Thus far, the risk of liver toxicit

Thus far, the risk of liver toxicity accompanied by loss or reduction of
transgene expression appears to be the most worrying toxicity associated
with liver targeted delivery of AAV as described before (Fig. 2). However,
this phenomenon can be readily controlled with short courses of
prednisolone and appears to be self-limiting with no evidence of persistent
hepatocellular damage. The precise pathophysiological basis for the
hepatocellular toxicity observed in this study remains unclear, in part
because it has not been possible to recapitulate this toxicity in animal
models. The vector preparation used in this study contained a large excess
(~80%) of empty capsids, which are fully assembled capsids that
lack a functional viral genome . These empty particles cannot mediate
FIX expression but can serve as antigenic targets for capsid-specific
cytotoxic T cells following transduction of hepatocytes (Fig. 2) .
Since the dose administered to humans is based on an estimate of the
proviral genome copy number and not the total viral capsid load, it
seems logical to assume that removal of these contaminating empty
particles, may allow administration of the high vector dose without provoking
hepatocellular toxicity or compromising the level of gene transfer.
To test this hypothesis further we have prepared another clinical lot
of self-complementary AAV2/8-LP1-hFIXco from which empty particles
have been removed by caesium chloride (CsCl) density centrifugation.
We plan to infuse this new vector preparation in subjects with severe
haemophilia B during the next year.
As expected, all subjects developed long lasting AAV8 capsid-specific
humoral immunity following peripheral vein delivery of scAAV8-LP1-
hFIXco. Whilst the rise in anti-AAV8 IgG did not have direct clinical consequences,
its persistence at high titres precludes subsequent successful
gene transfer with vector of the same serotype in the event that transgene
expression should fall below therapeutic levels. However, we
and others have established that it is possible to achieve successful
transduction in animals including non-human primates with preexisting
anti-AAV8 antibodies following administration of AAV vector
produced with an alternate serotype . Based on our current data in
subjects with haemophilia B this is likely to be required infrequently
and at periods that extend beyond 4 years.
Another potential problem of systemic administration of AAV is
spread of vector particles to non-hepatic tissues including the gonads.
Vector genomes were transiently detectable in the seminal fluid of all
subjects recruited to the AAV2 and AAV8 haemophilia B clinical trials
. The lack of persistence of the vector genome in semen of
haemophilia B patients is consistent with animal data that suggested
that AAV transduces adventitial cells present in semen and not germ
cells.
The risk of insertional mutagenesis following AAV-mediated gene
transfer has been judged to be low because it mediated transgene expression
from episomally-retained proviral DNA. This is consistent
with the fact that wild type AAV infection in humans though common
is not associated with oncogenesis. However, deep sequencing studies
show that integration of the AAV genome can occur in the liver
. Additionally, an increased incidence of hepatocellular carcinoma
(HCC) has been reported in the mucopolysaccharidoses type VII
(MPSVII) mouse model following perinatal gene transfer of AAV [59].
Remarkably, integration analysis studies suggested that the AAV genome
had integrated within a 5 kb segment of mouse chromosome
12, in an imprinted region rich in miRNAs and snoRNAs referred to as
“RIAN” . Subsequent studies in other murine models have failed to
recapitulate this finding and collectively the available data in mice as
well as larger animal models suggest that AAV has a relatively low risk
of tumourigenesis .

