Screening and Identification of Cel

Screening and Identification of Cellulase Producers

Five microlitres of overnight grown culture was spot plated on CMC agar (0.2% NaNO3, 0.1% K2HPO4, 0.05% MgSO4, 0.05% KCl, 0.2% carboxymethylcellulose (CMC) sodium salt, 0.02% peptone, and 1.7% agar) (HiMedia, India). Plates incubated at 28ºC for 48 hours were flooded with 1% hexadecyltrimethyl ammonium bromide (HAB) for 30 to 40 minutes [6]. From cellulase-producing microorganisms, two potential bacterial strains RK3 (Gram +ve) and MN34 (Gram –ve) and one fungal strain RS2 were selected for identification and further studies. Genomic DNA from bacterial strains was isolated and amplified by using universal 16S rRNA primers [9], and fungal DNA was isolated and amplified by using internal transcribed spacer 1 (ITS 1) and internal transcribed spacer 4 (ITS 4) primers [15]. The amplified gene products were purified from agarose gel using Qiaquick Gel Extraction Kit (Qiagen, Germany). Nucleotide sequencing of the genes was done by using Big Dye Terminator Cycle Sequencing Kit (Applied Biosystems) and 3130xl Genetic Analyzer (Applied Biosystems). The BLASTN program (http://​www.​ncbi.​nlm.​nih.​gov/​BLAST/​; National Center for Biotechnology Information, Bethesda, MD) was used for homology searches with the standard program default.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

คัดกรองและผลิตรหัส Cellulase

microlitres ห้าของแอร์พอร์ตโอเวอร์ไนท์วัฒนธรรมปลูกถูกจุดชุบใน CMC agar (0.2% NaNO3, 0.1% K2HPO4, 0.05% MgSO4, 0.05% KCl เกลือโซเดียม carboxymethylcellulose (CMC) 0.2%, peptone 0.02% และ 1.7% agar) (HiMedia อินเดีย) แผ่น incubated ที่ 28ºC ภายใน 48 ชั่วโมงถูกน้ำท่วม ด้วย 1% hexadecyltrimethyl แอมโมเนียโบรไมด์ (ถล่ม) 30-40 นาที [6] จาก cellulase ผลิตจุลินทรีย์ สองอาจเกิดแบคทีเรียสายพันธุ์ RK3 (กรัม ve) และ MN34 (–ve กรัม) และต้องใช้เชื้อราหนึ่ง RS2 ถูกเลือกสำหรับการระบุ และศึกษาเพิ่มเติม Genomic DNA จากแบคทีเรียสายพันธุ์แยกต่างหาก และขยายโดยสากล 16S rRNA ไพรเมอร์ [9], และเชื้อราดีเอ็นเอแยกต่างหาก และขยาย โดยใช้เป็นตัวเว้นวรรคใช้ทับภายใน 1 (เป็น 1) และเป็นตัวเว้นวรรคใช้ทับภายใน 4 (เป็น 4) ไพรเมอร์ [15] ผลิตภัณฑ์ยีนเอาต์ได้บริสุทธิ์จากเจ agarose ใช้ Qiaquick เจแยกชุด (Qiagen เยอรมนี) ลำดับนิวคลีโอไทด์ของยีนที่ถูกทำ โดยใช้ขนาดใหญ่ย้อมเทอร์มิเนเตอร์วงจรลำดับชุด (Biosystems ใช้) และวิเคราะห์พันธุกรรม 3130xl (Biosystems ใช้) โปรแกรม BLASTN (http:// www. ncbi. nlm. nih. gov ระเบิด / ศูนย์ข้อมูลเทคโนโลยีชีวภาพ เบเทสดา MD แห่งชาติ) ที่ใช้สำหรับค้นหา homology ด้วยค่าเริ่มต้นโปรแกรมมาตรฐาน

