The CTC assay is slightly modified

The CTC assay is slightly modified from as described previously (Harayama et al., 2000).
The CTC staining solution containing 750 μm CTC, 5 mM DL-cysteine, 130 mM NaCl and
20mM Tris (hydroxymethyl aminomethane) (pH 7.8) is prepared immediately before use.
This solution is protected from light until analysis. Briefly, 50 μl of sperm suspension will be
mixed with 50 μl of CTC staining solution for 30 sec, followed by the addition of 10μl 12.5%
paraformaldehyde in 0.5 M Tris-HCl (pH 7.4) as a fixative. Then, 10 μl of the sperm
suspension is mixed well with equal volume of antifade solution (0.22 M of 1,4-
diazabicyclo[2,2,2]octane ;DABCO) in glycerol:PBS (9:1) on the microscopic slide and gently
compressed with coverslip. Two slides are prepared from each sample and stored in the
dark at at 4 °C until evaluation. Two hundred spermatozoa per slide will be under a Nikon
fluorescence microscope at 400x under blue-violet illumination (excitation at 400–440 nm
and emission at 470 nm). The spermatozoa are classified in to three staining patterns
described by Fraser et al. (1995). F-pattern, fluorescence over the whole region of the sperm
head are considered to be “non-capacitated spermatozoa”. B-pattern, fluorescence in the
acrosomal region except post-acrosomal region are considered to be “capacitated
spermatozoa”. AR-pattern, low or no fluorescence over the whole head except thin bright
ban in the equatorial segment are considered to be “acrosome-reacted spermatozoa”.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ทดสอบ CTC เป็นแก้ไขเล็กน้อยจากตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ (Harayama et al. 2000)CTC ย้อมโซลูชันที่ประกอบด้วย 750 ไมครอน CTC, 5 มม. DL-cysteine, 130 มม. NaCl และทริส (hydroxymethyl aminomethane) ขนาด 20 มม. (pH 7.8) จะเตรียมทันทีก่อนใช้โซลูชันนี้ได้รับการป้องกันจากแสงจนถึงการวิเคราะห์ สั้น ๆ μl 50 ของสเปิร์มระงับจะผสมกับ μl 50 ของ CTC ย้อมสำหรับ 30 วินาที ตาม ด้วยการเพิ่ม 10μl 12.5%paraformaldehyde ใน 0.5 M ทริสเรทติ้ง HCl (pH 7.4) เป็นเครื่องทำให้คง แล้ว μl 10 เชื้ออสุจิระงับผสมกับปริมาณเท่าของ antifade (0.22 ม 1, 4-ดีdiazabicyclo [2,2,2] นสูง DABCO) ในกลีเซอรอล: PBS (9:1) บนภาพนิ่งด้วยกล้องจุลทรรศน์ และค่อย ๆบีบอัด ด้วย coverslip จากตัวอย่างแต่ละภาพนิ่งสองภาพ และเก็บไว้ในมืดที่ 4 ° c จนถึงการประเมินผล จะได้ตัวอสุจิสองร้อยนิ่ง Nikonกล้องจุลทรรศน์เรืองแสงที่ 400 x ภายใต้แสงสีม่วงสีน้ำเงิน (กระตุ้นที่ 400-440 nmและปล่อยที่ 470 nm) ตัวอสุจิถูกจำแนกลายผมสามอธิบายโดย Fraser et al. (1995) รูปแบบ F เรืองแสงเหนือภูมิภาคทั้งเชื้ออสุจิหัวจะถือว่าเป็น "capacitated ไม่ใช่ตัวอสุจิ" รูปแบบ B เรืองแสงในการacrosomal ภูมิภาคยกเว้นภาค acrosomal หลังถือว่าเป็น "capacitatedตัวอสุจิ" AR-รูปแบบ ต่ำหรือไม่มีเรืองแสงเหนือศีรษะทั้งหมดยกเว้นบางสดใสบ้าน ในเซกเมนต์เส้นศูนย์สูตรจะถือว่าเป็น "อะโครโซมปฏิกิริยาตัวอสุจิ"

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

การทดสอบ CTC มีการแก้ไขเล็กน้อยจากที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ (Harayama et al., 2000).
การแก้ปัญหาการย้อมสี CTC มี 750 ไมโครเมตร CTC 5 มิลลิ DL-cysteine, 130 มิลลิเมตรโซเดียมคลอไรด์และ
20mm Tris (hydroxymethyl aminomethane) (pH 7.8) จะถูกจัดเตรียม ทันทีก่อนการใช้งาน.
การแก้ปัญหานี้ได้รับการคุ้มครองจากแสงจนการวิเคราะห์ สั้น ๆ , 50 ไมโครลิตรของการระงับสเปิร์มจะได้รับการ
ผสมกับ 50 ไมโครลิตรของการแก้ปัญหาการย้อมสี CTC 30 วินาทีตามด้วยนอกเหนือจาก10μl 12.5% บริษัท เดอะ
paraformaldehyde ใน 0.5 M Tris-HCl (pH 7.4) ขณะที่ตรึง จากนั้น 10 ไมโครลิตรของสเปิร์ม
ระงับการผสมกันได้ดีกับปริมาณที่เท่ากันของการแก้ปัญหา antifade (0.22 M ของ 1,4-
diazabicyclo [2,2,2] ออกเทน; DABCO) ในกลีเซอรอล: พีบีเอส (9: 1) บนสไลด์กล้องจุลทรรศน์ และค่อยๆ
บีบอัดด้วย coverslip สองสไลด์ที่เตรียมจากแต่ละตัวอย่างและเก็บไว้ใน
ที่มืดในเวลาที่ 4 องศาเซลเซียสจนการประเมินผล สองร้อยตัวอสุจิต่อภาพนิ่งจะอยู่ภายใต้กล้อง Nikon
เรืองแสงกล้องจุลทรรศน์ที่ 400X ภายใต้การส่องสีม่วงสีฟ้า (กระตุ้นที่ 400-440 นาโนเมตร
และการปล่อยที่ 470 นาโนเมตร) ชะล้างตัวอสุจิที่ได้รับการจัดให้อยู่ในสามรูปแบบการย้อมสี
การอธิบายโดยเฟรเซอร์, et al (1995) F-รูปแบบเรืองแสงเหนือพื้นที่ทั้งหมดของสเปิร์ม
หัวจะถือว่าเป็น "ไม่ capacitated สเปิร์ม" B-รูปแบบการเรืองแสงใน
ภูมิภาค acrosomal ยกเว้นภูมิภาคโพสต์ acrosomal จะถือว่าเป็น "capacitated
สเปิร์ม" AR-รูปแบบต่ำหรือเรืองแสงเหนือหัวทั้งยกเว้นบางสดใสไม่มี
การห้ามในส่วนของเส้นศูนย์สูตรจะถือว่าเป็น "ปฏิกิริยา acrosome อสุจิ"

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

มันเป็นสีน้ำตาล