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ฉะนี้ ความเสี่ยงของความเป็นพิษที่ตับพร้อมกับสูญเสียหรือลดนิพจน์ transgene ที่ดูเหมือนจะ เป็นความเป็นพิษส่วนใหญ่กังวลที่เกี่ยวข้องมีตับเป้าหมายส่ง AAV ตามที่อธิบายไว้ก่อน (Fig. 2) อย่างไรก็ตามปรากฏการณ์นี้สามารถมีควบคุมพร้อม ด้วยหลักสูตรระยะสั้นของprednisolone และมีข้อจำกัดตนเอง ด้วยของแบบความเสียหายของ hepatocellular พื้นฐาน pathophysiological แม่นยำสำหรับการในการศึกษาความเป็นพิษของ hepatocellular ยังคงชัดเจน บางส่วนเนื่องจากมันไม่ได้ไป recapitulate นี้ความเป็นพิษในสัตว์รูปแบบจำลอง การเตรียมแบบเวกเตอร์ที่ใช้ในการศึกษานี้มีอยู่เกินขนาดใหญ่(~ 80%) ของ capsids ว่างเปล่า ที่ capsids ประกอบเต็มที่มีกลุ่มไวรัสทำงาน อนุภาคเหล่านี้ว่างเปล่าไม่บรรเทาแก้ไขนิพจน์ แต่สามารถใช้เป็นเป้าหมายเฉพาะของ capsid antigeniccytotoxic T เซลล์ต่อ transduction hepatocytes (Fig. 2)เนื่องจากยาจัดการกับมนุษย์เป็นไปตามประมาณการจำนวนสำเนา proviral จีโนมและไม่โหลด capsid รวมไวรัส มันดูเหมือนตรรกะคิดว่าเอาของว่างเหล่านี้ contaminatingอนุภาค อาจทำให้การบริหารยาแบบเวกเตอร์สูง โดย provokingความเป็นพิษของ hepatocellular หรือสูญเสียในระดับของการถ่ายโอนยีนการทดสอบสมมติฐานนี้ ต่อไปเราได้เตรียมมากคลินิกอื่นของตนเองเสริม AAV2/8-LP1-hFIXco จากอนุภาคที่ว่างเปล่าจะถูกเอาออก โดย centrifugation ซีเซียมคลอไรด์ (CsCl) ความหนาแน่นเราจะดองเตรียมเวกเตอร์นี้ใหม่ในเรื่อง ด้วยความรุนแรงโรคฮีโมฟิเลียบีปีถัดไปเรื่องทั้งหมดพัฒนานาน AAV8 capsid เฉพาะตามที่คาดไว้ภูมิคุ้มกัน humoral ต่อหลอดเลือดดำที่ต่อพ่วงส่งของ scAAV8-LP1 -hFIXco ในขณะที่เพิ่มขึ้นใน IgG anti-AAV8 ไม่มีผลทางคลินิกโดยตรงของมีอยู่ที่ titres สูงไม่สามารถตามมาประสบความสำเร็จการถ่ายโอนยีน ด้วยเวกเตอร์ของเดียวกันในกรณีที่ serotype transgene ที่นิพจน์ควรลดลงต่ำกว่าระดับการรักษา อย่างไรก็ตาม เราและผู้สร้างว่า จะสามารถบรรลุผลสำเร็จสัตว์รวมทั้งไม่ใช่มนุษย์ primates กับอิง transductionแอนตี้ต่อต้าน-AAV8 บริหาร AAV เวกเตอร์ต่อไปนี้ผลิต ด้วยเป็น serotype อื่น ตามข้อมูลในปัจจุบันเรื่อง ด้วยโรคฮีโมฟิเลียบีนี้มีแนวโน้มที่จะต้องขึ้นนาน ๆ ครั้งและในรอบระยะเวลา ที่ขยายเกิน 4 ปีปัญหาอื่นมีศักยภาพบริหารระบบของ AAVการแพร่กระจายของอนุภาคเวกเตอร์การเนื้อเยื่อที่ไม่ใช่ตับรวมทั้งต่อมบ่งเพศGenomes เวกเตอร์สามารถ transiently ในน้ำมันอัณฑะทั้งหมดพิจารณาเรื่องการที่ AAV2 และ AAV8 โรคฮีโมฟิเลียบีคลินิก. ขาดการมีอยู่ของกลุ่มเวกเตอร์ในน้ำเชื้อของผู้ป่วยโรคฮีโมฟิเลียบีเป็นสอดคล้องกับข้อมูลสัตว์ที่แนะนำAAV ที่ transduces ซึ่งมีเซลล์ในน้ำเชื้อและจมูกไม่ adventitialเซลล์ความเสี่ยงของ mutagenesis insertional ต่อยีน AAV mediatedโอนย้ายได้ถูกตัดสินให้ต่ำ เพราะมัน mediated transgene นิพจน์จาก episomally สะสม proviral ดีเอ็นเอ นี้มีความสอดคล้องกับป่าที่พิมพ์ AAV ติดเชื้อในมนุษย์ทั่วไปแม้ว่าความจริงไม่ได้เกี่ยวข้องกับ oncogenesis อย่างไรก็ตาม ลำดับเบสศึกษาลึกแสดงว่า รวมของจีโนม AAV สามารถเกิดขึ้นในตับ. นอกจากนี้ มีอุบัติการณ์เพิ่มขึ้นของเซลล์ตับ(คาร์โล) ได้รายงานชนิด mucopolysaccharidoses VII(MPSVII) รูปแบบเมาส์ต่อถ่ายโอนยีนปริกำเนิด AAV [59]อย่างยิ่ง รวมวิเคราะห์ศึกษาแนะนำที่จีโนม AAVมีบูรณาการภายในเซกเมนต์ 5 kb ของเมาส์โครโมโซม12 ในภูมิภาค imprinted miRNAs และ snoRNAs ที่เรียกว่า"เรียน" ไม่สามารถศึกษาต่อในรูปแบบอื่น ๆ murine ได้recapitulate นี้ค้นหาและเรียกข้อมูลมีในหนูเป็นดีเป็นรุ่นใหญ่สัตว์แนะนำว่า AAV มีความเสี่ยงค่อนข้างต่ำของ tumourigenesis

