3.4 Flow CytometryFCM analysis of b

3.4 Flow Cytometry
FCM analysis of bacteria stained with this kit typically allows differentiation of cell sub-populations into a
profile of intact/viable or permeabilized/damaged (Berney et al., 2007). Therefore, changes in bacterial
membrane permeability of food-borne microorganisms treated with herb and spice extracts displaying
antimicrobial properties were evaluated at the range of concentrations (1.25-40 mg ml-1) using PI/Syto 9 staining
coupled to FCM analysis. Sample representative results of FCM analysis are presented with percentage of
sub-populations marked within each region (Figure 2). The fluorescence profiles obtained were based on
reference to two control populations, one of untreated cells indicative of intact/live cells and the other of
heat-treated cells indicative of permeabilized/damaged cells. For each of the strains studied, untreated control
cells were stained as Syto 9 positive and mainly located in lower and upper right quadrants (Figure 2a), and
viability was confirmed by both absorbance measurement at 600 nm and plate count on TSA plates. For control
cells inactivated by heating, populations were stained as PI positive and were located in the upper left quadrant,
these cells were unable to recover and grow on TSA plates (Figure 2b). As an illustration, Figure 2 (c-h) shows
the evolution of the various physiological states of E. coli cells, following treatment with an ethanolic extract of
sage. Cells treated with the lowest extract concentration of 1.25 mg ml-1 did not appear affected, as the levels of
intact/live cells did not differ significantly from that of untreated live controls (Figure 2c). When concentration
of herb extract was increased to 2.5 mg ml-1 an increased percentage of cells was evident in the upper right
quadrant (Figure 2d). Cells in this quadrant stained both Syto 9 and PI positive. The presence of this
double-stained population may indicate cells with damaged membranes allowing penetration of PI into the cell
interior.Following treatment with 5 mg ml-1 a clear shift from green fluorescence towards red fluorescence was
observed with ~28% of cells located in the upper left quadrant indicating damage of cells induced by the extract
(Figure 2e). Treatment with the extract at the MIC level (10 mg ml-1) drastically changed the previous profile
