Extraction and measurement of carbohydrate concentrations Freeze-dried root tissue (50 mg) was extracted for 5 min at 80ºC in 6 ml of 80% (v/v) ethanol, with repeated vortexing, centrifuged at 1,400 x g (10 min at 20ºC), and the pellet was re-extracted in 6 ml of 80% (v/v) ethanol at room temperature. After another round of centrifugation, the supernatants were combined and the pellet was frozen at -30ºC. The ethanol was removed from the supernatant by centrifugal evaporation (Jouan RC 10.22; Thermo Electron Corporation GmbH, Dreieich, Germany) and the residue was made up to 20 ml with distilled water. Sugar (sucrose, glucose, and fructose) concentrations in each extract were determined enzymatically, as described by Gomez et al. (2007), except that the assay volume was scaled-up in order to use a spectrophotometer (Philips Unicam PU8700;Thermo Electron Corporation GmbH) instead of using a microplate reader (Gomez et al.,2007).
การสกัดและการวัดความเข้มข้นของคาร์โบไฮเดรตแห้งเนื้อเยื่อราก (50 mg) ถูกสกัดเป็นเวลา 5 นาทีที่80ºC 6 มล. 80% (v / v) เอทานอลกับ vortexing ซ้ำหมุนเหวี่ยงที่ 1,400 XG (10 นาทีที่อุณหภูมิ 20 องศาเซลเซียส) และเม็ดเป็นอีกครั้งที่สกัด 6 มล. 80% (v / v) เอทานอลที่อุณหภูมิห้อง หลังจากรอบของการหมุนเหวี่ยงอีก supernatants ถูกรวมกันและเม็ดที่ถูกแช่แข็งที่-30ºC เอทานอลถูกลบออกจากสารละลายโดยการระเหยแรงเหวี่ยง (Jouan RC 10.22; เทอร์โมอิเลคตรอนคอร์ปอเรชั่น GmbH, Dreieich, เยอรมนี) และสารตกค้างที่ถูกสร้างขึ้นถึง 20 มล. ด้วยน้ำกลั่น น้ำตาล (น้ำตาลซูโครสกลูโคสและฟรุกโตส) ความเข้มข้นในแต่ละสารสกัดเอนไซม์ได้รับการพิจารณาตามที่อธิบายไว้โดยโกเมซ, et al (2007) ยกเว้นว่าปริมาณการทดสอบเป็นสัดส่วนขึ้นเพื่อใช้ spectrophotometer (ฟิลิปส์ Unicam PU8700; เทอร์โมอิเลคตรอนคอร์ปอเรชั่น GmbH) (. โกเมซ, et al, 2007) แทนการใช้เครื่องอ่าน microplate
การแปล กรุณารอสักครู่..
