- ข้อความ
- ประวัติศาสตร์
Identification of the chitin-bindin
Identification of the chitin-binding proteins from the larval proteins
of silkworm, Bombyx mori
Liang Tang, Jiubo Liang, Zhigao Zhan, Zhonghuai Xiang, Ningjia He*
The Key Sericultural Laboratory of Agricultural Ministry, College of Biotechnology, Southwest University, Beibei, Chongqing 400715, China
a r t i c l e i n f o
Article history:
Received 6 December 2009
Received in revised form
18 January 2010
Accepted 29 January 2010
Keywords:
Bombyx mori
Cuticular protein
Chitin
Binding
a b s t r a c t
The silkworm is a model organism for Lepidoptera. Its cuticle is composed mainly of chitin and proteins,
which plays essential roles in multiple physiological functions. The binding of proteins to chitin plays an
important role for cuticle formation. In this research, a chitin-binding assay followed by a proteomics
analysis was carried out using the proteins extracted from the 5th instar larval cuticles. As results,
twenty-two proteins were identified including nine cuticular proteins, two lysozyme precursors, two
proteins with chitin-binding-type 2 domains, and other proteins. A cuticular protein with the RR-1
consensus, BmorCPR56, and a silkworm Tweedle protein, BmorCPT1, were detected in the chitin-binding
fraction for the first time and their chitin-binding activities were further confirmed in vitro. The results of
this research increase our understanding of the structure of the silkworm larval cuticle.
2010 Elsevier Ltd. All rights reserved.
1. Introduction
The domesticated silkworm, Bombyx mori, is a model organism
of Lepidoptera. As the most outer layer between itself and the
environment, silkworm cuticle plays essential roles in multiple
physiological functions to protect its body from the invasion of
pathogens, the penetration of insecticides, physical injury, and
dehydration (Chapman, 1969; Weber and Weidner, 1974; Fretter
and Graham, 1976; Meglitsch and Schram, 1991). Cuticle is vital
for survival of insects and completely differs from the previously
known tissue in mammal. Insect cuticle is composed mainly of
chitin, a polymer of N-acetylglucosamine, which is embedded in
a matrix of protein, polyphenols and water, with small amounts of
lipid (Vincent and Wegst, 2004). Multiple proteins exist in cuticle
such as pigments, pigment-binding proteins, and enzymes used in
sclerotization and for cuticle digestion (reviewed in Willis et al.,
2005). Besides nonstructural proteins, numerous structural
proteins were identified and are referred to as cuticular proteins in
the present research. Rebers and Riddiford first identified
a consensus sequence conserved in cuticular proteins that is now
referred to as the R&R Consensus (Rebers and Riddiford, 1988).
Since its discovery, the sequencing of more cuticular proteins has
led to a modification of the R&R Consensus (Willis, 1999). Three
distinct forms of the R&R Consensus have been recognized and
named as RR-1, RR-2, and RR-3 by Andersen (Andersen, 1998,
2000). Other conserved motifs, such as the AAP(A/V) repeat, the
18 amino acid cuticle consensus, the 44 amino acid cuticle
consensus, CPF, and the Tweedle motif have been recognized from
a variety of cuticular proteins (Andersen et al., 1995, 1997, 2000;
Togawa et al., 2007; Guan et al., 2006). The genomic project of B.
mori was completed by Chinese and Japanese groups (Xia et al.,
2004; Mita et al., 2004). By searching the conserved motifs
against the available silkworm database, Fujiwara and his group
annotated the genes encoding the silkworm cuticular proteins. As
results, 220 putative cuticular protein genes were found including
148 of the R&R Consensus bearing genes (BmorCPR), 4 Tweedle
protein genes (BmorCPT), 4 genes that code for CPFL proteins and so
on (Futahashi et al., 2008).
Chitin and cuticular proteins are secreted by epidermal cells into
an amorphous assembly zone. At that region, the chitin and
proteins self-assemble into regularly arranged fibrils. Insect chitin
is a b-1,4-linked acetylated glucosamine akin to cellulose. The
chitin chains in the insect body are arranged into highly crystalline
structure and characterized by an anti-paralleled joining of sugar
chains (Vincent and Wegst, 2004). Thus, identifying chitin-binding
protein is a critical step toward increasing our understanding of the
structure of insect cuticle. Any knowledge of this structure will
assist in the elucidation of the diversity and success of insects.
* Corresponding author. Tel.: þ86 23 6825 0797; fax: þ86 23 6825 1128.
E-mail addresses: ty008tl@163.com (L. Tang), kiuboliang@gmail.com (J. Liang),
zhigaozhan@hotmal.com (Z. Zhan), xbxzh@swu.edu.cn (Z. Xiang), hejia@swu.edu.cn
(N. He).
Contents lists available at ScienceDirect
Insect Biochemistry and Molecular Biology
journal homepage: www.elsevier.com/locate/ibmb
0965-1748/$ e see front matter 2010 Elsevier Ltd. All rights reserved.
doi:10.1016/j.ibmb.2010.01.010
of silkworm, Bombyx mori
Liang Tang, Jiubo Liang, Zhigao Zhan, Zhonghuai Xiang, Ningjia He*
The Key Sericultural Laboratory of Agricultural Ministry, College of Biotechnology, Southwest University, Beibei, Chongqing 400715, China
a r t i c l e i n f o
Article history:
Received 6 December 2009
Received in revised form
18 January 2010
Accepted 29 January 2010
Keywords:
Bombyx mori
Cuticular protein
Chitin
Binding
a b s t r a c t
The silkworm is a model organism for Lepidoptera. Its cuticle is composed mainly of chitin and proteins,
which plays essential roles in multiple physiological functions. The binding of proteins to chitin plays an
important role for cuticle formation. In this research, a chitin-binding assay followed by a proteomics
analysis was carried out using the proteins extracted from the 5th instar larval cuticles. As results,
twenty-two proteins were identified including nine cuticular proteins, two lysozyme precursors, two
proteins with chitin-binding-type 2 domains, and other proteins. A cuticular protein with the RR-1
consensus, BmorCPR56, and a silkworm Tweedle protein, BmorCPT1, were detected in the chitin-binding
fraction for the first time and their chitin-binding activities were further confirmed in vitro. The results of
this research increase our understanding of the structure of the silkworm larval cuticle.
