(2)Isolation of yeasts Bottles containing 500 mL of sample were shaken well, and a 0.5-mL aliquot of each sample was inoculated into 5 mL of autoclaved yeast extract- malt extract broth (YM broth) containing 0.3% yeast extract (Difco, Detroit, MI, USA), 0.3% malt extract (Difco) and 0.5% polypeptone (Wako Pure Chemical Co. Ltd., Japan). To these YM broths, 2, 25 or 50% glucose were added and labeled YM2, YM25 or YM50, respectively. The pH was ad- justed to 3.7 and 4.5 for YM2 and YM25 media, respectively, using 1 M HCl. The pH of YM50 was 5.9. Inoculated broth cultures were incubated in a shaker incubator (200 rpm) at 30℃ for 7 days. All YM agar media (2, 1.5 and 1.2% agar added to YM2, YM25 and YM50 media, respectively) were streak inoculated from the suspension cultures as described by Kurtzman et al. (2001). Streaked plates were incubated at 25℃ for 7 days. Colonies were plated again onto the cor- responding agar media, and pure cultures were maintained on yeast extract-peptone-glucose (YPD) agar slants contain- ing 0.5% yeast extract, 1% polypeptone, 2% glucose and 2% agar at 4℃.
Yeasts ขวดประกอบด้วยขนาด 500 มล.ของตัวอย่าง (2) แยกถูกเขย่าด้วย และส่วนลงตัว 0.5 mL ของแต่ละอย่างถูก inoculated ใน 5 mL ของยีสต์ autoclaved มอลต์สกัดสารสกัดซุป (ซุป YM) 0.3% สารสกัดจากยีสต์ (Difco ดีทรอยต์ MI สหรัฐอเมริกา), 0.3% มอลต์สกัด (Difco) และ 0.5% polypeptone (Wako เพียวเคมี จำกัด ญี่ปุ่น) การ broths นี้ YM, 2 กลูโคส 25 หรือ 50% ได้เพิ่ม และติดป้ายว่า YM2, YM25 หรือ YM50 ตามลำดับ PH ถูกโฆษณา-justed 3.7 และ 4.5 สำหรับ YM2 และ YM25 สื่อ ตามลำดับ ใช้ 1 M HCl PH ของ YM50 เป็น 5.9 ซุป inoculated วัฒนธรรมถูก incubated ในการบ่มเพาะวิสาหกิจเชคเกอร์ (200 รอบต่อนาที) ที่ 30℃ 7 วัน สื่อทั้งหมด YM agar (2, 1.5 และ 1.2% agar เพิ่ม YM2, YM25 และ YM50 สื่อ ตามลำดับ) มีแนว inoculated จากแขวนตามที่อธิบายไว้โดย Kurtzman และ al. (2001) แผ่นลายถูก incubated ที่ 25℃ 7 วัน อาณานิคมถูกชุบอีกครั้งบนการประกอบ-agar สื่อ และวัฒนธรรมล้วนมีอยู่ในยีสต์สกัด-peptone-กลูโคส (YPD) ตอบสนอง agar เอียงสารสกัดจากยีสต์ 0.5% ประกอบด้วยกำลัง polypeptone 1%, 2% กลูโคส และ agar 2% ที่ 4 ℃
การแปล กรุณารอสักครู่..