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ป่านนี้ความเสี่ยงของการเป็นพิษต่อตับพร้อมกับการสูญเสียหรือการลดลงของการแสดงออกของยีนที่ดูเหมือนจะเป็นความเป็นพิษที่กังวลมากที่สุดที่เกี่ยวข้องกับตับมีการกำหนดเป้าหมายการส่งมอบของAAV ตามที่อธิบายไว้ก่อน (รูปที่. 2) แต่ปรากฏการณ์นี้สามารถควบคุมได้อย่างง่ายดายด้วยหลักสูตรระยะสั้นของprednisolone และดูเหมือนจะเป็นตัว จำกัด มีหลักฐานของถาวรไม่มีความเสียหายที่ตับ พื้นฐาน pathophysiological แม่นยำสำหรับความเป็นพิษต่อตับสังเกตในการศึกษาครั้งนี้ยังไม่ชัดเจนในส่วนหนึ่งเพราะมันยังไม่ได้รับเป็นไปได้ที่จะย้ำความเป็นพิษในสัตว์รุ่น การเตรียมเวกเตอร์ที่ใช้ในการศึกษาครั้งนี้มีส่วนเกินที่มีขนาดใหญ่(~ 80%) ของ capsids ที่ว่างเปล่าซึ่งมีการประกอบอย่างเต็มที่ capsids ที่ขาดจีโนมของไวรัสทำงาน อนุภาคที่ว่างเปล่าเหล่านี้ไม่สามารถเป็นสื่อกลางในการแสดงออกการแก้ไข แต่สามารถใช้เป็นเป้าหมายแอนติเจนสำหรับ capsid เฉพาะเซลล์cytotoxic T ต่อไปพลังงานของเซลล์ตับ (รูปที่. 2). เนื่องจากปริมาณยามนุษย์อยู่บนพื้นฐานของการประเมินที่จำนวนสำเนาจีโนม proviral และไม่ โหลด capsid ไวรัสรวมก็ดูเหมือนว่าตรรกะที่จะถือว่าการกำจัดของว่างปนเปื้อนเหล่านี้ที่อนุภาคอาจช่วยให้การบริหารงานของปริมาณเวกเตอร์ที่สูงโดยไม่กระตุ้นความเป็นพิษต่อตับหรือสูญเสียระดับของการถ่ายโอนยีน. เพื่อทดสอบสมมติฐานนี้ต่อไปเราได้จัดเตรียมไว้จำนวนมากทางคลินิกอื่นของAAV2 ตนเองเสริม / 8 LP1-hFIXco จากการที่อนุภาคที่ว่างเปล่าได้ถูกลบออกจากซีเซียมคลอไรด์(CsCl) ปั่นหนาแน่น. เราวางแผนที่จะใส่เตรียมเวกเตอร์ใหม่นี้ในอาสาสมัครที่มีอาการรุนแรงB ฮีโมฟีเลียในช่วงปีถัดไป. เป็นที่คาดหวังทุกวิชา การพัฒนาในระยะยาว capsid เฉพาะ AAV8 ภูมิคุ้มกันของร่างกายต่อไปนี้การจัดส่งของหลอดเลือดดำต่อพ่วง scAAV8-LP1- hFIXco ในขณะที่การเพิ่มขึ้นของ IgG ต่อต้าน AAV8 ไม่ได้มีผลกระทบทางคลินิกโดยตรงติดตาไตเตอร์ที่สูงพอสมควรภายหลังประสบความสำเร็จในการถ่ายโอนยีนกับเวกเตอร์ของserotype