2010 Elsevier Ltd. All rights reserved.
1. Introduction
The domesticated silkworm, Bombyx mori, is a model organism
of Lepidoptera. As the most outer layer between itself and the
environment, silkworm cuticle plays essential roles in multiple
physiological functions to protect its body from the invasion of
pathogens, the penetration of insecticides, physical injury, and
dehydration (Chapman, 1969; Weber and Weidner, 1974; Fretter
and Graham, 1976; Meglitsch and Schram, 1991). Cuticle is vital
for survival of insects and completely differs from the previously
known tissue in mammal. Insect cuticle is composed mainly of
chitin, a polymer of N-acetylglucosamine, which is embedded in
a matrix of protein, polyphenols and water, with small amounts of
lipid (Vincent and Wegst, 2004). Multiple proteins exist in cuticle
such as pigments, pigment-binding proteins, and enzymes used in
sclerotization and for cuticle digestion (reviewed in Willis et al.,
2005). Besides nonstructural proteins, numerous structural
proteins were identified and are referred to as cuticular proteins in
the present research. Rebers and Riddiford first identified
a consensus sequence conserved in cuticular proteins that is now
referred to as the R&R Consensus (Rebers and Riddiford, 1988).
Since its discovery, the sequencing of more cuticular proteins has
led to a modification of the R&R Consensus (Willis, 1999). Three
distinct forms of the R&R Consensus have been recognized and
named as RR-1, RR-2, and RR-3 by Andersen (Andersen, 1998,
2000). Other conserved motifs, such as the AAP(A/V) repeat, the
18 amino acid cuticle consensus, the 44 amino acid cuticle
consensus, CPF, and the Tweedle motif have been recognized from
a variety of cuticular proteins (Andersen et al., 1995, 1997, 2000;
Togawa et al., 2007; Guan et al., 2006). The genomic project of B.
mori was completed by Chinese and Japanese groups (Xia et al.,
2004; Mita et al., 2004). By searching the conserved motifs
against the available silkworm database, Fujiwara and his group
annotated the genes encoding the silkworm cuticular proteins. As
results, 220 putative cuticular protein genes were found including
148 of the R&R Consensus bearing genes (BmorCPR), 4 Tweedle
protein genes (BmorCPT), 4 genes that code for CPFL proteins and so
on (Futahashi et al., 2008).
Chitin and cuticular proteins are secreted by epidermal cells into
an amorphous assembly zone. At that region, the chitin and
proteins self-assemble into regularly arranged fibrils. Insect chitin
is a b-1,4-linked acetylated glucosamine akin to cellulose. The
chitin chains in the insect body are arranged into highly crystalline
structure and characterized by an anti-paralleled joining of sugar
chains (Vincent and Wegst, 2004). Thus, identifying chitin-binding
protein is a critical step toward increasing our understanding of the
structure of insect cuticle. Any knowledge of this structure will
assist in the elucidation of the diversity and success of insects.
* Corresponding author. Tel.: þ86 23 6825 0797; fax: þ86 23 6825 1128.
E-mail addresses: ty008tl@163.com (L. Tang), kiuboliang@gmail.com (J. Liang),
zhigaozhan@hotmal.com (Z. Zhan), xbxzh@swu.edu.cn (Z. Xiang), hejia@swu.edu.cn
(N. He).
Contents lists available at ScienceDirect
Insect Biochemistry and Molecular Biology
journal homepage: www.elsevier.com/locate/ibmb
0965-1748/$ e see front matter 2010 Elsevier Ltd. All rights reserved.
doi:10.1016/j.ibmb.2010.01.010
0/5000
รหัสของโปรตีนไคทินผูกจากโปรตีน larvalของไหม ไหมถังเหลียง เห ลี Jiubo, Zhigao นไต Zhonghuai เซี ยง Ningjia เขา *ห้องปฏิบัติการ Sericultural คีย์ของกระทรวงเกษตร วิทยาลัยเทคโนโลยีชีวภาพ มหาวิทยาลัยซีหนาน Beibei ฉงชิ่ง 400715 จีนr t ฉัน c l e ฉัน n f oบทความประวัติ:ได้รับ 6 2552 ธันวาคมได้รับในแบบฟอร์มการปรับปรุง18 2553 มกราคมยอมรับ 29 2553 มกราคมคำสำคัญ:ไหมโปรตีน cuticularไคทินผูกแบบ b s t r c tไหมเป็นสิ่งมีชีวิตรูปแบบสำหรับเจาะต้น ประกอบด้วยส่วนใหญ่ของไคทินและโปรตีน การตัดแต่งหนังซึ่งเล่นบทบาทที่สำคัญในสรีรวิทยาหลายฟังก์ชัน ผูกของวิลเลียมเล่นไคทินบทบาทที่สำคัญสำหรับผู้แต่งตัดแต่งหนัง ในงานวิจัยนี้ การวิเคราะห์ไคทินผูกตาม ด้วยโปรตีโอมิกส์วิเคราะห์ถูกดำเนินโดยใช้โปรตีนที่สกัดจาก cuticles การ larval instar 5 เป็นผลระบุยี่สิบสองโปรตีนรวมทั้งโปรตีน cuticular