1. Introduction
Tetrazolium salts (TTZ) discovered in 1894 by Von Pechmann
and Runge have found since the early 1950’s (Altman and Butcher,
1973) broad applications in the demonstration of reducing functions
in chemistry, biochemistry, histo- and cytochemistry and
microbiology (Altman and Butcher, 1973; Jambor, 1954, 1955; Grote
and Kettrup, 1988; Kun and Abood, 1949; Pegram, 1969). The
colorless and water soluble 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride
(TTC), which forms water insoluble red formazan crystals after
reduction, is one of the most studied tetrazolium salts (Bochner and
Savageau, 1977; Mattila, 1987; Pegram, 1969; Tengerdy et al., 1967).
In a similar manner to TTC, tetrazolium violet (TV) has been used
with different bacteria in order to accentuate reducing activity by
simple color observation. TTZ are mainly used in the presence of
high concentrations of bacteria after an enrichment step which
allows very rapid coloration. As previously described (May et al.,
1960; Pegram, 1969; Weinberg, 1953), tetrazolium salts have an
inhibitory effect on bacterial growth. Gram negative bacteria such
as Salmonella spp. are less impacted by the presence of TTZ than
Gram positive bacteria. In order to avoid this toxic effect, TTZ
concentrations need to be reduced significantly in experiments
where low bacterial inocula are used.
Salmonellosis continues to be a major public health problem
worldwide. According to the Center for Disease Control and Prevention
(CDC), 9.4 million Americans suffer from food-borne illness
yearly. One million of these infections are caused by Salmonella spp
(Scallan et al., 2011). Concerning the European Union, the European
Food Safety Authority (EFSA) has reported about 120 000 cases of
human salmonellosis per year between 2007 and 2009 (Pires et al.,
2011).
As such, it is important for food industries to control their
products before release on the market. The food industries have at
their disposal a range of methods for Salmonella detection which
includes the ISO 6579:2002 reference method, which can take four
to five days to obtain a result, aswell as more rapid alternatives using
different technologies such as Polymerase Chain Reaction (PCR)
(Foodproof Salmonella, Merck Millipore Germany), Immunoassays
(Vidas UP Salmonella, bioMerieux France; RIDASCREEN Salmonella,
r-biopharm Germany) and chromogenic media (IBISA, AESFrance; XLD, bioMerieux France). The effectiveness of these rapid
detection methods differ in terms of sensitivity and specificity, and
their performances often depend on the complexity of the food
matrix. These methods can often be costly and require several time
consuming manipulations before sample analysis.We have recently
reported an alternative Salmonella detection method using tetrazolium
salts to reveal the presence of Salmonella during the
enrichment process (Junillon et al., 2012). As a means of reducing the
toxic effect of TTZ in the culture media and enhancing our detection
method, wedecided to investigate the addition of magnesium to the
media. The protective effect of magnesium ions on the bacterial
membrane is well known (Fiil and Branton, 1969; O’Connor et al.,
2009; Strange and Dark, 1962; Strange, 1964). The effect of associating
magnesium to our detection media containing TV, which is
one of the more toxic TTZ, was studied using eight different Salmonella
serotypes. Kinetics studies using a 96-well microplate
format were used to analyze the principal growth parameters (lag :
l; growth rate : m) for the different formulations tested.
