P. aeruginosa isolates were obtaine

P. aeruginosa isolates were obtained from the Sterile Site Culture Collection (SSCC) of the Microbial Contamination Unit of PathWest Laboratory Medicine WA, Nedlands. Two P. fluorescens isolates and one P. putida isolate were also obtained from the SSCC. The reference strains P. fluorescens NCTC 4755 and P. putida NCTC 10936 were obtained from the culture collection of the Microbiology and Immunology Discipline of The University of Western Australia. The remaining eight P. fluorescens isolates and 13 P. putida isolates were soil-derived isolates identified in our laboratory. Six soil samples originating from a tea tree plantation and two soil samples from local garden beds were used to isolate species of Pseudomonas. One gram of soil was mixed with 5 mL of saline, and following vigorous vortexing, samples were left at room temperature for 1 h. After further vortexing, samples were serially diluted and spread plated onto pre-dried Pseudomonas agar base plates supplemented with cetrimide, fucidin and cephalosporin (Oxoid, Basingstoke, UK). Isolates were identified to genus level via a series of biochemical tests and were identified to species level using API20NE strips (bioMérieux, Marcy l'Étoile, France).
TTO (batch W/E504) was kindly provided by Australian Plantations Pty Ltd, Wyrallah, New South Wales, Australia. The levels of the components determined by gas chromatography mass spectrometry analysis and the range specified by the international standard7 (shown in brackets) were as follows: 40.3% (>30%) terpinen-4-ol, 19.7% (10–28%) γ-terpinene, 8.6% (5–13%) α-terpinene, 3.2% (trace–15%) 1,8-cineole, 3.2% (1.5–5%) terpinolene, 3.1% (1.5–8%) α-terpineol, 2.4% (1–6%) α-pinene, 2.4% (0.2–12%) ρ-cymene, 1.6% (trace–7%) aromadendrene, 1.2% (trace–8%) δ-cadinene, 1.0% (0.5–4%) limonene, 0.5% (trace–3%) globulol, 0.4% (trace–1.5%) viridiflorol and 0.1% (trace–3.5%) sabinene. Terpinen-4-ol (purity 100%) was provided by SNP Natural Products (Sydney, NSW, Australia). Cineole (purity 99%) and α-terpineol (purity 95%) were purchased from Sigma Chemical Company (St Louis, MO, USA). γ-Terpinene (purity 97%) and ρ-cymene (purity 99%) were purchased from Aldrich Chemical Company (Milwaukee, WI, USA). Terpinen-4-ol and α-terpineol were selected on the basis of their known antimicrobial activity2 and the fact that they comprise ∼40% of TTO. Cineole was selected since it has some antimicrobial activity and its concentration in TTO has been manipulated partly in response to the misconception that it is a skin irritant.1,2 γ-Terpinene and ρ-cymene were selected since they constitute up to 30% of TTO.
The susceptibility of Pseudomonas isolates to TTO, terpinen-4-ol, γ-terpinene, cineole, α-terpineol and ρ-cymene was determined using a broth microdilution method based on CLSI guidelines.8 Mueller–Hinton broth (MHB; Oxoid) was supplemented with 0.002% (v/v) Tween 80 (Sigma) (MHB-T) to enhance dispersion of the TTO or components. A stock of TTO or component at twice the desired final concentration was prepared in MHB-T and mixed vigorously by vortex. This was used to prepare serial doubling dilutions in a 96-well tray over the range 0.03–8% (v/v). Overnight broth cultures of organisms in MHB were adjusted in MHB-T so that the final concentration in each well following inoculation of the microtitre tray was ∼5.0 × 105 cfu/mL. Inocula concentrations were confirmed by viable counts; after serial 10-fold dilution of the inoculum in sterile distilled water, four 10 μL samples from the appropriate dilution were inoculated onto well-dried blood agar plates. After incubation at 37°C for 18–24 h the number of cfu was counted and the concentration of the inocula calculated. After 18 h of incubation of trays at 37°C, the MIC was the lowest concentration of TTO that resulted in a clear well. Ten microlitres from each well was spot-inoculated onto pre-dried nutrient agar (NA) and incubated overnight at 35°C to determine the MBC. The MBC was defined as the concentration of TTO or component that killed 99.9% of the inoculum. Experiments were performed at least three times and the modal value selected.