เก้า precursors lysozyme 2, 2โปรตีน มีไคทินผูกพันชนิด 2 โดเมน และโปรตีนอื่น ๆ โปรตีน cuticular RR-1มติ BmorCPR56 และไหมโปรตีน Tweedle, BmorCPT1 พบในผูกไคทินเศษส่วนเป็นครั้งแรกและกิจกรรมไคทินรวมได้เพิ่มเติมยืนยันใน ผลลัพธ์ของงานวิจัยนี้เพิ่มเราเข้าใจโครงสร้างของกำพร้า larval ไหม2010 Elsevier จำกัด สงวนลิขสิทธิ์ทั้งหมด1. บทนำสิ่งมีชีวิตที่จำลองเป็นบ้านไหม ไหมของเจาะต้น ชั้นนอกเป็นที่สุดระหว่างตัวเองและสิ่งแวดล้อม ตัดแต่งหนังไหมเล่นบทบาทสำคัญในหลายฟังก์ชันสรีรวิทยาของร่างกายป้องกันการบุกรุกของโรค การกำจัดแมลงศัตรูพืช การบาดเจ็บทางกายภาพ การเจาะ และคายน้ำ (แชปแมน 1969 แบ่งแยกและ Weidner, 1974 Fretterและแก รแฮม 1976 Meglitsch ก Schram, 1991) ตัดแต่งหนังเป็นสำคัญเพื่อความอยู่รอด ของแมลง และสมบูรณ์แตกต่างจากก่อนหน้านี้เนื้อเยื่อที่รู้จักในเท้า ตัดแต่งหนังแมลงประกอบด้วยส่วนใหญ่ไคทิน พอลิเมอร์ของ N-acetylglucosamine ที่ฝังอยู่ในเมตริกซ์ของโปรตีน โพลีฟีน และ น้ำ มีจำนวนน้อยไขมัน (Vincent และ Wegst, 2004) โปรตีนหลายที่มีอยู่ในการตัดแต่งหนังเช่นสี โปรตีนผงผูก และเอนไซม์ที่ใช้ในsclerotization และย่อยอาหารตัดแต่งหนัง (ทานใน Willis et al.,2005) นอกจากโปรตีน nonstructural โครงสร้างมากมายโปรตีนระบุ และอ้างอิงถึงเป็น cuticular โปรตีนในการวิจัยปัจจุบัน Rebers และ Riddiford ต้อง ระบุช่วยลำดับอยู่ในโปรตีน cuticular ที่อ้างอิงถึงเป็น R และ R มติ (Rebers และ Riddiford, 1988)ตั้งแต่การค้นพบ ลำดับของโปรตีน cuticular มากมีนำไปสู่การปรับเปลี่ยนของ R & R มติ (Willis, 1999) สามฟอร์มทั้งหมดของ R & R มติได้รับรู้ และชื่อ RR 1, RR-2 และ 3 RR โดยแอนเดอร์ (แอนเดอร์ 19982000) การลงการนำอื่น ๆ เช่น AAP(A/V) ซ้ำ การช่วยตัดแต่งหนัง 18 กรดอะมิโน กรดอะมิโน 44 กำพร้ามติ บริษัทซีพีเอฟ แปลน Tweedle มีการรับรู้ และจากความหลากหลายของโปรตีน cuticular (แอนเดอร์และ al., 1995, 1997, 2000Togawa et al., 2007 กวนและ al., 2006) โครงการ genomic ของบีโมริเสร็จกลุ่มจีนและญี่ปุ่น (เซี่ย et al.,2004 Mita et al., 2004) โดยการค้นหาความนำจากฐานข้อมูลว่างไหม ฟุจิวะ และกลุ่มของเขาใส่คำอธิบายประกอบยีนที่เข้ารหัสโปรตีน cuticular ไหม เป็นยีนโปรตีน putative cuticular 220 พบผลลัพธ์รวมทั้ง148 ของ R และ R ช่วยเรืองยีน (BmorCPR), 4 Tweedleโปรตีนยีน (BmorCPT), 4 ยีนที่รหัสสำหรับโปรตีน CPFL และดังนั้นบน (Futahashi et al., 2008)ไคทินและ cuticular โปรตีน secreted โดยเซลล์ epidermal เป็นโซนประกอบไปด้วย ในภูมิภาคที่ ไคทิน และโปรตีนประกอบด้วยตนเองเป็น fibrils ที่จัดเป็นประจำ ไคทินแมลงแบบ b-1,4-เชื่อมโยง acetylated glucosamine เหมือนกับเซลลูโลสได้ ที่ไคทินโซ่ในตัวแมลงจะถูกจัดเป็นผลึกสูงโครงสร้าง และลักษณะการเข้าร่วมต่อต้าน paralleled น้ำตาลโซ่ (Vincent และ Wegst, 2004) ดังนั้น ระบุรวมไคทินโปรตีนเป็นขั้นตอนที่สำคัญต่อการเพิ่มความเข้าใจของเราโครงสร้างของการตัดแต่งหนังแมลง ความรู้ใด ๆ ของโครงสร้างนี้จะช่วย elucidation ของความหลากหลายและความสำเร็จของแมลง* ผู้สอดคล้องกัน โทร.: þ86 23 6825 0797 โทรสาร: þ86 23 6825 1128ที่อยู่อีเมล์: ty008tl@163.com (L. ถัง), kiuboliang@gmail.com (J. เหลียง),zhigaozhan@hotmal.com (z.นไต) hejia@swu.edu.cn, xbxzh@swu.edu.cn (z.เซียง)(N. เขา)เนื้อหารายการ ScienceDirectแมลงชีวเคมีและอณูชีววิทยาหน้าแรกของสมุดรายวัน: www.elsevier.com/ ค้น หา/ibmbอี 0965-1748 / $ดูหน้าเรื่อง 2010 Elsevier จำกัด สงวนลิขสิทธิ์ทั้งหมดdoi:10.1016/j.ibmb.2010.01.010
การแปล กรุณารอสักครู่..
บัตรประจำตัวของโปรตีนไคตินมีผลผูกพันจากโปรตีนตัวอ่อน
ของหนอนไหม, ไหม
เหลียงถัง Jiubo เหลียง Zhigao Zhan, Zhonghuai Xiang, Ningjia เขา *
กุญแจ Sericultural ห้องปฏิบัติการของกระทรวงเกษตรวิทยาลัยเทคโนโลยีชีวภาพมหาวิทยาลัย Southwest, Beibei, ฉงชิ่ง 400715 จีน
rticleinfo
ประวัติศาสตร์บทความ
ที่ได้รับ 6 ธันวาคม 2009
ที่ได้รับในรูปแบบปรับปรุง
18 มกราคม 2010
ได้รับการยอมรับ 29 มกราคม 2010
คำสำคัญ:
ไหม
cuticular โปรตีน
ไคติน
ผูก
bstract
ไหมเป็นสิ่งมีชีวิตแบบจำลองสำหรับผีเสื้อ หนังกำพร้าของมันประกอบด้วยส่วนใหญ่ของไคตินและโปรตีน
ที่มีบทบาทสำคัญในการทำงานทางสรีรวิทยาหลาย ผูกพันของโปรตีนไคตินเล่น
บทบาทสำคัญในการสร้างหนังกำพร้า ในงานวิจัยนี้ทดสอบไคตินมีผลผูกพันตามด้วยโปรตีน
วิเคราะห์ได้ดำเนินการโดยใช้โปรตีนสกัดจากวัย 5 ล่อนตัวอ่อน ในฐานะที่เป็นผล
ยี่สิบสองโปรตีนถูกระบุเก้ารวมทั้งโปรตีน cuticular สองสารตั้งต้น lysozyme สอง
โปรตีนที่มีไคตินมีผลผูกพันประเภท 2 โดเมนและโปรตีนอื่น ๆ โปรตีน cuticular กับ RR-1
ฉันทามติ BmorCPR56 และไหมเดิ้ลโปรตีน BmorCPT1 ถูกตรวจพบในไคตินมีผลผูกพัน
ส่วนเป็นครั้งแรกและกิจกรรมไคตินมีผลผูกพันของพวกเขาได้รับการยืนยันต่อไปในหลอดทดลอง ผลการ
วิจัยครั้งนี้เพิ่มความเข้าใจของเราโครงสร้างของหนังกำพร้าตัวอ่อนไหม.
? 2010 เอลส์ จำกัด สงวนลิขสิทธิ์.
