขั้นตอนที่ 7 ใน "Immunoprecipitation ของเป้าหมายตรวจหา") ในการแม่เหล็กและเอา supernatant2. เพิ่ม 20 µL Elution บัฟเฟอร์ และ 10 µL NuPAGE ®แอลดีเอสอย่างบัฟเฟอร์หยด และNuPAGE ®ตัวอย่างลดลงแทน (ผสมตามคำแนะนำของผู้ผลิต)3. ทำให้ประหยัดพื้นที่การ resuspend ซับซ้อน Dynabeads ®-Ab-Ag4. ความร้อน 10 นาทีที่ 70ºC5. วางท่อบนแม่เหล็ก และโหลด supernatant/ตัว อย่างลงบนเจหมายเหตุ: เป็นทางเลือก คอมเพล็กซ์ Dynabeads ®-Ab-Ag ที่สามารถเป็น resuspended ในการบัฟเฟอร์อย่างที่คุณเลือก (เช่น SDS อย่างบัฟเฟอร์) ทำตามที่แนะนำอุณหภูมิและเวลาความร้อนเหล่านี้บัฟเฟอร์ก่อน ng loadi เจลB. ไม่-denaturing elution1. วางท่อ (จากขั้นตอนที่ 7 ใน "Immunoprecipitation ของเป้าหมายตรวจหา") ในการแม่เหล็กและเอา supernatant2. เพิ่ม 20 µL บัฟเฟอร์ Elution และเบา ๆ เปตต์ resuspend Dynabeads ®-Ab-Agซับซ้อน หลีกเลี่ยงการมีฟอง3. ฟักกับหมุนสำหรับ 2 นาทีที่อุณหภูมิห้องเพื่อ dissociate ซับซ้อน4. ท่อวางบนแม่เหล็ก และโอนย้าย supernatant ประกอบด้วย eluted Abและ Ag ให้ท่อสะอาด ถ้าโปรตีน eluted จะใช้สำหรับทำงาน assays หรือเก็บ pH ของ eluate สามารถปรับปรุง โดยการเพิ่มทริสเรทติ้ง 1 M, pH 7.5

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

A. denaturing elution
1 วางท่อ (จากขั้นตอนที่ 7 "immunoprecipitation ของเป้าหมาย Antigen") บน
แม่เหล็กและลบใส.
2 เพิ่ม 20 ไมโครลิตร elution บัฟเฟอร์และ 10 ไมโครลิตรผสมNuPAGE®เอสบัฟเฟอร์ตัวอย่างและ
ตัวอย่างNuPAGE®ลดตัวแทน (ผสมตามคำแนะนำของผู้ผลิต).
3 ค่อยๆเปตเพื่อ resuspend Dynabeads®-Ab-Ag ซับซ้อน.
4 ความร้อนเป็นเวลา 10 นาทีที่ 70 องศาเซลเซียส.
5 วางท่อบนแม่เหล็กและโหลดใส / ตัวอย่างบนเจล.
หมายเหตุ: ในฐานะที่เป็นทางเลือกที่ซับซ้อนDynabeads®-Ab-Ag สามารถ resuspended ใน
บัฟเฟอร์ตัวอย่างที่คุณเลือก (เช่นกันชนตัวอย่าง SDS) ทำตามที่แนะนำ
อุณหภูมิความร้อนและเวลาสำหรับบัฟเฟอร์เหล่านี้ก่อนที่จะมีเจล loadi งะ.
บี elution ไม่ denaturing
1 วางท่อ (จากขั้นตอนที่ 7 "immunoprecipitation ของเป้าหมาย Antigen") บน
แม่เหล็กและลบใส.
2 เพิ่ม 20 ไมโครลิตร elution บัฟเฟอร์และค่อยๆเปตเพื่อ resuspend Dynabeads®-Ab-Ag
ซับซ้อน หลีกเลี่ยงการเกิดฟอง.
3 บ่มเพาะกับการหมุน 2 นาทีที่อุณหภูมิห้องจะแยกตัวออกซับซ้อน.
4 วางท่อแม่เหล็กและโอนใสที่มีชะ Ab
Ag และการทำความสะอาดหลอด หากชะโปรตีนที่จะนำมาใช้สำหรับการตรวจการทำงานหรือ
การจัดเก็บค่า pH ของ eluate สามารถปรับเปลี่ยนได้โดยการเพิ่ม 1 M Tris ค่า pH 7.5

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

A . ี่ (
1 วางท่อ ( จากขั้นตอนที่ 7 ใน " immunoprecipitation แอนติเจนเป้าหมายของ " ) และเอานำแม่เหล็ก
.
2 เพิ่ม 20 µผมใช้บัฟเฟอร์ และ 10 µผมผสม nupage ®โบถส์บัฟเฟอร์ตัวอย่างและตัวอย่างการ®
nupage ตัวแทน ( ผสมตามคําแนะนําของผู้ผลิต )
3 เบา ๆเพื่อ resuspend เปตที่ dynabeads ® - AB AG ซับซ้อน .
4 ร้อนสำหรับ 10 นาทีที่ 70 º C .
5วางท่อในแม่เหล็กและโหลดตัวอย่างสูง / ลงบนเจล
หมายเหตุ : เป็นทางเลือกที่ dynabeads ® - AB AG ที่ซับซ้อนสามารถ resuspended ใน
ตัวอย่างบัฟเฟอร์ของทางเลือกของคุณ ( เช่น SDS ตัวอย่างบัฟเฟอร์ ) ทำตามที่แนะนำ
อุณหภูมิและเวลาเครื่องบัฟเฟอร์เหล่านี้ก่อนการเจล loadi ng .
b . โนนี่ (
1วางท่อ ( จากขั้นตอนที่ 7 ใน " immunoprecipitation แอนติเจนเป้าหมายของ " ) และเอานำแม่เหล็ก
.
2 เพิ่ม 20 µผมใช้บัฟเฟอร์ และเบา ๆเพื่อ resuspend เปตที่ dynabeads ® - AB AG
ที่ซับซ้อน หลีกเลี่ยงการเกิดฟอง .
3 ฟักไข่ด้วยการหมุนสำหรับ 2 นาทีที่อุณหภูมิห้องเพื่อแยกซับซ้อน .
4 วางท่อในแม่เหล็กและการถ่ายโอนสูงที่มีตัวอย่าง AB
โดยให้สะอาดและหลอด ถ้าตัวอย่างโปรตีนจะถูกใช้เพื่อทดสอบการทำงาน หรือ
เก็บไว้ พีเอชของสารละลาย ( eluate ) สามารถปรับได้โดยการเพิ่ม 1 เมตร บริษัท พีเอช 7.5 .