The extraction and purification of flavonol and xanthone glycosides were performed as described previously (21).
The peels were removed with a stainless steel knife. After the separation of residual pulp from the peel with a razor blade, the peels were combined, immediately lyophilized, and finely ground using a S1/2 ball mill (Retsch). The pulp was also combined, lyophilized, and manually ground in a mortar. Aliquots of 2.5 g of the lyophilized peels and 5 g of the lyophilized pulp, respectively, were weighed into an amber glass round-bottomed flask. After the addition of 0.5 g of ascorbic
acid, the flask was flushed with nitrogen, and the mixture was extracted with 50 mL of aqueous acetone (80%, v/v) for 3 h under stirring. The extract was centrifuged (10 min, 3480g), and the residue was extracted with 50 mL of aqueous acetone for 10 min. The organic solvent was removed from the combined supernatants by evaporation in vacuo at
30 °C. The aqueous solution was transferred into a volumetric flask and made up to 50 mL with deionized water. After microfiltration (5 µm), aliquots of 20 mL were used for further purification. Polyamide CC6 (2 g, 0.05-0.16 mm) (Macherey-Nagel, Dueren, Germany) was filled into an Econo-Pac column (BioRad, Munich, Germany) and successively conditioned with 25 mL of methanol and 50 mL of deionized water prior to application of the peel extract to the column. After it was washed with water (50 mL), the polyphenolic fraction was recovered by elution with methanol (100 mL). The eluate was
evaporated to dryness, and the residue was dissolved in 0.5 mL of methanol. The solution was membrane-filtered (0.45 µm, Whatman Inc.,Clifton, United States) and used for HPLC.
มีดำเนินการตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้การสกัดและทำให้บริสุทธิ์ของ glycosides flavonol และ xanthone (21) .
peels ถูกเอาออก ด้วยมีดสแตนเลส หลังจากแยกของเยื่อกระดาษที่เหลือจากเปลือกด้วยใบมีดโกน มักจะหลุดลอกได้รวม lyophilized ทันที และประณีตดินใช้โรงงานลูกชิ้น S1/2 (Retsch) เนื้อเยื่อยังรวม lyophilized และดินในครกด้วยตนเอง Aliquots 2.5 g lyophilized peels และ 5 กรัมของเนื้อเยื่อ lyophilized ตามลำดับ มีน้ำหนักเป็นแก้วสีเหลืองอำพันที่ยนที่รอบหนาว หลังจากการเพิ่ม 0.5 g ของแอสคอร์บิค
กรด หนาวจะถูกล้าง ด้วยไนโตรเจน และส่วนผสมที่สกัด ด้วย 50 mL ของอควีอะซีโตน (80%, v/v) สำหรับ h 3 ใต้กวน การดึงข้อมูลถูก centrifuged (10 นาที 3480 กรัม), และสารตกค้างถูกสกัด ด้วย 50 mL ของอะซีโตนอควีสำหรับ 10 นาที ตัวทำละลายอินทรีย์ถูกเอาออกจาก supernatants รวม โดยระเหยใน vacuo ที่
30 องศาเซลเซียส การละลายเป็นหนาว volumetric และทำถึง 50 mL ด้วยน้ำ deionized หลังจาก microfiltration (5 µm), aliquots 20 mL ถูกใช้สำหรับฟอกเพิ่มเติม CC6 ใยสังเคราะห์ (2 กรัม 0.05-016 mm) (Nagel Macherey, Dueren เยอรมนี) ถูกเติมลงในคอลัมน์แพ็กอีโคโนมี (BioRad มิวนิค เยอรมนี) และติด ๆ กันปรับอากาศ 25 mL ของเมทานอล และ 50 mL น้ำ deionized ก่อนของเปลือกจะแยกคอลัมน์ หลังจากที่มันถูกล้าง ด้วยน้ำ (50 mL), เศษ polyphenolic ถูกกู้คืน โดย elution กับเมทานอล (100 มล.) Eluate ถูก
หายไปกับความแห้งกร้าน และสารตกค้างถูกละลายใน 0.5 mL ของเมทานอล โซลูชันมีกรองเมมเบรน (0.45 µm, Whatman Inc. คลิฟตั้น สหรัฐอเมริกา) และใช้สำหรับ HPLC
การแปล กรุณารอสักครู่..