1 บทนำ
ไหมโดดเด่น, ไหมเป็นสิ่งมีชีวิตรูปแบบ
ของผีเสื้อ ในฐานะที่เป็นชั้นนอกที่สุดระหว่างตัวเองและ
สภาพแวดล้อมของหนังกำพร้าไหมมีบทบาทสำคัญในหลาย
ฟังก์ชั่นทางสรีรวิทยาเพื่อปกป้องร่างกายจากการรุกรานของ
เชื้อโรครุกของยาฆ่าแมลงที่ได้รับบาดเจ็บทางกายภาพและ
การคายน้ำ (แชปแมน, 1969; เวเบอร์และ Weidner 1974 ; Fretter
และเกรแฮม, 1976; Meglitsch และ Schram, 1991) หนังกำพร้ามีความสำคัญ
สำหรับการอยู่รอดของแมลงและสมบูรณ์แตกต่างจากก่อนหน้านี้
เป็นที่รู้จักกันในเนื้อเยื่อเลี้ยงลูกด้วยนม หนังกำพร้าแมลงส่วนใหญ่ประกอบด้วย
ไคติน, ลีเมอร์ของ N-acetylglucosamine ซึ่งถูกฝังอยู่ใน
เมทริกซ์ของโปรตีนโพลีฟีนและน้ำที่มีจำนวนเล็ก ๆ ของ
ไขมัน (เซนต์วินเซนต์และ Wegst, 2004) โปรตีนที่มีอยู่ในหลายหนังกำพร้า
เช่นสีโปรตีนสีที่มีผลผูกพันและเอนไซม์ที่ใช้ในการ
sclerotization และสำหรับการย่อยอาหารหนังกำพร้า (สอบทานในวิลลิส et al.,
2005) นอกจากนี้โปรตีนกระทบกระเทือนโครงสร้างหลาย
โปรตีนถูกระบุและจะเรียกว่าโปรตีน cuticular ในขณะที่
การวิจัยในปัจจุบัน Rebers และ Riddiford แรกระบุ
ลำดับฉันทามติในป่าสงวนโปรตีน cuticular ที่ตอนนี้
เรียกว่า R & R Consensus (Rebers และ Riddiford, 1988).
ตั้งแต่การค้นพบของการเรียงลำดับของโปรตีน cuticular มากขึ้นได้
นำไปสู่การปรับเปลี่ยนของ R & R Consensus (วิลลิส , 1999) สาม
รูปแบบที่แตกต่างของ R & R Consensus ได้รับการยอมรับและ
มีชื่อเป็น RR-1, RR-2 และ RR-3 โดย Andersen (Andersen, 1998,
2000) ลวดลายอนุรักษ์อื่น ๆ เช่น AAP (A / V) ซ้ำ
ฉันทามติหนังกำพร้ากรดอะมิโน 18 หนังกำพร้ากรดอะมิโน 44
ฉันทามติซีพีเอฟและบรรทัดฐานเดิ้ลได้รับการยอมรับจาก
หลากหลายของโปรตีน cuticular (Andersen et al., 1995, 1997, 2000;
Togawa et al, 2007;.. กวน et al, 2006) โครงการจีโนมของ B.
Mori เสร็จสมบูรณ์โดยกลุ่มจีนและญี่ปุ่น (Xia, et al.
2004;. Mita, et al, 2004) โดยการค้นหาลวดลายอนุรักษ์
กับฐานข้อมูลที่มีอยู่ไหม, ฟูจิวาระและกลุ่มของเขา
ข้อเขียนยีนเข้ารหัสโปรตีนไหม cuticular ในฐานะที่เป็น
ผล 220 ยีนโปรตีนสมมุติ cuticular ที่พบรวม
148 ของ R & R Consensus ยีนแบริ่ง (BmorCPR) 4 เดิ้ล
ยีนโปรตีน (BmorCPT) 4 ยีนที่รหัสโปรตีน CPFL และอื่น ๆ
บน (Futahashi et al., 2008).
ไคติน และโปรตีน cuticular จะหลั่งจากเซลล์ผิวหนังเข้าไปใน
เขตประกอบสัณฐาน ในภูมิภาคที่ไคตินและ
โปรตีนประกอบตัวเองเป็นซ่านจัดอย่างสม่ำเสมอ ไคตินแมลง
เป็น B-1,4-เชื่อมโยง acetylated กลูโคซาคล้ายกับเซลลูโลส
โซ่ไคตินในร่างกายแมลงถูกจัดให้เป็นผลึกสูง
โครงสร้างและความโดดเด่นด้วยการต่อต้านการขนานเข้าร่วมของน้ำตาล
โซ่ (เซนต์วินเซนต์และ Wegst, 2004) ดังนั้นการระบุไคตินมีผลผูกพัน
โปรตีนเป็นขั้นตอนสำคัญต่อการเพิ่มความเข้าใจของเรา
โครงสร้างของหนังกำพร้าแมลง ความรู้ใด ๆ ของโครงสร้างนี้จะ
ช่วยในการชี้แจงของความหลากหลายและความสำเร็จของแมลง.
* ผู้รับผิดชอบ Tel .: þ86 23 6825 0797; โทรสาร: þ86 23 6825 1128.
ที่อยู่ E-mail: ty008tl@163.com (ลิตรถัง) kiuboliang@gmail.com (เจเหลียง),
zhigaozhan@hotmal.com (Z. Zhan) xbxzh@swu.edu .cn (Z. Xiang) hejia@swu.edu.cn
(N. เขา).
รายการเนื้อหาที่มีอยู่ใน ScienceDirect
แมลงชีวเคมีและอณูชีววิทยา
วารสารหน้าแรก: www.elsevier.com/locate/ibmb
0965-1748 / $ อีเห็น เรื่องหน้า? 2010 เอลส์ จำกัด สงวนลิขสิทธิ์.
