Mycoplasma: the insidious enemy Review
It’s the forbidden word in cell culture. It is every cell culturist’s nightmare, or at least it should be. Mycoplasma.
Cell culture contaminations of mycoplasma have been known for decades. The problem is serious, and with potentially 50% or more of cell-lines worldwide contaminated, mycoplasma can significantly impact the interpretation of biological results. To what extent and measures should we go to prevent or eliminate Mycoplasma contamination in cell culture?
Mycoplasma contamination in cell cultures
Mycoplasma is a unique type of microorganism belonging to the class of Mollicutes. The first strains of mycoplasma were isolated at the Pasteur Institute in 1898, and to date 20 of the 190 or so species have been identified as bona fide contaminants in laboratory cell culture. Mycoplasmas are the smallest free-living organisms and considered the simplest of bacteria. Owing to their extremely basic genomes, mycoplasmas in fact are parasites exploiting host cells to fulfill their energy requirements and biosynthesis of their components.
Mycoplasma structure
Since first reported in the mid-1950s, mycoplasma contamination of culture cell lines has become a major problem in both basic research and in the production of biopharmaceuticals [1,2]. Mycoplasmas are structurally unlike other bacteria in that they lack a solid wall, instead possessing a “plasma”-like form. This, together with their minute size (~100 nm), means that mycoplasma contaminations go undetected for extended lengths of time and are resistant to a number of commonly used antibiotics, such as penicillin and streptomycin. Hundreds of mycoplasmas can attach to a single eukaryotic cell, eventually invading the host by fusing with the cell membrane. Upon entry into the cell, mycoplasmas multiply and circumvent defenses to survive, outnumbering host cells by 1000-fold. Contamination of a cell culture by mycoplasmas cannot be visualized by the naked eye or even by light microscopy and do not produce overt turbid growth commonly associated with bacterial and fungal contamination. The morphological cellular changes and growth rates of cell cultures can be minimal or unapparent.
Consequences of Mycoplasma contamination in cell cultures
Mycoplasma competes with host cells for biosynthetic precursors and nutrients and can alter DNA, RNA and protein synthesis, diminish amino acid and ATP levels, introduce chromosomal alterations and modify host-cell plasma membrane antigens.
A microarray analysis on contaminated cultured human cells revealed the extortionate effects that mycoplasma has on altering the expression of hundreds of genes including those encoding for receptors, ion channels, growth-factors, and oncogenes [3].
In addition, mycoplasmas exert significant effects on cultured immune cells such as monocytes and macrophages. Mycoplasmas contain highly immunogenic lipoproteins anchored on the outer face of the plasma membrane. These lipoproteins are recognized by specific pattern recognition receptors, in particular Toll-like receptor 2 (TLR2) present on immune cells. Upon recognition of the mycoplasmal lipoproteins, TLR2 induces the NF-kB pathway leading to the activation of these cells therefore biasing experimental results.
Controlling Mycoplasma contamination
There are three major sources leading to mycoplasma contamination of cell cultures: 1) incoming infected cells, 2) contaminated cell culture medium ingredients such as serum and trypsin 3) laboratory personnel infected with M. orale or M. fermentans. A contamination can spread rapidly to other cell lines through aerosol droplet
dispersion.
Once mycoplasmas have been detected, discarding the contaminated cell line remains the best recommended solution to eliminate and prevent spreading. In important cases, for instance to rescue a valuable cell line, an effective mycoplasma eradication treatment is needed. Some antibiotics that are selectively active on mycoplasma are currently available. Following treatment, they have been shown to eliminate mycoplasma and restore cell behavior and responses [5].
So the answer is clear and simple. All efforts must be taken to prevent or eliminate mycoplasma contamination in cell culture. Regular testing of cell cultures to ensure absence of mycoplasma in conjunction with good aseptic technique is strongly advised.
InvivoGen offers an easy and reliable mycoplasma detection method, PlasmoTest™. This cell-based assay exploits the ability of the immune system, in particular TLR2, to recognize mycoplasma and can be easily implemented as part of cell culture to routinely check for all types of mycoplasma contamination. Cell cultures found contaminated can be effectively treated with Plasmocin™ , a well-established antimycoplasma reagent, or Plasmocure™, an alternative mycoplasma removal agent, some of InvivoGen’s best sellers.