with the appearance of a high level of permeabilized/damaged cells located in the upper left quadrant (~94%)
with only ~3% of viable cells located in upper right quadrant (Figure 2f). Further increasing the extract
concentration to 20 mg ml-1 (MBC) or 40 mg ml-1 led to a more defined population of permeabilized cells with
cytograph dot plot patterns corresponding to that of heat treated control cells (Figure 2g-h). In agreement with
plate count data, at these two levels of added extracts, cells were unable to recover viability on agar media.
Although, MIC and MBC levels of the active extracts were different for various strains of food-borne bacteria
used in this study, FCM results clearly indicated that activity of these extracts was dose dependent, and agreed
with trends noted for microdilution and kill time assays. The cytometric data shown for sage extract is
representative of the anti-microbial effects noted for other extracts using this technique.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

3.4 ตรวจวิเคราะห์เซลล์ไหลวิเคราะห์ FCM ของแบคทีเรียที่ย้อม ด้วยชุดนี้มักจะให้ความแตกต่างของเซลล์ประชากรย่อยโปรไฟล์ของได้เหมือนเดิมหรือ permeabilized/เสีย หาย (Berney et al. 2007) ดังนั้น การเปลี่ยนแปลงในแบคทีเรียซึมผ่านเมมเบรนของพัดพาอาหารจุลินทรีย์รักษา ด้วยสารสกัดจากสมุนไพรและเครื่องเทศแสดงคุณสมบัติต้านจุลชีพถูกประเมินในช่วงของความเข้มข้น (มิลลิกรัม 1.25-40 มล.-1) ที่ใช้ย้อม PI/Syto 9ควบคู่การวิเคราะห์ FCM ตัวอย่างผลลัพธ์ตัวแทนของ FCM วิเคราะห์จะแสดงเปอร์เซ็นต์ของประชากรย่อยทำเครื่องหมายในแต่ละภูมิภาค (รูป 2) ตามโพรไฟล์การเรืองแสงได้อ้างอิงการควบคุมสองประชากร บำบัดเซลล์ส่อเซลล์เหมือนเดิมหรือถ่ายทอดสดและอื่น ๆ อย่างใดอย่างหนึ่งส่อ permeabilized/เสีย เซลล์ฆ่าเซลล์ สำหรับแต่ละสายพันธุ์ที่ศึกษา ได้รับการรักษาควบคุมภาพเซลล์เป็นบวก Syto 9 และส่วนใหญ่อยู่ล่าง และบนขวา quadrants (รูป 2a), และชีวิตได้รับการยืนยัน โดยการวัดค่าทั้งที่จำนวน 600 nm และแผ่นบนแผ่น TSA สำหรับการควบคุมเซลล์ยก โดยเครื่องทำความร้อน ประชากรภาพเป็นบวก PI และอยู่ใน quadrant ซ้ายบนเซลล์เหล่านี้ก็ไม่สามารถกู้คืน และเติบโตบนแผ่น TSA (รูปที่ 2b) แสดงเป็นภาพประกอบ รูป 2 (c-h)วิวัฒนาการของรัฐต่าง ๆ ทางสรีรวิทยาของเซลล์ E. coli หลังรักษา ด้วย ethanolic สารสกัดจากปราชญ์ ไม่ปรากฏผลกระทบ เป็นระดับของเซลล์ถือว่าเข้มข้นสารสกัดจากต่ำสุด 1.25 มิลลิกรัมมล. 1เซลล์เหมือนเดิมหรือถ่ายทอดสดไม่แตกต่างอย่างมากจากของสดไม่ผ่านการควบคุม (รูปที่ 2 c) เมื่อความเข้มข้นเพิ่มสารสกัดสมุนไพร 2.5 มิลลิกรัมมล.