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

การตรวจคัดกรองและบัตรประจำตัวของผู้ผลิตเซลลูห้า microlitres ของวัฒนธรรมที่ปลูกในชั่วข้ามคืนได้รับการชุบจุดบน CMC วุ้น (0.2% NaNO3, 0.1% K2HPO4 0.05% MgSO4 0.05% KCl, 0.2% carboxymethylcellulose (CMC) เกลือโซเดียม 0.02% เปปโตนและ 1.7 วุ้น%) (HIMEDIA, อินเดีย) แผ่นบ่มที่ 28 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 48 ชั่วโมงที่ถูกน้ำท่วมด้วย 1% แอมโมเนียมโบรไมด์ hexadecyltrimethyl (HAB) เป็นเวลา 30 ถึง 40 นาที [6] จากจุลินทรีย์ที่ผลิตเซลลูเลสสองสายพันธุ์แบคทีเรียที่มีศักยภาพ RK3 (แกรม + ได้) และ MN34 (แกรมได้) และเป็นหนึ่งในสายพันธุ์ของเชื้อรา RS2 ถูกเลือกสำหรับการระบุและการศึกษาต่อไป ดีเอ็นเอจากสายพันธุ์แบคทีเรียที่แยกได้และขยายโดยใช้ 16S rRNA สากลไพรเมอร์ [9] และดีเอ็นเอของเชื้อราที่แยกได้และขยายโดยใช้ถ่ายทอดภายใน spacer 1 (ITS 1) และ spacer ภายในคัดลอก 4 (ITS 4) ไพรเมอร์ [15] ผลิตภัณฑ์ยีนขยายได้บริสุทธิ์จากเจล agarose Qiaquick ใช้เจลสกัด Kit (Qiagen, เยอรมนี) ลำดับเบสของยีนที่ทำโดยใช้บิ๊กย้อม Terminator วงจรลำดับ Kit (Applied Biosystems) และ 3130xl พันธุกรรมวิเคราะห์ (Applied Biosystems) โปรแกรม BLASTN (.... http:// ที่ www NCBI NLM nih gov / ระเบิด /; แห่งชาติศูนย์เทคโนโลยีชีวภาพข้อมูลสึ้น MD) ถูกนำมาใช้สำหรับการค้นหาที่คล้ายคลึงกันกับการเริ่มต้นโปรแกรมมาตรฐาน

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การคัดกรองและการผลิตเซลลูเลส

5 microlitres ของข้ามคืนปลูกวัฒนธรรมคือจุดที่ชุบวุ้น ( CMC 0.2% NaNO3 0.1 % MgSO4 ใ k2hpo4 0.05 0.05 เปอร์เซ็นต์การเจริญเติบโต 0.2% ผู้ป่วยใน ( CMC ) เกลือโซเดียม 0.02 เปอร์เซ็นต์ ตามลำดับ และ 1.7% ( วุ้น ) himedia , อินเดีย ) แผ่นºบ่มที่อุณหภูมิ 28 องศาเซลเซียส 48 ชั่วโมงเต็มไปด้วย 1% hexadecyltrimethyl แอมโมเนียมโบรไมด์ ( HAB ) สำหรับ 30 ถึง 40 นาที [ 6 ]เอนไซม์ที่ผลิตจากจุลินทรีย์ แบคทีเรียอาจเกิดขึ้นได้สอง rk3 ( กรัมได้ ) และ mn34 ( กรัม ) ได้ ) และ 1 สายพันธุ์เชื้อรา rs2 ถูกเลือกสำหรับประชาชนและการศึกษาต่อ ดีเอ็นเอจากแบคทีเรียสายพันธุ์ที่แยกและขยายโดยใช้ไพรเมอร์ 16S rRNA สากล [ 9 ]และเชื้อราที่แยกและขยายโดยการใช้ดีเอ็นเอภายในและ spacer 1 ( 1 ) และภายในและ spacer 4 ( 4 ) ไพรเมอร์ [ 15 ] การขยายยีนผลิตภัณฑ์บริสุทธิ์จากเจล ( ใช้ชุดสกัดเจล qiaquick ( QIAGEN , เยอรมัน )ลำดับนิวคลีโอไทด์ของยีนโดยการใช้สีย้อม Terminator รอบใหญ่ลำดับชุด ( Applied Biosystems ) และ 3130xl พันธุกรรมวิเคราะห์ ( Applied Biosystems ) โปรแกรม blastn ( http : / / www . ​​ ncbi . ​ nlm . ​ nih gov . ​ / ​ระเบิด / ​ ; ศูนย์ข้อมูลเทคโนโลยีชีวภาพแห่งชาติ , Bethesda , MD ) ใช้ตัวค้นหากับค่าเริ่มต้นโปรแกรมมาตรฐาน