Mycoplasma: insidious ศัตรูตรวจทานมันเป็นคำต้องห้ามในการเพาะเลี้ยงเซลล์ มันเป็นฝันร้ายของทุก culturist เซลล์ หรืออย่างน้อย ควรมี Mycoplasmaตถุวัฒนธรรมเซลล์ของ mycoplasma รู้จักในทศวรรษที่ผ่านมา ปัญหาร้ายแรง และอาจ 50% หรือมากกว่าของเซลล์รายการทั่วโลกปนเปื้อน mycoplasma สามารถอย่างมีนัยสำคัญส่งผลกระทบต่อการตีความผลทางชีวภาพ ขอบเขตและมาตรการใดควรเราไปป้องกัน หรือกำจัดการปนเปื้อน Mycoplasma ในวัฒนธรรมเซลล์ปน mycoplasma ในวัฒนธรรมเซลล์Mycoplasma เป็นชนิดเฉพาะของจุลินทรีย์ของชั้น Mollicutes สายพันธุ์แรกของ mycoplasma ถูกแยกสถาบันปาสเตอร์ ใน 1898 และวัน 20 ของ 190 หรือเพื่อ การระบุชนิดเป็นสารปนเปื้อน fide ผู้จดในห้องปฏิบัติการเพาะเลี้ยงเซลล์ Mycoplasmas มีชีวิต free-living เล็กที่สุด และถือว่าง่ายที่สุดของแบคทีเรีย เพราะ genomes มากพื้นฐานของพวกเขา mycoplasmas เป็นปรสิตใน exploiting โฮสต์เซลล์เพื่อตอบสนองความต้องการพลังงานและการสังเคราะห์ส่วนประกอบอื่น ๆ ของพวกเขาในความเป็นจริงโครงสร้าง mycoplasmaเนื่องจากรายงานครั้งแรก ในมิ mycoplasma ปนวัฒนธรรมเซลล์บรรทัดได้กลายเป็น ปัญหาใหญ่ทั้งงานวิจัยพื้นฐาน และการผลิตของ biopharmaceuticals [1, 2] Mycoplasmas มี structurally แตกต่างจากแบคทีเรียอื่น ๆ ที่พวกเขาขาดผนังทึบ แต่มี "พลาสม่า" -ชอบแบบฟอร์ม นี้ กับขนาดนาที (~ 100 nm), หมายความว่า mycoplasma ปนไปหายสำหรับขยายความยาวของเวลา และทนอยู่กับหมายเลขโดยทั่วไปใช้ยาปฏิชีวนะ ยาเพนนิซิลลินและ streptomycin Mycoplasmas หลายร้อยสามารถแนบกับแบบ eukaryotic เซลล์เดี่ยว บุกรุกโฮสต์ในที่สุด โดยมีเยื่อหุ้มเซลล์ เมื่อรายการในเซลล์ mycoplasmas คูณ และหลีกเลี่ยงป้องกันเพื่อความอยู่รอด outnumbering เซลล์โฮสต์โดย 1000-fold ปนเปื้อนของวัฒนธรรมเซลล์โดย mycoplasmas ไม่ visualized โดยตาเปล่า หรือแม้แต่แสง microscopy และผลิตแจ่มแจ้ง turbid มักสัมพันธ์กับการปนเปื้อนเชื้อแบคทีเรีย และเชื้อราเติบโต แปลงของเซลล์และอัตราการขยายตัวของวัฒนธรรมเซลล์ได้น้อยที่สุด หรือ unapparentผลการปนเปื้อน Mycoplasma ในวัฒนธรรมเซลล์Mycoplasma แข่งขันกับเซลล์โฮสต์ biosynthetic precursors และสารอาหาร และสามารถเปลี่ยนแปลงการสังเคราะห์ดีเอ็นเอ อาร์เอ็นเอ และโปรตีน ลดระดับ ATP และกรดอะมิโน แนะนำการเปลี่ยนแปลงของโครโมโซม และปรับเปลี่ยน antigens พลาสมาเมมเบรนของเซลล์โฮสต์ A microarray analysis on contaminated cultured human cells revealed the extortionate effects that mycoplasma has on altering the expression of hundreds of genes including those encoding for receptors, ion channels, growth-factors, and oncogenes [3].In addition, mycoplasmas exert significant effects on cultured immune cells such as monocytes and macrophages. Mycoplasmas contain highly immunogenic lipoproteins anchored on the outer face of the plasma membrane. These lipoproteins are recognized by specific pattern recognition receptors, in particular Toll-like receptor 2 (TLR2) present on