-1 เปอร์เซ็นต์เพิ่มขึ้นของเซลล์ได้ชัดเจนมุมบนขวาquadrant (รูปที่ 2d) เซลล์ใน quadrant นี้ย้อม Syto 9 และ PI บวก การปรากฏตัวของประชากรสองย้อมอาจบ่งชี้ว่า เซลล์ มีเยื่อที่เสียหายให้เจาะของ PI ลงในเซลล์ตกแต่งภายใน ต่อการรักษา ด้วย 5 มิลลิกรัมมล.-1 การเปลี่ยนแปลงที่ชัดเจนจากเรืองแสงสีเขียวต่อเรืองแสงสีแดงได้สังเกต ด้วย ~ 28% ของเซลล์ที่อยู่ใน quadrant ซ้ายบนแสดงความเสียหายของเซลล์ที่เกิดจากสารสกัด(รูปที่ 2e) รักษา ด้วยสารสกัดระดับ MIC (มก. 10 ml-1) โพรไฟล์ก่อนหน้าการเปลี่ยนแปลงอย่างรวดเร็วมีลักษณะของเซลล์ permeabilized/เสีย หายอยู่ใน quadrant บนซ้าย (~ 94%) ระดับสูงมีเพียง ~ 3% ของเซลล์ที่ทำงานอยู่ใน quadrant ขวาบน (รูปที่ 2f) เพิ่มเติม เพิ่มสารสกัดความเข้มข้น 20 มิลลิกรัมมล.-1 (MBC) หรือ 40 มก. 1 ml นำไป permeabilized เซลล์ด้วยประชากรกำหนดเพิ่มเติมรูปแบบพล็อตจุด cytograph ที่สอดคล้องกับที่ความร้อนถือว่าควบคุมเซลล์ (รูปที่ 2g-h) ในข้อตกลงกับจานจำนวนข้อมูล ความเพิ่มสารสกัด 2 ระดับเซลล์ก็ไม่สามารถกู้คืนชีวิตบนวุ้นสื่อถึงแม้ว่า ระดับ MIC และ MBC ของสารสกัด active ได้แตกต่างกันสำหรับสายพันธุ์ต่าง ๆ ของเชื้อแบคทีเรียที่ติดต่อจากอาหารใช้ในการศึกษานี้ FCM ผลลัพธ์ชัดเจนว่า กิจกรรมของสารสกัดเหล่านี้เป็นยาขึ้น และตกลงกับแนวโน้มข้อสังเกตสำหรับ microdilution และฆ่า assays ครั้ง ข้อมูล cytometric ที่แสดงเป็นสารสกัดจาก sageตัวแทนของผลต่อต้านจุลินทรีย์ที่ระบุไว้สำหรับสารสกัดอื่น ๆ ที่ใช้เทคนิคนี้

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

3.4 cytometry ไหล
วิเคราะห์ FCM ของแบคทีเรียย้อมด้วยสีชุดนี้มักจะช่วยให้การเปลี่ยนแปลงของเซลล์ประชากรย่อยเป็น
รายละเอียดของเหมือนเดิม / ที่ทำงานได้หรือ permeabilized ความเสียหาย / (Berney et al., 2007) ดังนั้นการเปลี่ยนแปลงในเชื้อแบคทีเรีย
ซึมผ่านเยื่อหุ้มเซลล์ของจุลินทรีย์ที่เกิดจากอาหารการรักษาด้วยสมุนไพรและสารสกัดจากเครื่องเทศแสดง
คุณสมบัติต้านจุลชีพได้รับการประเมินในช่วงของความเข้มข้น (1.25-40 มิลลิกรัม ML-1) โดยใช้ PI / Syto 9 ย้อมสี
ควบคู่การวิเคราะห์ FCM ผลการค้นหาตัวแทนตัวอย่างของการวิเคราะห์ FCM นั้นจะมีอัตราร้อยละของ
ประชากรย่อยทำเครื่องหมายในแต่ละภูมิภาค (รูปที่ 2) โปรไฟล์เรืองแสงได้อยู่บนพื้นฐานของ
การอ้างอิงไปยังประชากรสองกลุ่มควบคุมซึ่งเป็นหนึ่งในเซลล์ได้รับการรักษาตัวบ่งชี้ของเซลล์เหมือนเดิม / ที่อยู่อาศัยและอื่น ๆ ของ
เซลล์ได้รับความร้อนที่บ่งบอกถึง permeabilized เซลล์เสียหาย / สำหรับแต่ละสายพันธุ์การศึกษา, การควบคุมการรับการรักษา
เซลล์มีการย้อมเป็น Syto 9 บวกและส่วนใหญ่ตั้งอยู่ในแนวทางที่ถูกต้องบนและล่าง (รูปที่ 2A) และ
มีชีวิตได้รับการยืนยันจากทั้งการวัดการดูดกลืนแสงที่ 600 นาโนเมตรและแผ่นนับบนจาน TSA สำหรับการควบคุม
