3. The dye does not bind to free ar

3. The dye does not bind to free arginine or lysine, or to peptides smaller than about 3000 Da (4,11). Many peptide hormones and other important bioactive peptides fall into the latter category, and the Bradford assay is not suitable for quantifying the amounts of such compounds.
4. The assay technique described here is subject to variation in sensitivity between individual proteins (see Table 2) . Several modifications have been suggested that reduce this variability (5–7,12). Generally, these rely on increasing either the dye content or the pH of the solution. In one variation, adjusting the pH by adding NaOH to the reagent improves the sensitivity of the assay and greatly reduces the variation observed with different proteins (7). (This is presumably caused by an increase the proportion of free dye in the blue form, the ionic species that reacts with protein.) However, the optimum pH is critically dependent on the source and concentration of the dye (see Note 5). Moreover, the modified assay is far more sensitive to interference from detergents in the sample.
Particular care should be taken when measuring the protein content of membrane fractions. The conventional assay consistently underestimates the amount of protein in membrane-rich samples. Pretreatment of the samples with membrane-disrupting agents such as NaOH or detergents may reduce this problem, but the results should be treated with caution (13). A useful alternative is to precipitate protein from the sample using calcium phosphate and remove contaminating lipids (and other interfering substances, see Note 1) by washing with 80% ethanol (9,10).
5. The amount of soluble dye in Coomassie Blue G250 varies considerably between sources, and suppliers’ figures for dye purity are not a reliable estimate of the Coomassie Blue G250 content (14). Generally, Serva Blue G is regarded to have the greatest dye content

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

3. การย้อมไม่ผูกฟรีอาร์จินีนหรือไลซีน หรือเปปไทด์ที่มีขนาดเล็กกว่าประมาณ 3000 ดา (4,11) หลายเพปไทด์ฮอร์โมนและเปปกรรมการกสำคัญอื่น ๆ ที่จัดอยู่ในประเภทหลัง และทดสอบแบรดฟอร์ดไม่เหมาะ quantifying จำนวนสารประกอบดังกล่าว4.เทคนิคการวิเคราะห์ที่อธิบายไว้ที่นี่มีความผันแปรในความไวระหว่างแต่ละโปรตีน (ดูตารางที่ 2) มีการแนะนำแก้ไขหลายที่ลดนี้สำหรับความผันผวน (5 – 7,12) ทั่วไป เหล่านี้อาศัยเพิ่มเนื้อหาย้อมหรือ pH ของการแก้ปัญหา ในรูปแบบหนึ่ง ปรับ pH เพิ่ม NaOH กับรีเอเจนต์เพิ่มความไวของการทดสอบ และลดการเปลี่ยนแปลงที่สังเกต ด้วยโปรตีนแตกต่างกัน (7) มาก (นี้สันนิษฐานว่าเกิดจากการเพิ่มสัดส่วนของสีย้อมฟรีในแบบฟอร์มสีฟ้า พันธุ์ ionic ที่ทำปฏิกิริยากับโปรตีน) อย่างไรก็ตาม pH เหมาะสมเหลือขึ้นอยู่กับแหล่งที่มาและความเข้มข้นของการย้อม (ดูหมายเหตุ 5) นอกจากนี้ วิเคราะห์แก้ไขได้มากความไวต่อสัญญาณรบกวนจากผงซักฟอกจากตัวอย่างควรจะดำเนินการดูแลเฉพาะเมื่อวัดโปรตีนของเยื่อเศษ ทดสอบปกติ underestimates จำนวนโปรตีนในเมมเบรนรวยอย่างสม่ำเสมอ Pretreatment อย่างกับควบเยื่อตัวแทนเช่น NaOH หรือผงซักฟอกอาจลดปัญหานี้ แต่ผลลัพธ์ควรได้รับการปฏิบัติ ด้วยความระมัดระวัง (13) ทางเลือกมีประโยชน์จะ precipitate โปรตีนจากตัวอย่างที่ใช้แคลเซียมฟอสเฟต และลบขยะโครงการ (และสารอื่น ๆ รบกวน ดูหมายเหตุ 1) โดยการซักผ้าด้วยเอทานอล 80% (9,10)5.สีย้อมที่ละลายน้ำใน G250 สี Coomassie จำนวนแตกต่างกันมากระหว่างแหล่ง และตัวเลขของซัพพลายเออร์เพื่อความบริสุทธิ์ของสีย้อมจะไม่ประเมินความน่าเชื่อถือของเนื้อหา G250 สี Coomassie (14) ทั่วไป Serva G สีน้ำเงินถือมีเนื้อหาย้อมมากที่สุด