immune cells. Upon recognition of the mycoplasmal lipoproteins, TLR2 induces the NF-kB pathway leading to the activation of these cells therefore biasing experimental results.Controlling Mycoplasma contaminationThere are three major sources leading to mycoplasma contamination of cell cultures: 1) incoming infected cells, 2) contaminated cell culture medium ingredients such as serum and trypsin 3) laboratory personnel infected with M. orale or M. fermentans. A contamination can spread rapidly to other cell lines through aerosol dropletdispersion. เมื่อมีการตรวจพบ mycoplasmas ละทิ้งรายการเซลล์ปนเปื้อนเหลือ ส่วนแนะนำแก้ไขปัญหาในการกำจัด และป้องกัน ในกรณีที่สำคัญ ตัวอย่างรายการเซลล์มีคุณค่าช่วยเหลือ การรักษาขจัด mycoplasma มีประสิทธิภาพเป็นสิ่งจำเป็น บางอย่างยาปฏิชีวนะที่เลือกใช้งาน mycoplasma มีอยู่ในปัจจุบัน ต่อรักษา พวกเขามีการแสดงการกำจัด mycoplasma และคืนค่าลักษณะการทำงานของเซลล์และการตอบสนอง [5]ดังนั้น คำตอบคือง่าย และชัดเจน ความพยายามทั้งหมดต้องดำเนินการป้องกัน หรือกำจัด mycoplasma ปนเปื้อนในการเพาะเลี้ยงเซลล์ ขอแนะนำการทดสอบปกติของวัฒนธรรมเซลล์ให้ของ mycoplasma ร่วมกับเทคนิคดีเข้มข้น InvivoGen มีวิธีการตรวจได้ง่าย และ mycoplasma, PlasmoTest ™ ทดสอบใช้เซลล์นี้นำความสามารถของระบบภูมิคุ้มกัน ในเฉพาะ TLR2 รู้จัก mycoplasma และสามารถได้ใช้เป็นส่วนหนึ่งของการเพาะเลี้ยงเซลล์เพื่อตรวจสอบสำหรับชนิดทั้งหมดของปนเปื้อน mycoplasma วัฒนธรรมเซลล์ที่พบปนเปื้อนได้อย่างมีประสิทธิภาพรับ Plasmocin ™ รีเอเจนต์ antimycoplasma ดีขึ้น หรือ Plasmocure ™ ตัวสำรอง mycoplasma เอาแทน บางสินค้าขายดีของ InvivoGen
การแปล กรุณารอสักครู่..
Mycoplasma: the insidious enemy Review
It’s the forbidden word in cell culture. It is every cell culturist’s nightmare, or at least it should be. Mycoplasma.
Cell culture contaminations of mycoplasma have been known for decades. The problem is serious, and with potentially 50% or more of cell-lines worldwide contaminated, mycoplasma can significantly impact the interpretation of biological results. To what extent and measures should we go to prevent or eliminate Mycoplasma contamination in cell culture?
Mycoplasma contamination in cell cultures
Mycoplasma is a unique type of microorganism belonging to the class of Mollicutes. The first strains of mycoplasma were isolated at the Pasteur Institute in 1898, and to date 20 of the 190 or so species have been identified as bona fide contaminants in laboratory cell culture. Mycoplasmas are the smallest free-living organisms and considered the simplest of bacteria. Owing to their extremely basic genomes, mycoplasmas in fact are parasites exploiting host cells to fulfill their energy requirements and biosynthesis of their components.