The antibiotic susceptibility profiles of the isolates were determined using an agar dilution method with approved breakpoints for determining susceptibility and resistance.8 The antibiotics tested were cefepime, ceftazidime, ciprofloxacin, gentamicin, meropenem, ticarcillin/clavulanate and tobramycin.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

แยก P. aeruginosa ได้รับจากการใส่เว็บไซต์วัฒนธรรมชุด (SSCC) ของจุลินทรีย์ปนเปื้อนหน่วยของ PathWest ห้องปฏิบัติการยา WA, Nedlands สอง P. fluorescens แยกและแยก P. putida หนึ่งได้รับจาก SSCC สายพันธุ์อ้างอิง NCTC 4755 และ P. P. fluorescens putida NCTC 10936 ได้รับมาจากการรวบรวมวัฒนธรรมของจุลชีววิทยาและสาขาวิชาภูมิคุ้มกันวิทยาของมหาวิทยาลัยเวสเทิร์นออสเตรเลีย เหลือ 8 P. fluorescens แยก และแยก putida P. 13 ได้มาดินแยกระบุในห้องปฏิบัติการของเรา หกดินตัวอย่างที่มาจากไร่เป็นต้นชาและสองดินตัวอย่างจากเตียงภายในสวนนั้นก็จะแยกพันธุ์ Pseudomonas หนึ่งกรัมของดินที่ผสม ด้วย 5 mL ของ saline และต่อไปนี้ vortexing คึกคัก ตัวอย่างสถานการณ์สมมติที่อุณหภูมิห้องใน 1 ชั่วโมง หลังจากเพิ่มเติม vortexing ตัวอย่างยกเว้น serially และแพร่กระจายชุบไปแห้งก่อนลี agar ฐานแผ่นเสริม cetrimide, fucidin และ cephalosporin (Oxoid, Basingstoke, UK) แยกระบุระดับสกุลผ่านชุดของการทดสอบชีวเคมี และระบุระดับสายพันธุ์ใช้ API20NE แถบ (bioMérieux, Marcy l'Étoile ฝรั่งเศส)
TTO (ชุด W/E504) ได้กรุณารับจากออสเตรเลียปลูก Pty Ltd, Wyrallah นิวเซาธ์เวลส์ ออสเตรเลีย ระดับของคอมโพเนนต์ถูกกำหนด โดยการวิเคราะห์สเปกโตรเมท chromatography ก๊าซและช่วงที่ระบุ โดย standard7 ต่างประเทศ (แสดงในวงเล็บ) มีดังนี้: 40.3% (> 30%) terpinen-4-ol, 19.7% (10-28%) Γ-terpinene, 8.6% (5-13%) Α-terpinene, 3.2% (ติดตาม – 15%) 18-cineole, 3.2% (1.5 – 5%) terpinolene, 3.1% (1.5 – 8%) Α-terpineol, 2.4% (1-6%) Α-pinene, 2.4% (0.2 – 12%) Ρ-cymene, aromadendrene 1.6% (ติดตาม – 7%) 1.2% (ติดตาม – 8%) Δ-cadinene, 1.0% (0.5-4%) limonene, globulol 0.5% (ติดตาม – 3%) viridiflorol 0.4% (trace–1.5%) และ 0.1% (trace–3.5%) sabinene Terpinen-4-ol (ความบริสุทธิ์ 100%) ได้รับจากผลิตภัณฑ์ธรรมชาติ SNP (ซิดนีย์ นิวเซาธ์เวลส์ ออสเตรเลีย) Cineole (ความบริสุทธิ์ 99%) และα-terpineol (ความบริสุทธิ์ 95%) ซื้อจาก บริษัทเคมีซิก (St Louis, MO สหรัฐอเมริกา) γ-Terpinene (บริสุทธิ์ 97%) และρ-cymene (ความบริสุทธิ์ 99%) ซื้อจาก บริษัทเคมี Aldrich (มิลวอกี WI สหรัฐอเมริกา) Terpinen 4 ol และα-terpineol ถูกเลือก โดย activity2 จุลินทรีย์รู้จักของพวกเขาและความจริงที่ว่า พวกเขามี ∼40% ของ TTO Cineole ถูกเลือกเนื่องจากมีกิจกรรมจุลินทรีย์บางอย่าง และมีการจัดการที่ความเข้มข้นใน TTO บางส่วนในการเข้าใจผิดว่า เป็นผิว irritant.1,2 γ-Terpinene และρ cymene ถูกเลือกเนื่องจากพวกเขาประกอบถึง 30% ของ TTO