เดียวกันในกรณีที่ยีนแสดงออกว่าจะลดลงต่ำกว่าระดับการรักษา อย่างไรก็ตามเราและคนอื่น ๆ ได้ยอมรับว่ามันเป็นไปได้ที่จะประสบความสำเร็จบรรลุพลังงานในสัตว์รวมทั้งบิชอพที่ไม่ใช่มนุษย์ที่มีมาก่อนแอนติบอดีต่อต้านAAV8 ต่อไปนี้การบริหารงานของ AAV เวกเตอร์ที่ผลิตด้วยserotype อื่น บนพื้นฐานของข้อมูลในปัจจุบันของเราในวิชาที่มีฮีโมฟีเลียบีนี้มีแนวโน้มที่จะต้องนาน ๆ ครั้งและในช่วงเวลาที่ขยายเกิน4 ปี. อีกปัญหาที่อาจเกิดขึ้นจากการบริหารจัดการระบบของ AAV มีการแพร่กระจายของอนุภาคเวกเตอร์ไปยังเนื้อเยื่อที่ไม่ใช่ตับรวมทั้งอวัยวะสืบพันธุ์. จีโนมของเวกเตอร์ เป็น transiently ที่ตรวจพบในน้ำอสุจิของทุกวิชาที่ได้รับคัดเลือกไปAAV2 และ AAV8 ใร B การทดลองทางคลินิก ขาดการคงอยู่ของจีโนมของเวกเตอร์ในน้ำอสุจิของผู้ป่วยฮีโมฟีเลียบีมีความสอดคล้องกับข้อมูลสัตว์ที่ชี้ให้เห็นว่าAAV transduces เซลล์ adventitial อยู่ในน้ำอสุจิและไม่เชื้อโรคเซลล์. ความเสี่ยงของการแทรก mutagenesis ต่อไปนี้ยีน AAV-พึ่งโอนได้รับการตัดสินที่จะต่ำเพราะมันพึ่งแสดงออกของยีนจาก episomally-สะสมดีเอ็นเอ proviral ซึ่งสอดคล้องกับความจริงที่ว่าประเภทป่า AAV การติดเชื้อในมนุษย์ แต่ที่พบบ่อยจะไม่เกี่ยวข้องกับเกิดเนื้องอก อย่างไรก็ตามการศึกษาลึกลำดับแสดงให้เห็นว่าการรวมกลุ่มของจีโนมของ AAV สามารถเกิดขึ้นได้ในตับ นอกจากนี้อุบัติการณ์ที่เพิ่มขึ้นของมะเร็งตับ(HCC) ได้รับรายงานในประเภท mucopolysaccharidoses ปกเกล้าเจ้าอยู่หัว(MPSVII) รูปแบบเมาส์ต่อไปนี้การถ่ายโอนยีนปริกำเนิดของ AAV [59]. ยวดศึกษาวิเคราะห์บูรณาการชี้ให้เห็นว่าจีโนม AAV ได้บูรณาการภายใน 5 กิโล ส่วนของโครโมโซมเมาส์ที่12 ในภูมิภาคที่อุดมไปด้วยตราตรึงใจใน miRNAs และ snoRNAs เรียกว่า"เหรียญ" การศึกษาต่อในรูปแบบอื่น ๆ ที่หนูจะยังไม่ได้สรุปการค้นพบนี้และเรียกข้อมูลที่มีอยู่ในหนูเป็นเดียวกับที่มีขนาดใหญ่รูปแบบสัตว์แสดงให้เห็นว่าAAV มีความเสี่ยงค่อนข้างต่ำของtumourigenesis