ดอย: 10.1016 / j.ibmb.2010.01.010
ของหนอนไหม, ไหม
เหลียงถัง Jiubo เหลียง Zhigao Zhan, Zhonghuai Xiang, Ningjia เขา *
กุญแจ Sericultural ห้องปฏิบัติการของกระทรวงเกษตรวิทยาลัยเทคโนโลยีชีวภาพมหาวิทยาลัย Southwest, Beibei, ฉงชิ่ง 400715 จีน
rticleinfo
ประวัติศาสตร์บทความ
ที่ได้รับ 6 ธันวาคม 2009
ที่ได้รับในรูปแบบปรับปรุง
18 มกราคม 2010
ได้รับการยอมรับ 29 มกราคม 2010
คำสำคัญ:
ไหม
cuticular โปรตีน
ไคติน
ผูก
bstract
ไหมเป็นสิ่งมีชีวิตแบบจำลองสำหรับผีเสื้อ หนังกำพร้าของมันประกอบด้วยส่วนใหญ่ของไคตินและโปรตีน
ที่มีบทบาทสำคัญในการทำงานทางสรีรวิทยาหลาย ผูกพันของโปรตีนไคตินเล่น
บทบาทสำคัญในการสร้างหนังกำพร้า ในงานวิจัยนี้ทดสอบไคตินมีผลผูกพันตามด้วยโปรตีน
วิเคราะห์ได้ดำเนินการโดยใช้โปรตีนสกัดจากวัย 5 ล่อนตัวอ่อน ในฐานะที่เป็นผล
ยี่สิบสองโปรตีนถูกระบุเก้ารวมทั้งโปรตีน cuticular สองสารตั้งต้น lysozyme สอง
โปรตีนที่มีไคตินมีผลผูกพันประเภท 2 โดเมนและโปรตีนอื่น ๆ โปรตีน cuticular กับ RR-1
ฉันทามติ BmorCPR56 และไหมเดิ้ลโปรตีน BmorCPT1 ถูกตรวจพบในไคตินมีผลผูกพัน
ส่วนเป็นครั้งแรกและกิจกรรมไคตินมีผลผูกพันของพวกเขาได้รับการยืนยันต่อไปในหลอดทดลอง ผลการ
วิจัยครั้งนี้เพิ่มความเข้าใจของเราโครงสร้างของหนังกำพร้าตัวอ่อนไหม.
? 2010 เอลส์ จำกัด สงวนลิขสิทธิ์.
1 บทนำ
ไหมโดดเด่น, ไหมเป็นสิ่งมีชีวิตรูปแบบ
ของผีเสื้อ ในฐานะที่เป็นชั้นนอกที่สุดระหว่างตัวเองและ
สภาพแวดล้อมของหนังกำพร้าไหมมีบทบาทสำคัญในหลาย
ฟังก์ชั่นทางสรีรวิทยาเพื่อปกป้องร่างกายจากการรุกรานของ
เชื้อโรครุกของยาฆ่าแมลงที่ได้รับบาดเจ็บทางกายภาพและ
การคายน้ำ (แชปแมน, 1969; เวเบอร์และ Weidner 1974 ; Fretter
และเกรแฮม, 1976; Meglitsch และ Schram, 1991) หนังกำพร้ามีความสำคัญ
สำหรับการอยู่รอดของแมลงและสมบูรณ์แตกต่างจากก่อนหน้านี้
เป็นที่รู้จักกันในเนื้อเยื่อเลี้ยงลูกด้วยนม หนังกำพร้าแมลงส่วนใหญ่ประกอบด้วย
ไคติน, ลีเมอร์ของ N-acetylglucosamine ซึ่งถูกฝังอยู่ใน
เมทริกซ์ของโปรตีนโพลีฟีนและน้ำที่มีจำนวนเล็ก ๆ ของ
ไขมัน (เซนต์วินเซนต์และ Wegst, 2004) โปรตีนที่มีอยู่ในหลายหนังกำพร้า
เช่นสีโปรตีนสีที่มีผลผูกพันและเอนไซม์ที่ใช้ในการ
sclerotization และสำหรับการย่อยอาหารหนังกำพร้า (สอบทานในวิลลิส et al.,
2005) นอกจากนี้โปรตีนกระทบกระเทือนโครงสร้างหลาย
โปรตีนถูกระบุและจะเรียกว่าโปรตีน cuticular ในขณะที่
การวิจัยในปัจจุบัน Rebers และ Riddiford แรกระบุ
ลำดับฉันทามติในป่าสงวนโปรตีน cuticular ที่ตอนนี้
เรียกว่า R & R Consensus (Rebers และ Riddiford, 1988).
ตั้งแต่การค้นพบของการเรียงลำดับของโปรตีน cuticular มากขึ้นได้
นำไปสู่การปรับเปลี่ยนของ R & R Consensus (วิลลิส , 1999) สาม
รูปแบบที่แตกต่างของ R & R Consensus ได้รับการยอมรับและ
มีชื่อเป็น RR-1, RR-2 และ RR-3 โดย Andersen (Andersen, 1998,
2000) ลวดลายอนุรักษ์อื่น ๆ เช่น AAP (A / V) ซ้ำ
ฉันทามติหนังกำพร้ากรดอะมิโน 18 หนังกำพร้ากรดอะมิโน 44
ฉันทามติซีพีเอฟและบรรทัดฐานเดิ้ลได้รับการยอมรับจาก
หลากหลายของโปรตีน cuticular (Andersen et al., 1995, 1997, 2000;
Togawa et al, 2007;.. กวน et al, 2006) โครงการจีโนมของ B.
Mori เสร็จสมบูรณ์โดยกลุ่มจีนและญี่ปุ่น (Xia, et al.
2004;. Mita, et al, 2004) โดยการค้นหาลวดลายอนุรักษ์
กับฐานข้อมูลที่มีอยู่ไหม, ฟูจิวาระและกลุ่มของเขา
ข้อเขียนยีนเข้ารหัสโปรตีนไหม cuticular ในฐานะที่เป็น
ผล 220 ยีนโปรตีนสมมุติ cuticular ที่พบรวม
148 ของ R & R Consensus ยีนแบริ่ง (BmorCPR) 4 เดิ้ล
ยีนโปรตีน (BmorCPT) 4 ยีนที่รหัสโปรตีน CPFL และอื่น ๆ
บน (Futahashi et al., 2008).
ไคติน และโปรตีน cuticular จะหลั่งจากเซลล์ผิวหนังเข้าไปใน
เขตประกอบสัณฐาน ในภูมิภาคที่ไคตินและ
โปรตีนประกอบตัวเองเป็นซ่านจัดอย่างสม่ำเสมอ ไคตินแมลง
เป็น B-1,4-เชื่อมโยง acetylated กลูโคซาคล้ายกับเซลลูโลส
โซ่ไคตินในร่างกายแมลงถูกจัดให้เป็นผลึกสูง
โครงสร้างและความโดดเด่นด้วยการต่อต้านการขนานเข้าร่วมของน้ำตาล
โซ่ (เซนต์วินเซนต์และ Wegst, 2004) ดังนั้นการระบุไคตินมีผลผูกพัน
โปรตีนเป็นขั้นตอนสำคัญต่อการเพิ่มความเข้าใจของเรา
โครงสร้างของหนังกำพร้าแมลง ความรู้ใด ๆ ของโครงสร้างนี้จะ
ช่วยในการชี้แจงของความหลากหลายและความสำเร็จของแมลง.
* ผู้รับผิดชอบ Tel .: þ86 23 6825 0797; โทรสาร: þ86 23 6825 1128.
ที่อยู่ E-mail: ty008tl@163.com (ลิตรถัง) kiuboliang@gmail.com (เจเหลียง),
zhigaozhan@hotmal.com (Z. Zhan) xbxzh@swu.edu .cn (Z. Xiang) hejia@swu.edu.cn
(N. เขา).