ลีไก่แยกไป TTO, terpinen 4 ol γ-terpinene, cineole Α terpineol และρ cymene ถูกกำหนดโดยใช้วิธี microdilution ซุปตาม CLSI guidelines.8 Mueller – Hinton ซุป (MHB Oxoid) ถูกเสริม ด้วย 0.002% (v/v) Tween 80 (ซิกมา) (MHB-T) เพื่อเพิ่มประสิทธิภาพการกระจายตัวของ TTO หรือคอมโพเนนต์ หุ้นของ TTO หรือคอมโพเนนต์ที่สองที่ต้องสุดท้ายเข้มข้นเตรียมใน MHB T และผสมโยคะ โดย vortex นี้ถูกใช้เพื่อจัดเตรียม dilutions จะประจำในถาด 96 ดีช่วง 0.03-8% (v/v) วัฒนธรรมซุปค้างคืนของสิ่งมีชีวิตใน MHB ถูกปรับปรุงใน MHB T เพื่อให้ ∼5.0 × 105 cfu/mL ความเข้มข้นสุดท้ายในแต่ละดีต่อ inoculation ถาด microtitre ความเข้มข้นของ inocula ถูกยืนยัน โดยตรวจนับได้ หลังจากประจำ 10-fold เจือจางของ inoculum ในน้ำกลั่นฆ่าเชื้อ μL 10 4 ตัวอย่างจากการเจือจางที่เหมาะสมมี inoculated บนแผ่นแห้งดีเลือด agar หลังจากบ่มที่ 37° C สำหรับ h 18-24 มีนับจำนวน cfu และความเข้มข้นของ inocula ที่คำนวณ หลังจาก h 18 ของการฟักตัวของถาดที่ 37° C MIC มีความเข้มข้นต่ำสุดของ TTO ที่ทำให้เกิดความชัดเจน Microlitres 10 จากบ่อแต่ละได้รับ inoculated ลงธาตุอาหารแห้งก่อน agar (NA) และ incubated ค้างคืนที่ 35 ° C ถึงกำหนดช่อง MBC ช่อง MBC ถูกกำหนดเป็นความเข้มข้นของ TTO หรือคอมโพเนนต์ที่ 99.9% ของ inoculum ที่ฆ่า ทดลองได้ดำเนินการอย่างน้อย 3 ครั้ง และเลือกค่าโมดอล
โพรไฟล์ภูมิไวรับยาปฏิชีวนะการแยกถูกกำหนดโดยใช้วิธีเจือจาง agar กับจุดเปลี่ยนได้รับการอนุมัติสำหรับการกำหนดภูมิไวรับ และ resistance.8 ทดสอบยาปฏิชีวนะถูกเซฟีพิม เซฟตาซิดิม ciprofloxacin, gentamicin, meropenem, ticarcillin/clavulanate และ tobramycin

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

P. aeruginosa แยกที่ได้รับจากเว็บไซต์หมันวัฒนธรรมสะสม (SSCC) ของจุลินทรีย์ปนเปื้อนหน่วย PathWest ห้องปฏิบัติการแพทย์ WA, แลนด์ สอง P. fluorescens สายพันธุ์และเป็นหนึ่ง P. putida แยกยังได้รับจาก SSCC สายพันธุ์อ้างอิง P. fluorescens NCTC 4755 และพี putida NCTC 10936 ที่ได้รับจากการเก็บรวบรวมวัฒนธรรมของจุลชีววิทยาและวิทยาภูมิคุ้มกันวินัยของมหาวิทยาลัยของออสเตรเลียตะวันตก ที่เหลืออีกแปด P. fluorescens สายพันธุ์และ 13 P. putida แยกถูกแยกดินที่ได้จากที่ระบุไว้ในห้องปฏิบัติการของเรา หกตัวอย่างดินที่มาจากการเพาะปลูกต้นชาและสองตัวอย่างดินจากเตียงสวนท้องถิ่นถูกนำมาใช้เพื่อแยกสายพันธุ์ของเชื้อ Pseudomonas หนึ่งกรัมของดินผสมกับ 5 มิลลิลิตรน้ำเกลือและต่อไปนี้ vortexing