เซลล์ใช้งานด้วยความร้อนประชากรมีการย้อมเป็น PI บวกและตั้งอยู่ในด้านบนซ้าย
เซลล์เหล่านี้ไม่สามารถที่จะฟื้นตัวและเติบโตบนจาน TSA (รูปที่ 2B) เป็นภาพรูปที่ 2 (CH) แสดงให้เห็นถึง
วิวัฒนาการของรัฐทางสรีรวิทยาต่างๆของเซลล์ E. coli ต่อไปนี้การรักษาด้วยสารสกัดเอทานอลของ
ปัญญาชน เซลล์ได้รับการรักษาที่มีความเข้มข้นต่ำสุดของสารสกัดจาก 1.25 มิลลิกรัม ML-1 ไม่ปรากฏว่าได้รับผลกระทบกับระดับของ
เหมือนเดิม / สดเซลล์ไม่แตกต่างกันอย่างมีนัยสำคัญจากที่ได้รับการรักษาควบคุมสด (รูป 2C) เมื่อความเข้มข้น
ของสารสกัดจากสมุนไพรเพิ่มขึ้นเป็น 2.5 มิลลิกรัม ML-1 ร้อยละที่เพิ่มขึ้นของเซลล์ได้ชัดในมุมขวาบน
Quadrant (รูปที่ 2d) เซลล์ใน Quadrant นี้ย้อมสีทั้ง Syto 9 และ PI บวก การปรากฏตัวของ
ประชากรคู่เปื้อนอาจบ่งบอกถึงเซลล์ที่มีเยื่อเสียหายที่ช่วยให้การรุกของ PI เข้าไปในเซลล์
interior.Following การรักษาด้วย 5 มิลลิกรัม ML-1 การเปลี่ยนแปลงที่ชัดเจนจากการเรืองแสงสีเขียวเรืองแสงสีแดงที่มีต่อการถูก
ตั้งข้อสังเกตกับ ~ 28% ของเซลล์ที่อยู่ใน ด้านซ้ายบนแสดงให้เห็นความเสียหายของเซลล์ที่เกิดจากสารสกัด
(รูป 2E) การรักษาด้วยสารสกัดที่ระดับไมค์ (10 มิลลิกรัม ML-1) การเปลี่ยนแปลงอย่างรุนแรงรายละเอียดก่อนหน้านี้
มีลักษณะของระดับสูงของ permeabilized / เซลล์ที่เสียหายอยู่ในด้านบนซ้าย (~ 94%) เดอะ
มีเพียง ~ 3% ของที่ทำงาน เซลล์อยู่ใน Quadrant ขวาบน (รูป 2F) ต่อการเพิ่มสารสกัด
เข้มข้น 20 มิลลิกรัมต่อมิลลิลิตร-1 (MBC) หรือ 40 มิลลิกรัม ML-1 นำไปสู่ประชากรชัดเจนยิ่งขึ้นของเซลล์ permeabilized กับ
cytograph dot รูปแบบการพล็อตที่สอดคล้องกับที่ของความร้อนบำบัดเซลล์ควบคุม (รูป 2G-H) ในข้อตกลงกับ
ข้อมูลจำนวนจุลินทรีย์ที่ทั้งสองระดับของสารสกัดเพิ่มเซลล์ไม่สามารถที่จะกู้คืนความมีชีวิตบนอาหารวุ้น.
แม้ว่าค่า MIC และ MBC ระดับของสารสกัดที่ใช้งานที่แตกต่างกันสำหรับสายพันธุ์ต่างๆของเชื้อแบคทีเรียที่เกิดจากอาหาร
ที่ใช้ในการศึกษาครั้งนี้ FCM ผลการศึกษาชี้ให้เห็นอย่างชัดเจนกิจกรรมของสารสกัดเหล่านี้ที่เป็นขึ้นอยู่กับปริมาณและตกลง
กับแนวโน้มการตั้งข้อสังเกต microdilution ตรวจและฆ่าเวลา ข้อมูล cytometric แสดงสำหรับสารสกัดจาก Sage เป็น
ตัวแทนของผลกระทบที่ต่อต้านจุลินทรีย์ที่ระบุไว้สำหรับสารสกัดอื่น ๆ ที่ใช้เทคนิคนี้

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