รายการเนื้อหาที่มีอยู่ใน ScienceDirect
แมลงชีวเคมีและอณูชีววิทยา
วารสารหน้าแรก: www.elsevier.com/locate/ibmb
0965-1748 / $ อีเห็น เรื่องหน้า? 2010 เอลส์ จำกัด สงวนลิขสิทธิ์.
ดอย: 10.1016 / j.ibmb.2010.01.010
การแปล กรุณารอสักครู่..
รหัสของไคตินโปรตีนที่จับกับโปรตีนจากหนอน
ของหนอนไหม ( Bombyx mori
เหลียงตั้ง jiubo เลี่ยง zhigao จาน zhonghuai เซียง ningjia เขา
ปฏิบัติการหม่อนไหมที่สำคัญของกระทรวงเกษตร วิทยาลัยเทคโนโลยีชีวภาพ มหาวิทยาลัยตะวันตกเฉียงใต้ Beibei ฉงชิ่ง 400715 จีน
R C L E I n t ฉัน F :
o
บทความประวัติศาสตร์ที่ได้รับ 6 ธันวาคม 2552
รับแก้ไขแบบฟอร์ม18 มกราคม 2553 29 มกราคม 2553
ยอมรับข้อสังเกต : ลำตัว
( Bombyx mori โปรตีนไค
ไม่ผูกพัน B R A C T
ตัวไหม เป็นแบบอินทรีย์สำหรับที่มา . ของ cuticle ประกอบด้วยส่วนใหญ่ของโปรตีนไคตินและ
ซึ่งเล่นบทบาทสำคัญในการทำงานทางสรีรวิทยาหลาย การผูกโปรตีนเพื่อตุ้ยเล่นเป็นบทบาทสำคัญสำหรับการพัฒนาพร้า . ในงานวิจัยนี้มีไคใช้ผูกตามการวิเคราะห์โปรติโอมิก
ได้ดําเนินการใช้โปรตีนสกัดจากตัวอ่อนระยะที่ 5 cuticles . จากโปรตีน
22 ระบุโปรตีนรวมทั้งเก้าลำตัวสองไลโซไซม์ตั้งต้นสองชนิดผูกกับโปรตีนไค
2 โดเมน และโปรตีนอื่น ๆ โปรตีนลำตัวกับ rr-1 ฉันทามติ bmorcpr56
, ,และ tweedle bmorcpt1 ไหม , โปรตีน พบว่า ไคตินผูกพัน
เศษส่วนเป็นครั้งแรกและ chitin binding กิจกรรมของพวกเขายืนยันเพิ่มเติมในหลอดแก้ว ผลของการวิจัยนี้
เพิ่มความเข้าใจในโครงสร้างของหนอนไหม ดักแด้ พร้า .
2010 เอลส์ จำกัด .
1 บทนำ
โดดเด่นหนอนไหม ( Bombyx mori เป็นแบบอินทรีย์
ที่มาของ . เป็นชั้นนอกสุดระหว่างตัวเองกับ
สิ่งแวดล้อมไหม หนังกําพร้า เล่นบทบาทจำเป็นในหน้าที่ทางสรีรวิทยาหลาย
เพื่อปกป้องร่างกายจากการรุกรานของ
เชื้อโรค , การเจาะของแมลงการบาดเจ็บทางกายภาพและ
dehydration ( Chapman , 1969 ; เวเบอร์และไวด์เนอร์ , 1974 ; fretter
และ Graham , 1976 ; meglitsch และ แชรม , 1991 ) หนังกำพร้าเป็นสําคัญ
เพื่อความอยู่รอดของแมลงและสมบูรณ์แตกต่างจากก่อนหน้านี้
เรียกว่าเนื้อเยื่อในสัตว์เลี้ยงลูกด้วยนม หนังกำพร้าของแมลงประกอบด้วยส่วนใหญ่ของไคตินเป็นพอลิเมอร์ของ n-acetylglucosamine
, ,
ที่ฝังอยู่ในเมทริกซ์โปรตีน โพลีฟีนอล และน้ำที่มีปริมาณน้อยของ
3 ( เซนต์วินเซนต์และ wegst , 2004 ) โปรตีนหลายที่มีอยู่ในผิวหนัง
เช่นสี , รงควัตถุผูกพันโปรตีน และเอนไซม์ที่ใช้ใน
sclerotization และการย่อยอาหารที่ผิวหนังชั้นนอก ( ทบทวน
วิลลิส et al . , 2005 ) นอกจากนี้โปรตีนไม่ได้ โปรตีนโครงสร้าง
มากมายถูกระบุและจะเรียกว่าลำตัวโปรตีนใน
การวิจัยปัจจุบัน และ rebers riddiford ระบุก่อน
ฉันทามติลำดับป่าสงวนในลำตัวโปรตีนที่ตอนนี้
เรียกว่า R & R เอกฉันท์ ( rebers และ riddiford
, 1988 )ตั้งแต่การค้นพบของ การจัดลำตัวมีโปรตีนมากกว่า
ที่นำไปสู่การเปลี่ยนแปลงของ R & R เอกฉันท์ ( Willis , 1999 ) 3
ที่แตกต่างกันรูปแบบของ R & R จำนวนได้รับการยอมรับและ
ชื่อเป็น rr-1 rr-2 , และ rr-3 โดย Andersen ( Andersen , 1998 ,
2 ) อนุรักษ์ลวดลายอื่น เช่น AAP ( A / V ) ย้ำ
18 กรดอะมิโนพร้าฉันทามติ 44 กรดอะมิโนพร้า
ฉันทามติหรือและ tweedle โมทีฟ ได้รับการยอมรับจาก
ความหลากหลายของโปรตีนลำตัว ( Andersen et al . , 1995 , 1997 , 2000 ;
โทกาว่า et al . , 2007 ; กวน et al . , 2006 ) โครงการจีโนมของ B .
โมริแล้วเสร็จโดย จีน และญี่ปุ่น กลุ่ม ( Xia et al . ,
2004 ; มิตะ et al . , 2004 ) โดยการค้นหาอนุรักษ์ลวดลาย
กับฐานข้อมูลไหมใช้ได้ฟูจิวาระและ
กลุ่มของเขาบันทึกย่อที่มีการเข้ารหัสหนอนไหมลำตัวโปรตีน โดย
ผล , 220 ซึ่งลำตัวโปรตีนยีนพบรวมทั้ง
148 ของ R & R เอกฉันท์แบกยีน ( bmorcpr ) , 4 tweedle
โปรตีนยีน ( bmorcpt ) 4 ยีนรหัสสำหรับโปรตีน cpfl แล้ว
( futahashi et al . , 2008 ) .