Mycoplasma structure
Since first reported in the mid-1950s, mycoplasma contamination of culture cell lines has become a major problem in both basic research and in the production of biopharmaceuticals [1,2]. Mycoplasmas are structurally unlike other bacteria in that they lack a solid wall, instead possessing a “plasma”-like form. This, together with their minute size (~100 nm), means that mycoplasma contaminations go undetected for extended lengths of time and are resistant to a number of commonly used antibiotics, such as penicillin and streptomycin. Hundreds of mycoplasmas can attach to a single eukaryotic cell, eventually invading the host by fusing with the cell membrane. Upon entry into the cell, mycoplasmas multiply and circumvent defenses to survive, outnumbering host cells by 1000-fold. Contamination of a cell culture by mycoplasmas cannot be visualized by the naked eye or even by light microscopy and do not produce overt turbid growth commonly associated with bacterial and fungal contamination. The morphological cellular changes and growth rates of cell cultures can be minimal or unapparent.
Consequences of Mycoplasma contamination in cell cultures
Mycoplasma competes with host cells for biosynthetic precursors and nutrients and can alter DNA, RNA and protein synthesis, diminish amino acid and ATP levels, introduce chromosomal alterations and modify host-cell plasma membrane antigens.
A microarray analysis on contaminated cultured human cells revealed the extortionate effects that mycoplasma has on altering the expression of hundreds of genes including those encoding for receptors, ion channels, growth-factors, and oncogenes [3].
In addition, mycoplasmas exert significant effects on cultured immune cells such as monocytes and macrophages. Mycoplasmas contain highly immunogenic lipoproteins anchored on the outer face of the plasma membrane. These lipoproteins are recognized by specific pattern recognition receptors, in particular Toll-like receptor 2 (TLR2) present on immune cells. Upon recognition of the mycoplasmal lipoproteins, TLR2 induces the NF-kB pathway leading to the activation of these cells therefore biasing experimental results.
Controlling Mycoplasma contamination
There are three major sources leading to mycoplasma contamination of cell cultures: 1) incoming infected cells, 2) contaminated cell culture medium ingredients such as serum and trypsin 3) laboratory personnel infected with M. orale or M. fermentans. A contamination can spread rapidly to other cell lines through aerosol droplet
dispersion.
Once mycoplasmas have been detected, discarding the contaminated cell line remains the best recommended solution to eliminate and prevent spreading. In important cases, for instance to rescue a valuable cell line, an effective mycoplasma eradication treatment is needed. Some antibiotics that are selectively active on mycoplasma are currently available. Following treatment, they have been shown to eliminate mycoplasma and restore cell behavior and responses [5].
So the answer is clear and simple. All efforts must be taken to prevent or eliminate mycoplasma contamination in cell culture. Regular testing of cell cultures to ensure absence of mycoplasma in conjunction with good aseptic technique is strongly advised.
InvivoGen offers an easy and reliable mycoplasma detection method, PlasmoTest™. This cell-based assay exploits the ability of the immune system, in particular TLR2, to recognize mycoplasma and can be easily implemented as part of cell culture to routinely check for all types of mycoplasma contamination. Cell cultures found contaminated can be effectively treated with Plasmocin™ , a well-established antimycoplasma reagent, or Plasmocure™, an alternative mycoplasma removal agent, some of InvivoGen’s best sellers.
การแปล กรุณารอสักครู่..
Mycoplasma : ศัตรูร้ายกาจทบทวน
มันเป็นคําต้องห้ามในเซลล์เพาะเลี้ยง มันเป็นฝันร้ายของทุกเซลล์ culturist หรืออย่างน้อยก็ควรเป็น Mycoplasma .