แข็งแรงตัวอย่างที่ถูกทิ้งไว้ที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 1 ชั่วโมง หลังจาก vortexing เพิ่มเติมตัวอย่างถูกเจือจางลำดับและการแพร่กระจายชุบลงก่อนแห้ง Pseudomonas แผ่นฐานวุ้นเสริมด้วย Cetrimide fucidin และ cephalosporin (Oxoid, เบซิง, สหราชอาณาจักร) ไอโซเลตถูกระบุให้อยู่ในระดับสกุลผ่านชุดของการทดสอบทางชีวเคมีและมีการระบุสายพันธุ์ระดับโดยใช้แถบ API20NE (biom? Rieux ร์ซี่ L'Etoile, ฝรั่งเศส)
TTO (batch W / E504) ได้ให้ความกรุณาโดยออสเตรเลียสวน Pty Ltd, Wyrallah, นิวเซาธ์เวลส์ออสเตรเลีย ระดับของส่วนประกอบที่กำหนดโดยแก๊สโครมาวิเคราะห์มวลสารและช่วงที่ระบุโดย standard7 ระหว่างประเทศ (แสดงในวงเล็บ) มีดังนี้: 40.3% (> 30%) terpinen-4-เบียร์, 19.7% (10-28%) γ-terpinene 8.6% (5-13%) α-terpinene 3.2% (ร่องรอย-15%) 1,8-cineole 3.2% (1.5-5%) terpinolene, 3.1% (1.5-8%) α- Terpineol 2.4% (1-6%) α-pinene 2.4% (0.2-12%) ρ-cymene 1.6% (ติดตาม-7%) aromadendrene 1.2% (ติดตาม-8%) δ-cadinene, 1.0% (0.5-4%) limonene 0.5% (ติดตาม-3%) globulol 0.4% (ติดตาม-1.5%) viridiflorol และ 0.1% (ติดตาม-3.5%) sabinene terpinen-4-OL (ความบริสุทธิ์ 100%) ได้รับจากผลิตภัณฑ์ธรรมชาติ SNP (ซิดนีย์, ออสเตรเลีย) cineole (ความบริสุทธิ์ 99%) และα-Terpineol (ความบริสุทธิ์ 95%) ที่ซื้อมาจากสารเคมีของ บริษัท ซิกม่า (เซนต์ Louis, MO, USA) γ-terpinene (ความบริสุทธิ์ 97%) และρ-cymene (ความบริสุทธิ์ 99%) ที่ซื้อมาจาก บริษัท เคมีดิช (Milwaukee, WI, USA) terpinen-4-OL และα-Terpineol ได้รับการคัดเลือกบนพื้นฐานของ activity2 ต้านจุลชีพของพวกเขาเป็นที่รู้จักกันและความจริงที่ว่าพวกเขาประกอบด้วย ~40% จาก TTO cineole ได้รับเลือกเพราะมันมีบางฤทธิ์ต้านจุลชีพและความเข้มข้นใน TTO ได้รับการจัดการส่วนหนึ่งในการตอบสนองต่อความเข้าใจผิดว่ามันเป็น irritant.1,2 ผิวγ-terpinene และρ-cymene ได้รับการคัดเลือกตั้งแต่พวกเขาเป็นได้ถึง 30% ของ TTO
ความไวของเชื้อ Pseudomonas แยกไป TTO, terpinen-4-เบียร์, γ-terpinene, cineole, α-Terpineol และρ-cymene ถูกกำหนดโดยใช้วิธีการน้ำซุป microdilution ตาม CLSI guidelines.8 มูลเลอร์-ฮินตันน้ำซุป (MHB; Oxoid ) ได้รับการเสริมด้วย 0.002% (v / v) ทวีน 80 (Sigma) (MHB-T) เพื่อเพิ่มการกระจายตัวของ TTO หรือส่วนประกอบ หุ้นของ TTO หรือส่วนประกอบที่สองความเข้มข้นสุดท้ายที่ต้องการได้รับการจัดทำขึ้น MHB-T และแรงโดยผสมน้ำวน นี้ถูกใช้ในการเตรียมการเจือจางเพิ่มขึ้นต่อเนื่องในถาด 96 ดีกว่าช่วง 0.03-8% (v / v) วัฒนธรรมน้ำซุปในชั่วข้ามคืนของสิ่งมีชีวิตใน MHB มีการปรับใน MHB-T เพื่อให้ความเข้มข้นสุดท้ายในแต่ละการฉีดวัคซีนอย่างดีต่อไปนี้ของถาด microtitre เป็น ~5.0 × 105 cfu / ml