3.4 การไหล (การวิเคราะห์แบคทีเรีย FCM เปื้อนชุดนี้โดยทั่วไปช่วยให้ความแตกต่างของประชากรเซลล์ย่อยเป็นโปรไฟล์ของเหมือนเดิม / ที่ทำงานหรือ permeabilized / เสียหาย ( เบอร์นีย์ et al . , 2007 ) ดังนั้น การเปลี่ยนแปลงในแบคทีเรียการซึมผ่านเมมเบรนของอาหาร borne รักษาด้วยสมุนไพรและเครื่องเทศสกัดจุลินทรีย์แสดงคุณสมบัติของยาต้านจุลชีพถูกประเมินในช่วงความเข้มข้น ( 1.25-40 มก. แน่นอน ) โดยใช้ PI / syto 9 .ควบคู่กับการวิเคราะห์ FCM กลุ่มตัวอย่าง จากการวิเคราะห์ FCM เสนอด้วยเปอร์เซ็นต์ประชากรย่อยไว้ภายในแต่ละภูมิภาค ( รูปที่ 2 ) โปรไฟล์เรืองแสงได้ตามการอ้างอิงถึงสองการควบคุมประชากรหนึ่งรักษาเซลล์ดังเหมือนเดิม / อาศัยอยู่ในเซลล์และอื่น ๆความร้อน เซลล์ซึ่ง permeabilized / เสียเซลล์ ของแต่ละสายพันธุ์ และศึกษาการควบคุมเซลล์ถูกย้อมเป็น syto 9 บวก และส่วนใหญ่อยู่ในบนและล่างขวาฐาน ( รูปที่ 2A ) , และเมื่อได้รับการยืนยันจากทั้งค่าการวัดที่ 600 nm และจานนับตั้งแต่แผ่น สำหรับการควบคุมเซลล์เจ้าบ้านโดยความร้อน จำนวนสีเป็นปี่เป็นบวกและอยู่ในด้านซ้ายบนเซลล์เหล่านี้ไม่สามารถที่จะกู้คืนและเติบโตบน TSA แผ่น ( รูปที่ 2B ) ในฐานะที่เป็นภาพประกอบ รูปที่ 2 ( c-h ) แสดงวิวัฒนาการของการศึกษารัฐต่าง ๆของ E . coli เซลล์ , ต่อไปนี้การรักษาด้วยสารสกัดเอทานอลของเซจ เซลล์ที่ได้รับสารสกัดความเข้มข้นต่ำสุดที่ 1.25 ลิตรแน่นอน ไม่ปรากฏผล เป็นระดับเหมือนเดิม / อาศัยอยู่ในเซลล์ไม่ได้แตกต่างจากของดิบสดการควบคุม ( รูปที่ 2 ) เมื่อความเข้มข้นสารสกัดจากสมุนไพร เพิ่มเป็น 2.5 มิลลิกรัมเปอร์เซ็นต์ที่เพิ่มขึ้นของเซลล์ที่แน่นอนชัดเจนในด้านขวาบนส่วน ( รูปที่ 2 ) เซลล์ในส่วนนี้ syto เปื้อนทั้ง 9 และปี่ที่เป็นบวก การปรากฏตัวของนี้คู่ที่เปื้อนประชากรอาจระบุเซลล์ที่มีเสียหาย membranes อนุญาตให้เจาะเข้าไปในเซลล์ของพีตกแต่งภายใน ต่อไปนี้การรักษาด้วย 5 มิลลิกรัมที่แน่นอนชัดเจนเปลี่ยนจากสีเขียวเรืองแสงเรืองแสงที่มีสีแดงและ ~ 28 % ของเซลล์อยู่ในด้านบนซ้าย ส่วนแสดงความเสียหายของเซลล์ที่เกิดจากสารสกัด( รูปที่ 2 ) การรักษาด้วยสารที่ระดับไมค์ ( มก. แน่นอน 10 ) เปลี่ยนแปลงอย่างมากรายละเอียดก่อนหน้านี้ด้วยลักษณะที่ปรากฏของระดับสูงของ permeabilized / เซลล์ที่เสียหายอยู่ในด้านซ้ายบน ( ~ 94 % )มีเพียง ~ 3% ของเซลล์ที่ทำงานอยู่ในด้านขวาบน ( รูปห้อง 2F ) เพิ่มเติม เพิ่มสารสกัดความเข้มข้น 20 มก. แน่นอน ( MBC ) หรือ 40 มิลลิกรัม นำไปสู่การกำหนดที่แน่นอนมากกว่าประชากรของ permeabilized เซลล์กับcytograph จุดพล็อตรูปแบบสอดคล้องกับที่ของความร้อนได้รับการรักษาเซลล์คุม ( รูป 2g-h ) ในข้อตกลงกับจานนับข้อมูลที่เหล่านี้สองระดับของสารสกัดเพิ่มเซลล์ไม่สามารถที่จะกู้คืนความมีชีวิตบนอาหารวุ้น .ถึงแม้ว่า , ไมโครโฟนและระดับของสารสกัดจากงาน MBC แตกต่างกันสำหรับสายพันธุ์ต่าง ๆของอาหาร borne แบคทีเรียที่ใช้ในการศึกษาครั้งนี้ ชี้ให้เห็นว่าผล FCM กิจกรรมสารสกัดเหล่านี้ก็ขึ้นกับขนาดของยา และเห็นด้วยกับแนวโน้มที่สังเกต microdilution ฆ่าเวลา ) . การไหลผ่านข้อมูลแสดงแยกเป็นปัญญาชนตัวแทนของต้านจุลชีพผลสังเกตสารสกัดอื่น ๆที่ใช้เทคนิคนี้