3.3. Biomolecule immobilization on

3.3. Biomolecule immobilization on functionalized membrane surface

The enzyme lipase from C. rugosa, bovine serum albumin (BSA) and recombinant Protein G were immobilized on the functionalized membranes with (RC-OX-EDA-GA) and without (RC-OX) spacer. The immobilization was performed in batch conditions, under gentle stirring, at controlled temperature (24 °C). Protein solutions were prepared by dissolving protein powders in PBS, 50 mM, pH 7. Before immobilization, the membrane discs (0.78 cm2) were equilibrated in PBS (pH 7) and then transferred into the protein solutions Protein-immobilized membranes were washed several times with PBS. Finally, the bio-functionalized membranes were treated with 50 mM sodium borohydride (NaBH4) in NaOH at 4 °C, in order to stabilize the covalent linkage and reconvert the unreacted aldehyde groups into the original hydroxyl groups. Different reaction times (1, 5, 10, 15, 60 min) have been investigated. The conversion degree was measured directly with BCA test (vide infra) and was calculated by the absorbance value at 562 nm. The irreversibility of the binding between the membrane and the proteins was tested by performing desorption tests at acidic (PBS pH 5.5) and basic (Tris HCl pH 8.5) conditions.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

3.3. โมเลกุลชีวภาพตรึงบนผิวเมมเบรนการปรับหมู่ฟังก์ชั่นเอนไซม์ไลเปสเอนไซม์จากงูเหนือ C. วัว serum albumin (บีเอสเอ) และ recombinant โปรตีน G ถูกตรึงบนเยื่อ functionalized ด้วย (RC-วัว-EDA-GA) และไม่ มีแผ่นรอง (RC-วัว) ทำการตรึงในชุด ภายใต้การกวนเบา ๆ ควบคุมอุณหภูมิ (24 ° C) โซลูชั่นโปรตีนถูกเตรียม โดยละลายผงโปรตีนใน PBS, 50 มม. ค่า pH 7 ก่อนตรึง แผ่นเมมเบรน (0.78 cm2) ถูก equilibrated ใน PBS (pH 7) แล้ว โอนไปเป็นโซลูชั่นโปรตีนที่เยื่อหุ้มตรึงโปรตีนถูกล้างหลาย ๆ ครั้ง ด้วย PBS ในที่สุด เยื่อชีวภาพปรับหมู่ฟังก์ชั่นที่ถูกรักษา ด้วย 50 มม.โซเดียมโบโรไฮไดรด์ (NaBH4) ใน NaOH ที่อุณหภูมิ 4 ° C เพื่อรักษาเสถียรภาพของการเชื่อมโยงโควาเลนต์ และแปลงกลับกลุ่มแอลดีไฮด์ unreacted เป็นกลุ่มไฮดรอกเดิม เวลาปฏิกิริยาต่างกัน (1, 5, 10, 15, 60 นาที) ได้รับการตรวจสอบ มีวัดระดับการแปลงกับ BCA ทดสอบ (อซิอินฟา) และคำนวณค่า absorbance ที่ 562 nm Irreversibility ของการรวมระหว่างเมมเบรนโปรตีนได้รับการทดสอบ โดยทำการทดสอบการ desorption เป็นกรด (PBS ค่า pH 5.5) และสภาวะ (ทริ HCl pH 8.5) พื้นฐาน

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

3.3 biomolecule ตรึงบนเมมเบรนฟังก์ชันผิวเอนไซม์ไลเปสเอนไซม์จากซี rugosa, วัวซีรั่มอัลบูมิ (BSA) และโปรตีน G ถูกตรึงบนเยื่อฟังก์ชันที่มี (RC-OX-EDA-GA) และไม่มี (RC-OX) spacer ตรึงกำลังดำเนินการอยู่ในสภาพชุดภายใต้กวนอ่อนโยนที่ควบคุมอุณหภูมิ (24 ° C) โซลูชั่นโปรตีนได้จัดทำขึ้นโดยการละลายผงโปรตีนในพีบีเอสขนาด 50 มมค่า pH 7. ก่อนที่จะตรึงแผ่นเมมเบรน (0.78 cm2) ถูก equilibrated ในพีบีเอส (pH 7) แล้วย้ายในการแก้ปัญหาโปรตีนเยื่อโปรตีนตรึงถูกล้างหลายครั้ง กับพีบีเอส สุดท้ายเยื่อชีวภาพฟังก์ชันได้รับการรักษาที่มีขนาด 50 มมโซเดียม borohydride (NaBH4) ใน NaOH ที่ 4 องศาเซลเซียสในการสั่งซื้อเพื่อรักษาเสถียรภาพของการเชื่อมโยงโควาเลนต์และ reconvert กลุ่ม unreacted ลดีไฮด์เป็นกลุ่มไฮดรอกซิเดิม เวลาที่ต่างกันการเกิดปฏิกิริยา (1, 5, 10, 15, 60 นาที) ได้รับการตรวจสอบ การศึกษาระดับปริญญาแปลงวัดโดยตรงกับการทดสอบ BCA (Vide ข้างล่างนี้) และที่คำนวณได้จากค่าการดูดกลืนแสงที่ 562 นาโนเมตร กลับไม่ได้ของที่มีผลผูกพันระหว่างเยื่อหุ้มเซลล์และโปรตีนได้รับการทดสอบโดยการดำเนินการทดสอบการคายที่เป็นกรด (พีบีเอสพีเอช 5.5) และระดับล่าง (Tris HCl ค่า pH 8.5) เงื่อนไข

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

3.3 . ชีวโมเลกุลที่มีการตรึงบนพื้นผิวเมมเบรนเอนไซม์ไลเปสจาก C . พัฒนาอัลบูมิน ( , 6 ) และรีคอมบิแนนท์โปรตีน G ถูกตรึงบนที่มีเยื่อหุ้มด้วย ( rc-ox-eda-ga ) และไม่มี ( rc-ox ) spacer . การตรึงในการปฏิบัติภายใต้เงื่อนไขแบบอ่อนโยน , กวน , ควบคุมอุณหภูมิ ( 24 ° C ) โซลูชั่นเตรียมโดยละลายผงโปรตีนโปรตีนใน PBS , 50 มม. , pH 7 ก่อนการผลิต , เยื่อแผ่น ( 1 ตร. ซม. ) equilibrated ใน PBS ( pH 7 ) แล้วย้ายลงในโซลูชั่นโปรตีนโปรตีนเมมเบรนถูกตรึงล้างหลายครั้งกับ PBS ในที่สุด , ไบโอเมมเบรนที่มีการเก็บรักษาโซเดียมบอโรไฮไดรด์ 50 มม. ( nabh4 ) NaOH ที่ 4 ° C เพื่อรักษาเสถียรภาพและการเชื่อมโยงการ reconvert เข้าสู่กลุ่มอัลดีไฮด์ในกลุ่มไฮดรอกซิลต้นฉบับ เวลาในการเกิดปฏิกิริยาที่แตกต่างกัน ( 1 , 5 , 10 , 15 , 60 นาที ) ได้รับการสอบสวน การเปลี่ยนแปลงระดับวัดโดยตรงแบบ BCA ( เห็นใต้ ) และได้คำนวณค่าการดูดกลืนแสงที่ 562 นาโนเมตร การต่อของการผูกระหว่างเยื่อหุ้มเซลล์และโปรตีนที่ถูกทดสอบโดยการปฏิบัติการทดสอบการคายที่เป็นกรด ( pH 5.5 ( PBS ) และพื้นฐานสำหรับกรดไฮโดรคลอริก pH 8.5 ) เงื่อนไข