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ดังนั้น ความเสี่ยงต่อความเป็นพิษต่อตับพร้อมด้วยการสูญเสียหรือการลดการแสดงออกของยีน
ดูเหมือนจะกังวลมากที่สุดที่เกี่ยวข้องกับความเป็นพิษของตับ การ aav
เป้าหมายตามที่อธิบายไว้ก่อน ( รูปที่ 2 ) อย่างไรก็ตาม ปรากฏการณ์นี้สามารถควบคุม
พร้อมกับหลักสูตรระยะสั้นของ
Prednisolone และดูเหมือนจะ จำกัด ตัวเองไม่มีหลักฐานของถาวร
ตับเสียหายความแม่นยำ พยาธิสรีรวิทยาพื้นฐานสำหรับ
ตับพิษพบว่าในผู้ป่วยยังไม่ชัดเจน ในส่วน
เพราะว่ามันยังไม่ได้เป็นไปได้ที่จะสรุปความพิษในตัว

เวกเตอร์ฟรีเกี่ยวกับการเตรียมใช้ในการศึกษานี้ประกอบด้วย
เกินใหญ่ ~ i ( 80% ) ของแคปซิดว่างเปล่า ซึ่งจะประกอบอย่างเต็มที่แคปซิดที่
ขาดการทำงานไวรัสจีโนม .อนุภาคว่างเปล่าเหล่านี้ไม่สามารถไกล่เกลี่ย
การแสดงออกแก้ไข แต่สามารถใช้เป็นเป้าหมายสำหรับเพลี้ยชนิดเฉพาะเจาะจง
ความเป็นพิษต่อเซลล์ T ต่อไปนี้การแปรต่อ ( รูปที่ 2 ) .
ตั้งแต่ dose ทดสอบมนุษย์ขึ้นอยู่กับการประมาณการของ
โพรไวรัลดีคัดลอกจีโนมจำนวนและไม่รวมเปลือกไวรัสโหลดมัน
ดูเหมือนว่าตรรกะที่จะสรุปว่า การกำจัดของเหล่านี้ปนเปื้อนอนุภาคว่างเปล่า
,อาจช่วยให้การบริหารปริมาณเวกเตอร์สูงโดยไม่สูญเสียความเป็นพิษหรือยั่ว
ได้แก่ระดับการถ่ายโอนยีน .
เพื่อทดสอบสมมติฐานนี้ต่อไป เราได้เตรียมอีกมากทางคลินิกของตนเอง ซึ่ง aav2
/ 8-lp1-hfixco ซึ่งว่างเปล่าอนุภาค
ได้ถูกลบออกโดยซีเซียมคลอไรด์ ( CSCL ) 3
ความหนาแน่นเราวางแผนที่จะใส่เตรียมเวกเตอร์ใหม่นี้ในวิชาที่มีรุนแรง
ฮีโมฟิเลียบีในปีถัดไป .
ตามที่คาดไว้ ทุกวิชา พัฒนายั่งยืน aav8 ตราหน้าเฉพาะ
humoral ภูมิคุ้มกันต่ออุปกรณ์ต่อพ่วงหลอดเลือดดำการ scaav8-lp1 -
hfixco . ขณะที่การเพิ่มขึ้นของ anti-aav8 IgG ไม่ได้มีผลทางคลินิกโดยตรง การคงอยู่ของ titres สูง