เซลล์ปนเปื้อนของเชื้อไมโครพลาสมาได้รู้จักกันมานานหลายทศวรรษ เป็นปัญหาที่ร้ายแรงและอาจ 50% หรือมากกว่าของเซลล์ทั่วโลกปนเปื้อน ,Mycoplasma สามารถอย่างมากส่งผลกระทบต่อการแปลผลทางชีวภาพ สิ่งที่ขอบเขตและมาตรการที่เราควรจะไปเพื่อป้องกัน หรือกำจัดการปนเปื้อน Mycoplasma ในเซลล์เพาะเลี้ยง ?
Mycoplasma ที่ปนเปื้อนในเซลล์วัฒนธรรม
Mycoplasma เป็นเฉพาะชนิดของจุลินทรีย์ที่อยู่ในชั้นของ mollicutes . สายพันธุ์แรกของ Mycoplasma เป็นแยกที่สถาบันปาสเตอร์ใน 1898 ,และวันที่ 20 ของ 190 หรือดังนั้นสายพันธุ์ที่ได้รับการระบุเป็น Bona fide สารปนเปื้อนในเซลล์ที่เพาะเลี้ยงในห้องปฏิบัติการ ไมโคพลาสมาเป็นอิสระและถือว่าง่ายที่สุด เล็กที่สุดในแบคทีเรีย เนื่องจากมากของพวกเขาพื้นฐานจีโนมไมโคพลาสมาในความเป็นจริงปรสิต exploiting , เซลล์โฮสต์เพื่อตอบสนองความต้องการพลังงานของพวกเขาและการสังเคราะห์ส่วนประกอบ
Mycoplasma โครงสร้าง
ตั้งแต่ครั้งแรกในการรายงานการปนเปื้อนของ - Mycoplasma สายพันธุ์เซลล์วัฒนธรรมได้กลายเป็นปัญหาใหญ่ทั้งพื้นฐานและการวิจัยในการผลิต : [ 1 , 2 ] ไมโคพลาสมามีโครงสร้างแตกต่างจากแบคทีเรียอื่น ๆที่พวกเขาขาดผนังทึบแทนครอบครอง " พลาสมา " - แบบฟอร์ม นี้ พร้อมกับขนาดนาทีของพวกเขา ( ~ 100 nm )หมายความว่า Mycoplasma ปนเปื้อนไปตรวจไม่พบ สำหรับเพิ่มความยาวของเวลาและมีความทนทานต่อจำนวนของที่ใช้ยาปฏิชีวนะ เช่น เพนนิซิลลิน และสเตร็ปโตมัยซิน . ร้อยของไมโคพลาสมาสามารถแนบเดียวยูคาริโอต ในที่สุดการบุกรุกโฮสต์โดยรวมตัวกับเยื่อหุ้มเซลล์ . เมื่อเข้าในเซลล์ ไมโคพลาสมาคูณและหลีกเลี่ยงการป้องกันเพื่อความอยู่รอดoutnumbering เซลล์โฮสต์ โดย 1 , 000 เท่า การปนเปื้อนของเซลล์วัฒนธรรมไมโคพลาสมา ไม่สามารถมองเห็นได้ด้วยตาเปล่า หรือแม้แต่ด้วยกล้องจุลทรรศน์แสงและไม่ผลิตตัวขุ่นการเจริญเติบโตโดยทั่วไปที่เกี่ยวข้องกับแบคทีเรียและเชื้อราปนเปื้อน การเปลี่ยนแปลงลักษณะทางสัณฐานวิทยาของเซลล์และอัตราการเจริญเติบโตของเซลล์วัฒนธรรมสามารถน้อยที่สุดหรือ unapparent .
ผลของเชื้อไมโครพลาสมาที่ปนเปื้อนในเซลล์วัฒนธรรม
Mycoplasma แข่งขันกับโฮสต์เซลล์สำหรับการตั้งต้นและรังและสามารถปรับเปลี่ยนดีเอ็นเอ อาร์เอ็นเอ และการสังเคราะห์ โปรตีน กรดอะมิโน และ เอทีพี ลดระดับของการแนะนำและแก้ไขโฮสต์เซลล์เยื่อหุ้มเซลล์แอนติเจน
การวิเคราะห์ microarray ปนเปื้อนเลี้ยงเซลล์มนุษย์เปิดเผยผลเกี่ยวกับการขู่เขิญที่ Mycoplasma มีการเปลี่ยนแปลงการแสดงออกของยีนนับร้อย รวมถึงผู้ที่เข้ารหัสทวาร , ช่อง , ไอออนปัจจัยการเจริญเติบโตและงโคยีน [ 3 ] .