ไคตินและโปรตีนที่หลั่งโดยตรงลำตัวเป็น เซลล์ใน
เขตประกอบไป .ในภูมิภาคว่า ไคตินและโปรตีนที่ประกอบในตนเองเสมอ
จัดไฟบริล . แมลงไคติน
เป็น b-1,4-linked ยาวกลูคล้ายกับเซลลูโลส
ไคโซ่ในร่างกายแมลงจะจัดในลักษณะผลึกและโครงสร้างสูง
ป้องกันโดยการเข้าร่วมของตาล
โซ่ ( เซนต์วินเซนต์และ wegst , 2004 ) ดังนั้น การเข้าเล่ม
ไคโปรตีนคือการก้าวไปสู่การเพิ่มความเข้าใจของเรา
โครงสร้างของหนังกำพร้าของแมลง มีความรู้โครงสร้างนี้จะช่วยในการประเมิน
ของความหลากหลายและความสำเร็จของแมลง .
* ที่สอดคล้องกันของผู้เขียน โทร . þ 86 23 ขณะนี้ 0797 ; โทรสาร : þ 86 23 ขณะนี้ 1128 .
อีเมล์ : ty008tl@163.com ( L . ถัง ) , kiuboliang@gmail.com ( เจเหลียง ) ( Z ,
zhigaozhan@hotmal.com จ้าน ) xbxzh@swu.edu .CN ( ส. เซียง ) hejia @ มศว . edu cn
( หรือเขา ) .
เนื้อหารายการที่มีอยู่ในวารสารชีววิทยาและชีวเคมีแมลงบริการ
โมเลกุลหน้าแรก : www.elsevier . com / ค้นหา / ibmb
0965-1748 / $ E ดูเรื่องหน้า 2010 เอลส์ จำกัด .
ดอย : 10.1016/j.ibmb.2010.01.010
ของหนอนไหม ( Bombyx mori
เหลียงตั้ง jiubo เลี่ยง zhigao จาน zhonghuai เซียง ningjia เขา
ปฏิบัติการหม่อนไหมที่สำคัญของกระทรวงเกษตร วิทยาลัยเทคโนโลยีชีวภาพ มหาวิทยาลัยตะวันตกเฉียงใต้ Beibei ฉงชิ่ง 400715 จีน
R C L E I n t ฉัน F :
o
บทความประวัติศาสตร์ที่ได้รับ 6 ธันวาคม 2552
รับแก้ไขแบบฟอร์ม18 มกราคม 2553 29 มกราคม 2553
ยอมรับข้อสังเกต : ลำตัว
( Bombyx mori โปรตีนไค
ไม่ผูกพัน B R A C T
ตัวไหม เป็นแบบอินทรีย์สำหรับที่มา . ของ cuticle ประกอบด้วยส่วนใหญ่ของโปรตีนไคตินและ
ซึ่งเล่นบทบาทสำคัญในการทำงานทางสรีรวิทยาหลาย การผูกโปรตีนเพื่อตุ้ยเล่นเป็นบทบาทสำคัญสำหรับการพัฒนาพร้า . ในงานวิจัยนี้มีไคใช้ผูกตามการวิเคราะห์โปรติโอมิก
ได้ดําเนินการใช้โปรตีนสกัดจากตัวอ่อนระยะที่ 5 cuticles . จากโปรตีน
22 ระบุโปรตีนรวมทั้งเก้าลำตัวสองไลโซไซม์ตั้งต้นสองชนิดผูกกับโปรตีนไค
2 โดเมน และโปรตีนอื่น ๆ โปรตีนลำตัวกับ rr-1 ฉันทามติ bmorcpr56
, ,และ tweedle bmorcpt1 ไหม , โปรตีน พบว่า ไคตินผูกพัน
เศษส่วนเป็นครั้งแรกและ chitin binding กิจกรรมของพวกเขายืนยันเพิ่มเติมในหลอดแก้ว ผลของการวิจัยนี้
เพิ่มความเข้าใจในโครงสร้างของหนอนไหม ดักแด้ พร้า .
2010 เอลส์ จำกัด .
1 บทนำ
โดดเด่นหนอนไหม ( Bombyx mori เป็นแบบอินทรีย์
ที่มาของ . เป็นชั้นนอกสุดระหว่างตัวเองกับ
สิ่งแวดล้อมไหม หนังกําพร้า เล่นบทบาทจำเป็นในหน้าที่ทางสรีรวิทยาหลาย
เพื่อปกป้องร่างกายจากการรุกรานของ
เชื้อโรค , การเจาะของแมลงการบาดเจ็บทางกายภาพและ
dehydration ( Chapman , 1969 ; เวเบอร์และไวด์เนอร์ , 1974 ; fretter
และ Graham , 1976 ; meglitsch และ แชรม , 1991 ) หนังกำพร้าเป็นสําคัญ
เพื่อความอยู่รอดของแมลงและสมบูรณ์แตกต่างจากก่อนหน้านี้
เรียกว่าเนื้อเยื่อในสัตว์เลี้ยงลูกด้วยนม หนังกำพร้าของแมลงประกอบด้วยส่วนใหญ่ของไคตินเป็นพอลิเมอร์ของ n-acetylglucosamine
, ,
ที่ฝังอยู่ในเมทริกซ์โปรตีน โพลีฟีนอล และน้ำที่มีปริมาณน้อยของ
3 ( เซนต์วินเซนต์และ wegst , 2004 ) โปรตีนหลายที่มีอยู่ในผิวหนัง
เช่นสี , รงควัตถุผูกพันโปรตีน และเอนไซม์ที่ใช้ใน
sclerotization และการย่อยอาหารที่ผิวหนังชั้นนอก ( ทบทวน
วิลลิส et al . , 2005 ) นอกจากนี้โปรตีนไม่ได้ โปรตีนโครงสร้าง
มากมายถูกระบุและจะเรียกว่าลำตัวโปรตีนใน
การวิจัยปัจจุบัน และ rebers riddiford ระบุก่อน
ฉันทามติลำดับป่าสงวนในลำตัวโปรตีนที่ตอนนี้
เรียกว่า R & R เอกฉันท์ ( rebers และ riddiford
, 1988 )ตั้งแต่การค้นพบของ การจัดลำตัวมีโปรตีนมากกว่า
ที่นำไปสู่การเปลี่ยนแปลงของ R & R เอกฉันท์ ( Willis , 1999 ) 3
ที่แตกต่างกันรูปแบบของ R & R จำนวนได้รับการยอมรับและ
ชื่อเป็น rr-1 rr-2 , และ rr-3 โดย Andersen ( Andersen , 1998 ,
2 ) อนุรักษ์ลวดลายอื่น เช่น AAP ( A / V ) ย้ำ
18 กรดอะมิโนพร้าฉันทามติ 44 กรดอะมิโนพร้า
ฉันทามติหรือและ tweedle โมทีฟ ได้รับการยอมรับจาก
ความหลากหลายของโปรตีนลำตัว ( Andersen et al . , 1995 , 1997 , 2000 ;
โทกาว่า et al . , 2007 ; กวน et al . , 2006 ) โครงการจีโนมของ B .