precludes ต่อมาประสบความสำเร็จการถ่ายโอนยีนที่มีเวกเตอร์ของซีโรไทป์เดียวกันในกรณีที่การแสดงออกยีน
ควรต่ำกว่าระดับยา อย่างไรก็ตาม , เรา
และอื่น ๆ มีขึ้นว่ามันเป็นไปได้เพื่อให้บรรลุความสำเร็จผ่านในสัตว์รวมทั้งมนุษย์สัตว์

anti-aav8 แอนติบอดีที่มีอยู่ตามการบริหาร aav เวกเตอร์
ผลิตกับหูอื่นจากข้อมูลปัจจุบันของเราใน
วิชาด้วยโรคฮีโมฟิเลียข นี้มีแนวโน้มที่จะต้องไม่บ่อย
และระยะเวลาที่ขยายเกิน 4 ปี อีกปัญหาที่อาจเกิดขึ้นในการบริหารระบบ

ของ aav คือการแพร่กระจายของอนุภาคเวกเตอร์ในเนื้อเยื่อตับไม่รวมอยู่หมัด .
เวกเตอร์จีโนมถูกตรวจพบในบุคคลหรือสิ่งที่อยู่ชั่วคราวน้ําอสุจิของ
คน และการคัดเลือกให้ aav2 aav8 ฮีโมฟิเลียบีคลินิก

การคงอยู่ของเวกเตอร์จีโนมในน้ำอสุจิของ
b ผู้ป่วยฮีโมฟีเลียจะสอดคล้องกับข้อมูลที่พบว่าสัตว์
aav transduces adventitial เซลล์ที่อยู่ในน้ำอสุจิ และเซลล์สืบพันธุ์
.
ความเสี่ยงของการ insertional ต่อไปนี้ aav
) ยีนการได้รับการตัดสินจะน้อย เพราะมันผ่านยีนการแสดงออก
จาก episomally สะสมโพรไวรัลดี ดีเอ็นเอ ซึ่งสอดคล้องกับความจริงที่ว่า ป่าประเภท

แต่ aav การติดเชื้อในมนุษย์ทั่วไปไม่ได้เกี่ยวข้องกับนโคเจเนซิส . อย่างไรก็ตามการศึกษาแสดงให้เห็นว่าการรวมลึก
ลำดับจีโนมของ aav สามารถเกิดขึ้นในตับ

นอกจากนี้อุบัติการณ์เพิ่มขึ้นของมะเร็งตับ
( HCC ) ได้รับรายงานใน mucopolysaccharidoses ประเภท 7
( mpsvii ) เมาส์รุ่นต่อไปนี้การถ่ายโอนยีนปริของ aav [ 59 ] .
อย่างน่าทึ่ง , การวิเคราะห์การบูรณาการการศึกษาชี้ให้เห็นว่า aav จีโนม
มีการบูรณาการภายใน 5 KB ส่วนเมาส์โครโมโซม
12 ในแต่ละภูมิภาค รวย และใน mirnas snornas เรียกว่า
" เรียน "การศึกษาต่อมาในรุ่นอื่น ๆได้ล้มเหลว ~

สรุปแล้วนี้การค้นหาและเรียกใช้ข้อมูลในหนูที่เป็นสัตว์ขนาดใหญ่รุ่น
แนะนำว่า aav มีความเสี่ยงค่อนข้างต่ำของ

tumourigenesis .