Cells were lysed in ice-cold RIPA b

Cells were lysed in ice-cold RIPA buffer (P0013B, Beyotime,
Shanghai, China). Lysates were adjusted so that the protein content
was equal and were boiled in loading buffer. Lysates were then
separated via electrophoresis (12% SDS–PAGE), transferred to a PVDF membrane and blocked with 5% skim milk in TBS 0.5% Tween 20. The membrane was incubated with a primary rabbit anti- UGT1A1 IgG (NBP1-69448, NOVUS) or with rabbit anti-heme oxygenase- 1(DA2045, BBI) and secondary antibody (goat anti-rabbit IRDye 680LT or goat anti-mouse IRDye 800CW; Li-COR, Biosciences, Lincoln, Nebraska, USA) and were subsequently analyzed for immunoreactivity using the ODYSSEY CLX Infrared Imaging System. Precision markers were used to assess the molecular weight.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

เซลล์ที่ถูก lysed ในบัฟเฟอร์ริป้าราคาฉ่ำ (P0013B, Beyotime,
เซี่ยงไฮ้ ประเทศจีน) Lysates ถูกปรับปรุงเพื่อให้โปรตีน
เท่า และถูกต้มในโหลดบัฟเฟอร์ Lysates ถูกแล้ว
แยกผ่าน electrophoresis (12% SDS – หน้า), โอนย้ายไปเมมเบรน PVDF และถูกบล็อค ด้วย 5% skim นมใน TBS 0.5% Tween 20 เมมเบรนมี incubated กับกระต่ายหลักป้องกันแบบ UGT1A1 IgG (NBP1 69448 โนวัส) หรือกระต่ายป้องกัน heme oxygenase-1 (DA2045, BBI) และแอนติบอดีรอง (680LT IRDye ป้องกันกระต่ายแพะหรือแพะป้องกันเมาส์ IRDye 800CW Li-COR เวลาออก ลินคอล์น รัฐเนแบรสกา สหรัฐอเมริกา) และได้วิเคราะห์ในภายหลังสำหรับ immunoreactivity ใช้โคลงฟิกอินฟราเรดภาพระบบการ แน่นอนเครื่องหมายที่ใช้ในการประเมินน้ำหนักโมเลกุล

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

เซลล์ที่ถูก lysed ในบัฟเฟอร์ RIPA เย็น (P0013B, Beyotime,
เซี่ยงไฮ้, จีน) lysates มีการปรับเพื่อให้ปริมาณโปรตีน
เท่ากับและถูกต้มในบัฟเฟอร์โหลด lysates ถูกแล้ว
แยกออกมาผ่านทางอิเล็ก (12% SDS-PAGE), โอนไปยังเมมเบรน PVDF และบล็อกด้วยนมพร่องมันเนยที่ 5% ใน TBS 0.5% Tween 20 เมมเบรนถูกบ่มกับกระต่ายหลักต่อต้าน UGT1A1 IgG (NBP1-69448, NOVUS) หรือกระต่ายต่อต้าน heme-oxygenase- 1 (DA2045, BBI) และแอนติบอดีรอง (แพะป้องกันกระต่าย IRDye 680LT หรือแพะต่อต้านเมาส์ IRDye 800CW;? Li-COR ?, ชีววิทยาศาสตร์ลิงคอล์น, เนบราสก้า, USA) และ ถูกนำมาวิเคราะห์ต่อมาทางภูมิคุ้มกันจะใช้ ODYSSEY? CLX ระบบอินฟาเรดถ่ายภาพ เครื่องหมายความแม่นยำถูกนำมาใช้ในการประเมินน้ำหนักโมเลกุล

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

เซลล์มี lysed ในเย็น RIPA บัฟเฟอร์ ( p0013b beyotime
, , เซี่ยงไฮ้ , จีน ) lysates ได้รับการปรับเพื่อให้โปรตีน
เท่ากับและต้มโหลดบัฟเฟอร์ lysates แล้ว
แยกทางอิเล็ก ( 12 % SDS หน้า– ) , โอนไปยัง PVDF เยื่อกั้น 5% หางนมผงใน TBS 0.5% Tween 20 เยื่อแผ่นแยกเป็นหลักป้องกัน - ugt1a1 IgG ( nbp1-69448 กระต่าย ,โนวัส ) หรือ oxygenase ต่อต้านท่านกระต่าย - 1 ( da2045 BBI , มัธยมศึกษา ( แพะ ) และแอนติบอดีต่อต้านกระต่าย irdye  680lt หรือแพะป้องกันเมาส์ irdye  800cw ; ลี คอร์  ชีววิทยาศาสตร์ , Lincoln , Nebraska , สหรัฐอเมริกา ) และต่อมาได้วิเคราะห์การใช้ Odyssey  clx ระบบการถ่ายภาพอินฟราเรด เครื่องหมายที่แม่นยำใช้เพื่อประเมินน้ำหนักโมเลกุล