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

3. สีย้อมไม่ได้ผูกกับอาร์จินีฟรีหรือไลซีนหรือเปปไทด์ที่มีขนาดเล็กกว่าประมาณ 3000 ดา (4,11) เปปไทด์ฮอร์โมนจำนวนมากและเปปไทด์ที่ออกฤทธิ์ทางชีวภาพอื่น ๆ ที่สำคัญตกอยู่ในประเภทหลังและการทดสอบแบรดฟอไม่เหมาะสำหรับปริมาณจำนวนของสารดังกล่าว.
4 เทคนิคการทดสอบที่อธิบายที่นี่อาจมีการเปลี่ยนแปลงในความไวระหว่างโปรตีนของแต่ละบุคคล (ดูตารางที่ 2) การปรับเปลี่ยนหลายคนได้รับการแนะนำที่จะช่วยลดความแปรปรวนนี้ (5-7,12) โดยทั่วไปเหล่านี้ขึ้นอยู่กับการเพิ่มขึ้นทั้งเนื้อหาย้อมหรือค่า pH ของการแก้ปัญหา หนึ่งในรูปแบบการปรับค่า pH โดยการเพิ่ม NaOH กับสารช่วยเพิ่มความไวของการทดสอบและช่วยลดการเปลี่ยนแปลงที่สังเกตกับโปรตีนที่แตกต่างกัน (7) (ซึ่งน่าจะมีสาเหตุมาจากการเพิ่มขึ้นสัดส่วนของสีย้อมฟรีในรูปแบบสีฟ้าชนิดไอออนิกที่ทำปฏิกิริยากับโปรตีน.) อย่างไรก็ตามค่า pH ที่เหมาะสมเป็นอย่างยิ่งขึ้นอยู่กับแหล่งที่มาและความเข้มข้นของสีย้อม (ดูหมายเหตุ 5) นอกจากนี้ยังมีการทดสอบการปรับเปลี่ยนอยู่ไกลมีความไวต่อการรบกวนจากผงซักฟอกในตัวอย่าง.
ดูแลโดยเฉพาะอย่างยิ่งจะต้องดำเนินการเมื่อวัดปริมาณโปรตีนของเศษส่วนเมมเบรน การทดสอบการชุมนุมอย่างต่อเนื่องประเมินปริมาณของโปรตีนในตัวอย่างเมมเบรนที่อุดมไปด้วย การปรับสภาพของกลุ่มตัวอย่างที่มีตัวแทนเยื่อกระทบเช่น NaOH หรือผงซักฟอกอาจจะลดปัญหานี้ แต่ผลที่ควรจะได้รับการปฏิบัติด้วยความระมัดระวัง (13) ทางเลือกที่มีประโยชน์คือการตกตะกอนโปรตีนจากตัวอย่างการใช้แคลเซียมฟอสเฟตและลบปนเปื้อนไขมัน (และสารรบกวนอื่นดูหมายเหตุ 1) โดยการล้างด้วยเอทานอล 80% (9,10).
5 ปริมาณของสีย้อมที่ละลายน้ำได้ใน Coomassie สีน้ำเงิน G250 จะแตกต่างกันมากระหว่างแหล่งที่มาและตัวเลขซัพพลายเออร์เพื่อความบริสุทธิ์สีย้อมไม่ได้ประมาณการที่เชื่อถือได้ของเนื้อหา Coomassie สีน้ำเงิน G250 (14) โดยทั่วไป Serva บลูจีได้รับการยกย่องมีเนื้อหาสีย้อมที่ยิ่งใหญ่ที่สุด

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

3 . ย้อมที่ไม่ได้ผูกกับอาร์ฟรีหรือกรดอะมิโนหรือเปปไทด์ขนาดเล็กกว่าประมาณ 3000 ดา ( 4,11 ) เปปไทด์เปปไทด์ฮอร์โมนและสารอื่น ๆอีกมากมายที่สำคัญตกอยู่ในประเภทหลัง และใน แบรดฟอร์ด ไม่เหมาะสําหรับค่าปริมาณสารดังกล่าว .
4( เทคนิคที่อธิบายไว้ที่นี่อยู่ภายใต้การเปลี่ยนแปลงในความไวระหว่างโปรตีนแต่ละบุคคล ( ดูตารางที่ 2 ) การปรับเปลี่ยนหลายได้รับการแนะนำให้ลดความแปรปรวนนี้ ( 5 ) 7,12 ) โดยทั่วไปเหล่านี้พึ่งพาเพิ่มให้ย้อมเนื้อหาหรือ pH ของสารละลาย ในหนึ่งของค่า pH โดยเติม NaOH ที่ใช้ช่วยเพิ่มความไวของวิธีลดความผันแปรและสังเกตด้วยโปรตีนแตกต่างกัน ( 7 ) ( นี้สันนิษฐานว่าเกิดจากการเพิ่มขึ้นของสัดส่วนสีสีฟ้าฟรีในรูปแบบอิออนชนิดที่ทำปฏิกิริยากับโปรตีน ) อย่างไรก็ตาม พีเอชที่เหมาะสมคือวิกฤตขึ้นอยู่กับแหล่งที่มาและความเข้มข้นของสีย้อม ( ดูหมายเหตุที่ 5 )นอกจากนี้ การปรับเปลี่ยนวิธีไกลมากไวต่อการรบกวนจากผงซักฟอกในตัวอย่าง
เฉพาะดูแลควรเมื่อการวัดปริมาณโปรตีนของเมมเบรน เศษส่วน ( ปกติอย่างต่อเนื่อง underestimates ปริมาณโปรตีนในตัวอย่างมากมายของเยื่อแผ่น ปรับสภาพของตัวอย่างกับแผ่นรบกวนตัวแทนเช่น NaOH หรือผงซักฟอกอาจจะลดปัญหานี้ได้แต่ผลที่ควรปฏิบัติด้วยความระมัดระวัง ( 13 ) ทางเลือกที่เป็นประโยชน์คือการตกตะกอนโปรตีนจากตัวอย่างการใช้แคลเซียมฟอสเฟต และเอาไขมันที่ปนเปื้อน ( และอื่น ๆรบกวน สาร ดูหมายเหตุ 1 ) โดยล้างด้วยเอทานอล 80% ( 9,10 )
5 จํานวนละลายสีเหล่านี้น่าจะเป็น g250 สีฟ้าแตกต่างกันมากระหว่างแหล่งและซัพพลายเออร์ ' ตัวเลขสีความบริสุทธิ์ไม่ประเมินความน่าเชื่อถือของเหล่านี้น่าจะเป็นสีฟ้า g250 เนื้อหา ( 14 ) โดยทั่วไป serva สีฟ้ากรัม ถือว่ามีมากที่สุดเนื้อหา
ย้อม