2.3. Amplification and sequencing o

2.3. Amplification and sequencing of 16S rDNA gene
Amplification of the 16S rDNA gene (1500 bp) was performed
using specific primers for Lactobacillus and Lactococcus genus (F: 50-
AGAGTTTGATCMTGGCTCAG-30 and R: 50-TACCTTGTTAGGACTTCACC-
30). The PCR program cycle was set as follows: denaturation
for 4 min at 95 C, 32cycles for 5 min (which consisted of 94 C for
1 min, 58 C for 1 min, and 72 C for 95 s), and a final extension at
72 C for 5 min. Amplicons were electrophoresed on 1% agarose gel.
The amplified fragment was then purified from the gel using a
QIAquick PCR purification kit (QIAGEN, Hilden, Germany). Purified
16S rDNA fragments were sequenced by Macrogene Company
(Korean sequencing company). Each sequence was blasted with deposited sequences in GenBank, NCBI site
to molecularly identify each strain.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.3 การขยายและจัดลำดับของยีน 16S rDNAทำการขยายการ 16S rDNA ยีน (1500 bp)ใช้ไพรเมอร์เฉพาะสกุลแลคโตบาซิลลัสและ Lactococcus (F: 50-AGAGTTTGATCMTGGCTCAG-30 และ R: 50-TACCTTGTTAGGACTTCACC -30) . วงจร PCR โปรแกรมถูกตั้งค่าเป็นดังนี้: denaturationใน 4 นาทีที่ 95 C, 32cycles สำหรับ 5 นาที (ซึ่งประกอบด้วย C 94 สำหรับ1 นาที 58 C ใน 1 นาที และ 72 C สำหรับ 95 s), และส่วนขยายเป็นขั้นสุดท้ายที่ซี 72 สำหรับ 5 นาที Amplicons ได้ electrophoresed ในเจ 1% agaroseส่วนเอาต์ที่บริสุทธิ์แล้วใช้เจลเป็นชุดฟอก QIAquick PCR (QIAGEN, Hilden เยอรมนี) บริสุทธิ์ที่ชิ้นส่วน 16S rDNA ถูกเรียงลำดับ โดย บริษัท Macrogene(ลำดับที่เกาหลีบริษัท) แต่ละลำดับมีเสียหายกับลำดับนำฝากใน GenBank ไซต์ NCBI molecularly ระบุต้องใช้แต่ละ

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.3 การขยายและการเรียงลำดับของยีน 16S rDNA
ขยายของยีน 16S rDNA (1500 bp) ได้ดำเนินการ
โดยใช้ไพรเมอร์ที่เฉพาะเจาะจงสำหรับแลคโตบาซิลลัสและสกุล Lactococcus (F: 50
AGAGTTTGATCMTGGCTCAG-30 และ R: 50 TACCTTGTTAGGACTTCACC-
30) วงจรโปรแกรม PCR ถูกกำหนดดังนี้ denaturation
4 นาทีที่ 95 ซี 32cycles เวลา 5 นาที (ซึ่งประกอบไปด้วย 94 องศาเซลเซียสเป็นเวลา?
1 นาที 58 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 1 นาทีและ 72 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 95 s?) และ ขยายรอบสุดท้ายที่
72 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 5 นาที amplicons ถูก electrophoresed เมื่อวันที่ 1% agarose เจล.
ส่วนขยายบริสุทธิ์แล้วจากเจลโดยใช้
ชุดฟอก PCR QIAquick (QIAGEN, ฮิลเดน, เยอรมนี) บริสุทธิ์
ชิ้นส่วน 16S rDNA มีลำดับขั้นตอนโดย Macrogene บริษัท
(บริษัท ลำดับเกาหลี) ลำดับที่แต่ละคนได้ทำลายด้วยลำดับฝากใน GenBank, เว็บไซต์ NCBI
โมเลกุลเพื่อระบุแต่ละสายพันธุ์

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.3 และการหาลำดับเบสของยีน 16S rDNA (
( ของ 16S rDNA ยีน ( 1500 BP ) คือการใช้ไพรเมอร์ที่จำเพาะสำหรับแลคโตบาซิลลัส
และ แลคโตค คัสสกุล ( F : 50 -
agagtttgatcmtggctcag-30 และ R : 50-taccttgttaggacttcacc -
30 ) ร่วมโปรแกรมวงจรไว้ดังนี้ (
4 นาทีที่ 95  C 32cycles เป็นเวลา 5 นาที ( ซึ่งจำนวน 94  C
1 นาที , 58  องศาเซลเซียสนาน 1 นาทีและ 72  C 95 ) และสุดท้ายเป็นนามสกุลที่
72  องศาเซลเซียสเป็นเวลา 5 นาที amplicons เป็น electrophoresed บน 1% เจล .
amplified fragment ก็บริสุทธิ์จากเจลใช้
qiaquick PCR ฟอก Kit ( QIAGEN Hilden , เยอรมนี ) ชิ้นส่วนถูกลำดับเบส 16S rDNA ด้วย

โดย macrogene บริษัท ( บริษัท จัดลำดับของเกาหลี ) แต่ละลำดับด้วยฝากลำดับบริเวณถูกระเบิด ,ncbi เว็บไซต์
จะประกอบด้วยโมเลกุลระบุแต่ละสายพันธุ์