ความเข้มข้นของเชื้อตั้งต้นได้รับการยืนยันโดยการนับทำงานได้; หลังจากอนุกรมการเจือจาง 10 เท่าของเชื้อในน้ำกลั่นปลอดเชื้อสี่ 10 ตัวอย่างไมโครลิตรจากการลดสัดส่วนที่เหมาะสมถูกเชื้อเข้าสู่ที่แห้งแผ่นวุ้นเลือด หลังจากการบ่มที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 18-24 ชั่วโมงจำนวนโคโลนีที่นับและความเข้มข้นของเชื้อตั้งต้นคำนวณ หลังจาก 18 ชั่วโมงของการบ่มของถาดที่ 37 ° C, MIC เป็นความเข้มข้นต่ำสุดของ TTO ที่ส่งผลให้ชัดเจนดี สิบ microlitres จากกันได้ดีเป็นจุดเชื้อไปก่อนแห้งวุ้นสารอาหาร (NA) และบ่มค้างคืนที่ 35 ° C ถึงกำหนด MBC MBC ที่ได้รับการกำหนดให้เป็นความเข้มข้นของ TTO หรือส่วนประกอบที่ฆ่า 99.9% ของเชื้อ การทดลองได้ดำเนินการอย่างน้อยสามครั้งและมูลค่ากริยาเลือก
โปรไฟล์ความไวต่อยาปฏิชีวนะของเชื้อได้รับการพิจารณาโดยใช้วิธีการลดสัดส่วนวุ้นที่มีจุดพักได้รับการอนุมัติสำหรับการกำหนดและความไวต่อยาปฏิชีวนะ resistance.8 ทดสอบเป็น CEFEPIME, ซิดีม, ciprofloxacin, gentamicin, โร , ticarcillin / clavulanate และ tobramycin

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

P . aeruginosa ที่แยกได้จากเว็บไซต์งานวัฒนธรรมของสะสม ( SSCC ) ของการปนเปื้อนเชื้อจุลินทรีย์หน่วยปฏิบัติการการแพทย์ pathwest wa , nedlands . 2 P . fluorescens สายพันธุ์หนึ่ง P.putida และแยกยังได้รับจาก SSCC . P . fluorescens สายพันธุ์อ้างอิง nctc 4755 .nctc enrichment 10936 ได้มาจากวัฒนธรรมคอลเลกชันของจุลชีววิทยาและวิทยาภูมิคุ้มกัน วินัยของมหาวิทยาลัยของออสเตรเลียตะวันตก เหลืออีก 8 P . fluorescens สายพันธุ์ 13 P.putida และไอโซเลทดินได้มาจากการระบุในปฏิบัติการของเรา6 ตัวอย่างดินที่มาจากชาต้นไม้และสวนสองตัวอย่างดินจากเตียงสวนท้องถิ่นใช้ในการแยกชนิดของ . หนึ่งกรัมของดินผสมกับเกลือ 5 มิลลิลิตร และต่อไปนี้แข็งแรง vortexing ตัวอย่าง ถูกทิ้งไว้ที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 1 ชั่วโมง หลังจาก vortexing เพิ่มเติมจำนวนอนุกรมเจือจาง และกระจายไปยังส่วนของวุ้นก่อนชุบแห้งแผ่นฐานเสริมด้วยซิตริไมด์ ( oxoid ฟิวซิดิน , และ , เซฟา Basingstoke , สหราชอาณาจักร ) ไอโซเลทที่ระบุสกุลระดับผ่านชุดของการทดสอบทางชีวเคมี และระบุระดับชนิด การใช้แผ่น api20ne ( biom é rieux มาร์ซี่ฉัน ' É toile , ฝรั่งเศส )
TTO ( ชุด W / e504 ) ได้กรุณาให้ wyrallah ออสเตรเลีย Pty Ltd , สวนยางพารา , นิวเซาท์เวลส์ , ออสเตรเลีย ระดับขององค์ประกอบที่กำหนดโดยวิธีแก๊สโครมาโตกราฟีแมสการวิเคราะห์และช่วงที่ระบุโดย standard7 นานาชาติ ( ที่แสดงในวงเล็บ ) ดังนี้ : 40.3 เปอร์เซ็นต์ ( 30% ) terpinen-4-ol ร้อยละ , ( 10 ( 28% ) γ - terpinene มี 8.6 % ( 5 – 13 % ) แอลฟา terpinene มี 3.2 เปอร์เซ็นต์ ( ติดตาม– 15 % ) 18-cineole ร้อยละ 3.2 ( 1.5 - 5 % ) เทอร์พิโนลีน , 3.1% ( 1.5 – 8 % ) แอลฟาออล 2.4 % ( 1 ) 6 % ) แอลฟาโด ( 0.2 2.4 % และ 12 % ) ρ - ไคมีน 1.6 % ( ร่องรอย ( 7% ) aromadendrene 1.2 % ( ร่องรอย– 8 % ) δ - คาดินีน 1.0 % ( 0.5 – 4% ) ไลโมนีน 0.5 % ( ร่องรอย ( 3% ) globulol 0.4 % ( ร่องรอย– 1.5% ) viridiflorol และ 0.1% ( ร่องรอย ( 3.5% ) ซาบินีน . terpinen-4-ol ( ความบริสุทธิ์ 100 % ) โดย SNP ผลิตภัณฑ์ธรรมชาติ ( ซิดนีย์ , NSW , ออสเตรเลีย )cineole ( ความบริสุทธิ์ 99% ) และแอลฟาออล ( ความบริสุทธิ์ 95% ) ซื้อจาก บริษัท ซิกม่า เคมี ( เซนต์หลุยส์ โม สหรัฐอเมริกา ) γ - terpinene มีความบริสุทธิ์ 97 % ) และρ - ไคมีน ( ความบริสุทธิ์ 99% ) ซื้อจาก บริษัท เคมีดิช ( Milwaukee , WI , USA ) terpinen-4-ol แอลฟาออล และถูกเลือกบนพื้นฐานของตนรู้จักยาต้านจุลชีพ activity2 และความจริงที่ว่าพวกเขาประกอบด้วย∼ 40% ของ TTO .cineole ได้รับเลือกเพราะมันมีกิจกรรมการยับยั้งและความเข้มข้นของ TTO ได้รับการจัดการในการตอบสนองบางส่วนเข้าใจผิดว่ามันเป็นผิวระคายเคือง . 1 , 2 γ - และ - terpinene มีρไคมีนถูกเลือกเพราะพวกเขาเป็นถึง 30% ของ TTO . ความไวของเชื้อ Pseudomonas
เพื่อ TTO , terpinen-4-ol γ - terpinene มี cineole , , ,แอลฟา - ออล และρไคมีนตั้งใจใช้ซุป microdilution วิธีตามแนวทางต่าง 8 8 – ฮินตัน น้ำซุป ( mhb ; oxoid ) เสริมด้วย 0.002 เปอร์เซ็นต์ ( v / v ) Tween 80 ( ซิกม่า ) ( mhb-t ) เพื่อเพิ่มการกระจายของ tto หรือส่วนประกอบ หุ้นของ TTO หรือส่วนประกอบในสองครั้งสุดท้ายที่ต้องการของที่เตรียมไว้ใน mhb-t ผสมอย่างแข็งขัน โดย . .นี้ถูกใช้เพื่อเตรียมอนุกรมเป็นเจือจางใน 96 ดีถาดมากกว่าช่วง 0.03 – 8 เปอร์เซ็นต์ ( v / v ) วัฒนธรรมของสิ่งมีชีวิตในน้ำข้ามคืน mhb ปรับข้อมูลใน mhb-t ดังนั้นที่ความเข้มข้นสุดท้ายในแต่ละดีต่อไปนี้ใส่ถาด microtitre คือ∼ 5.0 × 105 CFU / มล. inocula เท่ากับยืนยันได้นับ ;หลังจากการพับ 10 อนุกรมของเชื้อในการฆ่าเชื้อน้ำสี่ 10 μ l ตัวอย่างจากการปลูกเชื้อลงบนที่แห้งดีเลือดวุ้นแผ่น หลังจากบ่มที่ 37 ° C 18 – 24 H จำนวนโคโลนีถูกนับและความเข้มข้นของ inocula คํานวณ หลังจาก 18 H 1 ถาด ที่ 37 ° Cไมค์ คือ ความเข้มข้นต่ำสุดของ TTO ที่ส่งผลให้ชัดเจนด้วย 10 microlitres จากแต่ละจุดบนดีเชื้อก่อน NUMB3RS แห้ง ( นา ) และบ่มค้างคืนที่ 35 ° C หา MBC MBC ถูกกำหนดเป็นความเข้มข้นของ TTO หรือคอมโพเนนต์ที่ฆ่า 99.9% ของเชื้อ . ทดลองอย่างน้อย 3 ครั้ง และการเลือกค่า .
โปรไฟล์ของยาปฏิชีวนะกลุ่มไอโซเลทด้วยวิธีกำหนดใช้ขึ้นแป้นอนุมัติจุดเพื่อกำหนดความไวและความต้านทาน 8 ยาปฏิชีวนะทดสอบได้จดทะเบียนยาซิโปรฟลอกซาซิน , ยา , ยา , , , และไทคาร์ซิลลิน / Clavulanate ที่ทำการ .