โมริแล้วเสร็จโดย จีน และญี่ปุ่น กลุ่ม ( Xia et al . ,
2004 ; มิตะ et al . , 2004 ) โดยการค้นหาอนุรักษ์ลวดลาย
กับฐานข้อมูลไหมใช้ได้ฟูจิวาระและ
กลุ่มของเขาบันทึกย่อที่มีการเข้ารหัสหนอนไหมลำตัวโปรตีน โดย
ผล , 220 ซึ่งลำตัวโปรตีนยีนพบรวมทั้ง
148 ของ R & R เอกฉันท์แบกยีน ( bmorcpr ) , 4 tweedle
โปรตีนยีน ( bmorcpt ) 4 ยีนรหัสสำหรับโปรตีน cpfl แล้ว
( futahashi et al . , 2008 ) .
ไคตินและโปรตีนที่หลั่งโดยตรงลำตัวเป็น เซลล์ใน
เขตประกอบไป .ในภูมิภาคว่า ไคตินและโปรตีนที่ประกอบในตนเองเสมอ
จัดไฟบริล . แมลงไคติน
เป็น b-1,4-linked ยาวกลูคล้ายกับเซลลูโลส
ไคโซ่ในร่างกายแมลงจะจัดในลักษณะผลึกและโครงสร้างสูง
ป้องกันโดยการเข้าร่วมของตาล
โซ่ ( เซนต์วินเซนต์และ wegst , 2004 ) ดังนั้น การเข้าเล่ม
ไคโปรตีนคือการก้าวไปสู่การเพิ่มความเข้าใจของเรา
โครงสร้างของหนังกำพร้าของแมลง มีความรู้โครงสร้างนี้จะช่วยในการประเมิน
ของความหลากหลายและความสำเร็จของแมลง .
* ที่สอดคล้องกันของผู้เขียน โทร . þ 86 23 ขณะนี้ 0797 ; โทรสาร : þ 86 23 ขณะนี้ 1128 .
อีเมล์ : ty008tl@163.com ( L . ถัง ) , kiuboliang@gmail.com ( เจเหลียง ) ( Z ,
zhigaozhan@hotmal.com จ้าน ) xbxzh@swu.edu .CN ( ส. เซียง ) hejia @ มศว . edu cn
( หรือเขา ) .
เนื้อหารายการที่มีอยู่ในวารสารชีววิทยาและชีวเคมีแมลงบริการ
โมเลกุลหน้าแรก : www.elsevier . com / ค้นหา / ibmb
0965-1748 / $ E ดูเรื่องหน้า 2010 เอลส์ จำกัด .
ดอย : 10.1016/j.ibmb.2010.01.010
การแปล กรุณารอสักครู่..
ภาษาอื่น ๆ
การสนับสนุนเครื่องมือแปลภาษา: กรีก, กันนาดา, กาลิเชียน, คลิงออน, คอร์สิกา, คาซัค, คาตาลัน, คินยารวันดา, คีร์กิซ, คุชราต, จอร์เจีย, จีน, จีนดั้งเดิม, ชวา, ชิเชวา, ซามัว, ซีบัวโน, ซุนดา, ซูลู, ญี่ปุ่น, ดัตช์, ตรวจหาภาษา, ตุรกี, ทมิฬ, ทาจิก, ทาทาร์, นอร์เวย์, บอสเนีย, บัลแกเรีย, บาสก์, ปัญจาป, ฝรั่งเศส, พาชตู, ฟริเชียน, ฟินแลนด์, ฟิลิปปินส์, ภาษาอินโดนีเซี, มองโกเลีย, มัลทีส, มาซีโดเนีย, มาราฐี, มาลากาซี, มาลายาลัม, มาเลย์, ม้ง, ยิดดิช, ยูเครน, รัสเซีย, ละติน, ลักเซมเบิร์ก, ลัตเวีย, ลาว, ลิทัวเนีย, สวาฮิลี, สวีเดน, สิงหล, สินธี, สเปน, สโลวัก, สโลวีเนีย, อังกฤษ, อัมฮาริก, อาร์เซอร์ไบจัน, อาร์เมเนีย, อาหรับ, อิกโบ, อิตาลี, อุยกูร์, อุสเบกิสถาน, อูรดู, ฮังการี, ฮัวซา, ฮาวาย, ฮินดี, ฮีบรู, เกลิกสกอต, เกาหลี, เขมร, เคิร์ด, เช็ก, เซอร์เบียน, เซโซโท, เดนมาร์ก, เตลูกู, เติร์กเมน, เนปาล, เบงกอล, เบลารุส, เปอร์เซีย, เมารี, เมียนมา (พม่า), เยอรมัน, เวลส์, เวียดนาม, เอสเปอแรนโต, เอสโทเนีย, เฮติครีโอล, แอฟริกา, แอลเบเนีย, โคซา, โครเอเชีย, โชนา, โซมาลี, โปรตุเกส, โปแลนด์, โยรูบา, โรมาเนีย, โอเดีย (โอริยา), ไทย, ไอซ์แลนด์, ไอร์แลนด์, การแปลภาษา.
- Identification of the chitin-binding pro
- มีข้อเท็จจริงและตัวเลขใน. จำนวนการทดสอบใ
- From an outsider’s perspective, America’
- ลืมมันซะ
- If people hurts you. Let anime make you
- ผมรักคุณ
- ตลาดนัด ขายสินค้า ราคารายวันมาให้ทำเลขาย
- ความนุ่มของเนื้อเค้กผสมกับความขมของช็อคโ
- ตลาดนัด ขายสินค้า ราคารายวันมาให้
- jesslyn,i'd like to introduce mr. michae
- Dear Kantita Nawagarn , Your booking has
- สถานี
- i have great pleasure to present to you
- น้ำพริกหนุ่ม
- Cheese is a dairy product made from cow
- Darling just a moment let me go and show
- Another important aspect of cost control
- ขอโทษ
- แผนภาพนี้ต้องการสื่อว่า
- ต่อจากบทที่1
- How do you choose what for your girlfrie
- Oh really. you are so good.
- ผลลัพธ์ (ภาษาอังกฤษ) 3:You talk to young
- I believe that my education background,