(2) การแยกยีสต์ที่มีขวด 500 มิลลิลิตรของตัวอย่างถูกเขย่าอย่างดีและ aliquot 0.5 มิลลิลิตรของแต่ละตัวอย่างได้รับเชื้อเป็น 5 มิลลิลิตรของยีสต์นึ่งฆ่าเชื้อมอลต์ extract- สารสกัดจากน้ำซุป (YM น้ำซุป) ที่มีสารสกัดจากยีสต์ 0.3% (Difco, ดีทรอยต์, MI, USA) 0.3% สารสกัดจากมอลต์ (Difco) และ 0.5% polypeptone (Wako Pure เคมี จำกัด , ญี่ปุ่น) เหล่านี้ซุปมิโสะ YM, 2, 25 หรือ 50% กลูโคสที่เพิ่มขึ้นและติดป้าย YM2, YM25 หรือ YM50 ตามลำดับ พีเอชที่ได้รับการเพิ่มตำแหน่งที่ justed 3.7 และ 4.5 สำหรับ YM2 และ YM25 สื่อตามลำดับโดยใช้ 1 M HCl ค่า pH ของ YM50 5.9 เชื้อวัฒนธรรมน้ำซุปถูกบ่มในตู้อบเครื่องปั่น (200 รอบต่อนาที) วันที่ 30 ℃เป็นเวลา 7 วัน สื่อ YM agar (2, 1.5 และ 1.2% วุ้นเพิ่ม YM2, YM25 และ YM50 สื่อตามลำดับ) เป็นแนวเชื้อจากวัฒนธรรมระงับตามที่อธิบายไว้โดยเคิร์ทซ์และคณะ (2001) แผ่นลายไปบ่มที่อุณหภูมิ 25 ℃เป็นเวลา 7 วัน อาณานิคมถูกชุบอีกครั้งบนสาหรับการตอบสนองสื่อวุ้นและวัฒนธรรมที่บริสุทธิ์ได้รับการเก็บรักษาไว้ในยีสต์สารสกัดเปปโตนกลูโคส (YPD) วุ้น slants ภาชนะไอเอ็นจีสารสกัดจากยีสต์ 0.5%, 1% polypeptone กลูโคส 2% และ 2% วุ้นที่ 4 ℃
การแปล กรุณารอสักครู่..
( 2 ) การแยกยีสต์ขวดบรรจุ 500 มิลลิลิตร จำนวนสะเทือนได้ดี และ 0.5-ml ส่วนลงตัวของแต่ละตัวอย่างเป็นเชื้อ 5 มิลลิลิตร สารสกัดจากยีสต์ สารสกัดจากมอลต์สังเคราะห์ - น้ำซุป ( ซุป ) ) ประกอบด้วยสารสกัดจากยีสต์ 0.3% ( difco ดีทรอยท์ มิ , USA ) , สารสกัดจากมอลต์ 0.3% ( difco ) และ 0.5 % ( เพียว เคมี จำกัด polypeptone Wako , ญี่ปุ่น ) าการเหล่านี้เพื่อ , 225 หรือ 50 % กลูโคสเพิ่มป้าย ym2 ym25 , หรือได้ตามลำดับ ค่า pH คือโฆษณา - justed ราคา 4.5 สำหรับ ym2 ym25 ตามลำดับ และสื่อที่ใช้ 1 M HCl . ค่า pH ได้คือ 5.9 . หัวเชื้อน้ำซุปวัฒนธรรมถูกบ่มในตู้อบ ( เขย่า 200 รอบต่อนาทีที่อุณหภูมิ 30 ℃ ) เป็นเวลา 7 วัน สื่อต่างๆ ) ( 2 , 1.5 และ 1.2% วุ้นเพิ่ม ym2 ym25 ได้ , และสื่อตามลำดับ ) เป็นริ้ว หัวเชื้อจากการระงับวัฒนธรรมตามที่อธิบายไว้โดย เคิร์ทแมน et al . ( 2001 ) ลายแผ่นอุณหภูมิ 25 ℃เป็นเวลา 7 วัน อาณานิคมได้ถูกชุบอีกครั้งเข้าสู่หัวใจ - สนองอาหารวุ้น และเชื้อบริสุทธิ์ถูกรักษายีสต์สกัด ( extract glucose agar slants ypd ) ประกอบด้วย - ไอเอ็นจีสารสกัดจากยีสต์ 0.5% , 1% polypeptone กลูโคสร้อยละ 2 และ 2 % Agar 4 ℃ .
การแปล กรุณารอสักครู่..