นอกจากนี้ ไมโคพลาสมาออกแรงอย่างมีนัยสำคัญต่อเซลล์ในระบบภูมิคุ้มกันและเพาะเลี้ยง เช่น โมโนไซทแมคโครฟาจ .ไมโคพลาสมามีสูง immunogenic lipoproteins ที่ยึดบนหน้านอกของพลาสมาเมมเบรน ธาลัสซีเมียเหล่านี้ได้รับการยอมรับโดยเฉพาะลวดลายตัวรับ โดยเฉพาะโทรเหมือนตัวรับ 2 ( tlr2 ) ปัจจุบันในเซลล์ภูมิคุ้มกัน ตามการรับรู้ของ mycoplasmal ซิน ,tlr2 NF ) บางครั้งทางเดินที่นำไปสู่การกระตุ้นเซลล์เหล่านี้จึงขยายการทดลองการควบคุมการปนเปื้อน Mycoplasma .
มี 3 แหล่งสำคัญที่นำไปสู่การปนเปื้อนของเชื้อไมโครพลาสมาเซลล์ ( 1 ) เข้าเซลล์ 2 ) ปนเปื้อนเซลล์ปานกลาง เครื่องปรุง เช่น ซีรั่ม และทริป 3 ) บุคลากรห้องปฏิบัติการ orale ติดม. หรือเมตรfermentans . การปนเปื้อนสามารถแพร่กระจายอย่างรวดเร็วไปยังเซลล์อื่น ๆผ่านละอองหยด
กระจาย
เมื่อไมโคพลาสมาได้ตรวจพบการปนเปื้อนเซลล์เส้นยังคงดีที่สุดแนะนำโซลูชั่นเพื่อขจัดและป้องกันการแพร่กระจาย ในคดีสำคัญ เช่น ช่วยเหลือเป็นเซลล์ที่มีประสิทธิภาพการรักษา Mycoplasma เป็นสิ่งจำเป็นยาปฏิชีวนะบางอย่างที่เลือกใช้งานบน Mycoplasma สามารถใช้ได้ . ต่อไปนี้การรักษา พวกเขาได้รับการแสดงเพื่อขจัดเชื้อไมโครพลาสมาเซลล์และเรียกคืนพฤติกรรมและการตอบสนอง [ 5 ] .
จึงเป็นคำตอบที่ชัดเจนและเรียบง่าย ความพยายามทั้งหมดก็ต้องเสี่ยงเพื่อป้องกัน หรือลดการปนเปื้อนของเชื้อไมโครพลาสมาในเซลล์เพาะเลี้ยงทดสอบปกติของเซลล์วัฒนธรรมเพื่อให้มั่นใจว่าไม่มีเชื้อไมโครพลาสมาร่วมกับเทคนิคปลอดเชื้อที่ดีขอแนะนำ .
invivogen ให้ง่ายและเชื่อถือได้วิธีการ plasmotest ™ตรวจหาเชื้อไมโครพลาสมา ปัจจุบันวิธีนี้ใช้ความสามารถของระบบภูมิคุ้มกันใน tlr2 โดยเฉพาะ ,จำ Mycoplasma และสามารถใช้งานได้อย่างง่ายดาย ในส่วนของการเพาะเลี้ยงเซลล์เพื่อตรวจเช็คสำหรับทุกประเภทของการปนเปื้อนเชื้อไมโครพลาสมา เซลล์วัฒนธรรมที่พบปนเปื้อนสามารถมีประสิทธิภาพการรักษาด้วย plasmocin ™ , ดีขึ้น antimycoplasma รีเอเจนต์ หรือ plasmocure ™ทางเลือก Mycoplasma กำจัดตัวแทนบางส่วนของผู้ขายที่ดีที่สุด invivogen .
การแปล กรุณารอสักครู่..