การสกัดและการทำให้บริสุทธิ์ของ flavonol และแซนโทนไซด์ได้ดำเนินการตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ (21)
เปลือกที่ถูกถอดออกด้วยมีดสแตนเลส หลังจากการแยกของเยื่อกระดาษที่เหลือจากเปลือกใบมีดโกนเปลือกถูกรวมแห้งในทันทีและประณีตพื้นดินโดยใช้ / 2 โรงสีลูก S1 (Retsch) เยื่อกระดาษที่ได้รับการรวมกันยังแห้งและตนเองพื้นดินในครก aliquots 2.5 กรัมของเปลือกแห้งและ 5 กรัมของเยื่อกระดาษแห้งตามลำดับชั่งน้ำหนักลงในแก้วสีเหลืองอำพันขวดรอบต่ำสุด หลังจากที่นอกเหนือจาก 0.5 กรัมของวิตามินซี
กรดขวดถูกล้างด้วยไนโตรเจนและส่วนผสมที่ถูกสกัดด้วย 50 มิลลิลิตรของน้ำอะซิโตน (80%, v / v) เป็นเวลา 3 ชั่วโมงภายใต้การกวน สารสกัดที่ได้รับการหมุนเหวี่ยง (10 นาที, 3480g) และสารตกค้างถูกสกัดด้วย 50 มิลลิลิตรของอะซิโตนน้ำเป็นเวลา 10 นาที ตัวทำละลายอินทรีย์ถูกลบออกจาก supernatants รวมกันโดยการระเหยในสุญญากาศที่
30 องศาเซลเซียส สารละลายถูกย้ายลงไปในขวดปริมาตรและทำให้ได้ถึง 50 มลด้วยน้ำกลั่นปราศจากไอออน หลังจาก microfiltration (5 ไมครอน), aliquots 20 มิลลิลิตรถูกนำมาใช้สำหรับการทำให้บริสุทธิ์ต่อไป ใยสังเคราะห์ CC6 (2 กรัม, 0.05-0.16 มม) (Macherey-แจคกี้ Dueren, เยอรมนี) ก็เต็มไปลงในคอลัมน์ Econo แพค (BioRad, มิวนิค, เยอรมนี) และต่อเนื่องปรับอากาศกับ 25 มิลลิลิตรของเมทานอลและ 50 มิลลิลิตรของน้ำกลั่นปราศจากไอออนก่อน เพื่อการประยุกต์ใช้สารสกัดจากเปลือกกับคอลัมน์ หลังจากที่มันถูกล้างด้วยน้ำ (50 มิลลิลิตร), ส่วน polyphenolic ก็หายชะด้วยเมทานอล (100 มิลลิลิตร) eluate ถูก
ระเหยจนแห้งและสารตกค้างถูกละลายใน 0.5 มิลลิลิตรของเมทานอล การแก้ปัญหาคือเยื่อกรอง (0.45 ไมโครเมตร Whatman Inc, คลิฟตัน, สหรัฐอเมริกา) และใช้สำหรับ HPLC
การแปล กรุณารอสักครู่..
การสกัดและการทำให้บริสุทธิ์ และแซนโทน 3 ไซด์ได้ตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ ( 21 ) .
เปลือกออกด้วยมีดสแตนเลส หลังจากการแยกเยื่อกระดาษที่เหลือจากเปลือกด้วยใบมีดโกน , peels ถูกรวมกันทันทีแห้งและบดละเอียดใช้ S1 / 2 โรงสีลูกบอล ( retsch ) เยื่อกระดาษแห้งยังรวม ,และตนเองพื้นดินในปูน เฉยๆของ 2.5 กรัมของโปรตีนที่เปลือกและ 5 กรัมของโปรตีนที่เยื่อตามลำดับชั่งน้ำหนักเป็นแก้วสีชาคนโทก้นกลม . หลังจากเติม 0.5 กรัมของวิตามินซี
กรด ขวดก็หน้าแดงด้วยไนโตรเจน และสารผสม 50 มิลลิลิตร สารละลายอะซิโตน ( 80 % v / v ) เป็นเวลา 3 ชั่วโมง ในการกวน แยกเป็นระดับ ( 10 นาที3480g ) , และกากสาร 50 มิลลิลิตร สารละลายอะซิโตน 10 นาทีตัวทำละลายอินทรีย์จะถูกลบออกจาก supernatants รวมกันโดยการระเหยใน vacuo
30 ° C ในสารละลายถูกถ่ายโอนลงในขวดปริมาตร 50 มิลลิลิตรและขึ้นคล้ายเนื้อเยื่อประสานกับน้ำ หลังจากอ้อยอิ่ง ( 5 µ M ) เฉยๆ 20 มล ใช้สำหรับบำบัดน้ำเสีย เพิ่มเติม ด้วย cc6 ( 2 กรัม 0.05-0 .16 มิลลิเมตร ) ( macherey นาเกล dueren , Germany ) บรรจุในคอลัมน์ ( Econo Pac biorad มิวนิค ประเทศเยอรมนี ) และกระชั้นชิดปรับอากาศที่มี 25 มิลลิลิตรของเมทานอลและ 50 มล. ของน้ำก่อนที่จะคล้ายเนื้อเยื่อประสานโปรแกรมประยุกต์ของเปลือกแยกคอลัมน์ หลังจากที่มันถูกล้างด้วยน้ำ ( 50 ml ) ส่วนพรก็หายด้วย ( เมทานอล ( 100 ml ) ในสารละลาย ( eluate ) คือ
ระเหยแห้งและที่เหลือคือ 0.5 มิลลิลิตร ละลายในเมทานอล สารละลายเยื่อแผ่นกรอง ( 0.45 µ M , whatman อิงค์ , คลิฟตัน , สหรัฐอเมริกา ) และใช้สำหรับ HPLC .
การแปล กรุณารอสักครู่..