1. บทนำเกลือ Tetrazolium (TTZ) ค้นพบใน 1894 โดย Von Pechmannและได้พบ Runge ตั้งแต่ 1950 ก่อน (Altman และเนื้อสัตว์การใช้งานที่กว้างในการสาธิตการลดฟังก์ชัน 1973)ในทางเคมี ชีวเคมี อดีตข - และ cytochemistry และจุลชีววิทยา (Altman และเนื้อสัตว์ 1973 Jambor, 1954, 1955 สัญจรและ Kettrup, 1988 Kun และ Abood, 1949 Pegram, 1969) การไม่มีสี และละลายน้ำ 2,3,5 triphenyltetrazolium คลอไรด์(TTC), ฟอร์มใดน้ำผลึก formazan แดงไม่ละลายน้ำหลังจากลด เป็นหนึ่งในเกลือ tetrazolium ศึกษามากที่สุด (Bochner และSavageau, 1977 Mattila, 1987 Pegram, 1969 Tengerdy et al. 1967)ในลักษณะคล้ายกับ TTC, tetrazolium ม่วง (TV) ที่มีการใช้มีแบคทีเรียต่าง ๆ เพื่อเน้นการลดกิจกรรมโดยสังเกตสีที่เรียบง่าย ส่วนใหญ่ใช้ในประเทศของ TTZความเข้มข้นสูงของแบคทีเรียหลังตกแต่งเป็นขั้นตอนซึ่งช่วยให้สีอย่างรวดเร็วมาก ตามที่เคย อธิบายไว้ (พฤษภาคม et al.,1960 Pegram, 1969 Weinberg, 1953) เกลือ tetrazolium มีการผลยับยั้งแบคทีเรีย กรัมลบแบคทีเรียดังกล่าวเป็นซัลมีน้อยผลกระทบจากการปรากฏตัวของ TTZ กว่าเชื้อแบคทีเรียกรัมบวก เพื่อหลีกเลี่ยงผลกระทบพิษนี้ TTZความเข้มข้นต้องลดลงอย่างมากในการทดลองที่จะใช้ inocula แบคทีเรียต่ำSalmonellosis ยังคงเป็นปัญหาสุขภาพสำคัญของประชาชนทั่วโลก ตามศูนย์ควบคุมและป้องกันโรค(CDC), 9.4 ทรมานจากการเจ็บป่วยที่พัดพาอาหารรายปี หนึ่งล้านของการติดเชื้อเหล่านี้เกิดจากเชื้อ Salmonella spp(Scallan et al. 2011) เกี่ยวกับสหภาพยุโรป ในยุโรปหน่วยงานด้านความปลอดภัยอาหาร (EFSA) ได้รายงานกรณีที่เกี่ยวกับ 120 000มนุษย์ salmonellosis ต่อปีระหว่าง 2007 และ 2009 (Pires et al.,2011)เช่นนี้ มันเป็นสิ่งสำคัญสำหรับอุตสาหกรรมอาหารในการควบคุมของพวกเขาผลิตภัณฑ์ก่อนวางจำหน่ายในตลาด อุตสาหกรรมอาหารมีการกำจัดการสำหรับการตรวจหาเชื้อ Salmonella ซึ่งมี ISO 6579:2002 อ้างอิงวิธีการ ซึ่งสามารถใช้เวลาสี่ไปห้าวันเพื่อให้ได้ผล เช่นเป็นทางเลือกที่เร็วกว่าการใช้เทคโนโลยีที่แตกต่างเช่นปฏิกิริยาลูกโซ่พอลิเมอเรส (PCR)(Foodproof Salmonella เมอร์คเยอรมนี), Immunoassays(Vidas ค่าเชื้อ Salmonella, bioMerieux ฝรั่งเศส RIDASCREEN Salmonellar-biopharm เยอรมนี) และสื่อ chromogenic (IBISA, AESFrance XLD, bioMerieux ฝรั่งเศส) ประสิทธิภาพของเหล่านี้อย่างรวดเร็ววิธีการตรวจสอบแตกต่างกันในแง่ของความไวและความจำเพาะ และผลงานมักจะขึ้นอยู่กับความซับซ้อนของอาหารเมทริกซ์ วิธีการเหล่านี้มักจะสามารถค่าใช้จ่ายสูง และต้องใช้เวลาหลายใช้ manipulations ก่อนวิเคราะห์ตัวอย่าง เรามีเมื่อเร็ว ๆ นี้รายงานวิธีการตรวจหาเชื้อ Salmonella สำรองที่ใช้ tetrazoliumเกลือให้เหมาะกับการปรากฏตัวของ Salmonella ในระหว่างการกระบวนการเพิ่มคุณค่า (Junillon et al. 2012) เป็นวิธีการลดการผลพิษของ TTZ ในสื่อวัฒนธรรมและเสริมสร้างการตรวจสอบของเราwedecided การตรวจสอบการเพิ่มแมกนีเซียม วิธีการสื่อ การป้องกันผลกระทบของแมกนีเซียมไอออนในแบคทีเรียเมมเบรนรู้จักกันดี (แค่และ Branton, 1969 บุก et al.,2009 แปลก และ มืด 1962 แปลก 1964) ผลของการเชื่อมโยงแมกนีเซียมการสื่อการตรวจสอบของเราประกอบด้วยทีวี ซึ่งเป็นTTZ พิษมากขึ้น อย่างใดอย่างหนึ่งเป็นศึกษาใช้แปด Salmonella ที่แตกต่างกันserotypes การศึกษาจลนพลศาสตร์ใช้เครื่อง microplate 96 หลุมใช้รูปแบบการวิเคราะห์พารามิเตอร์หลักเจริญเติบโต (ล่าช้า:l อัตราการเติบโต: m) สำหรับสูตรต่าง ๆ ทดสอบ
การแปล กรุณารอสักครู่..

1. บทนำ
เกลือ tetrazolium (TTZ) ค้นพบในปี 1894 โดยฟอน Pechmann
และ Runge ได้พบตั้งแต่ต้นปี 1950 (อัลท์แมนและเนื้อ
1973) การใช้งานในวงกว้างในการสาธิตของการลดฟังก์ชั่น
ในทางเคมีชีวเคมีและ histo- cytochemistry และ
จุลชีววิทยา (อัลท์แมน และเนื้อ 1973; Jambor 1954 1955; Grote
และ Kettrup 1988; Kun และ Abood 1949; Pegram, 1969)
ไม่มีสีและละลายน้ำ 2,3,5-triphenyltetrazolium คลอไรด์
(TTC) ซึ่งรูปแบบที่ไม่ละลายน้ำผลึก formazan สีแดงหลังจากที่
ลดลงเป็นหนึ่งในเกลือ tetrazolium ศึกษามากที่สุด (Bochner และ
Savageau 1977; Mattila 1987; Pegram 1969; Tengerdy et al., 1967).
ในลักษณะที่คล้ายคลึงกับ TTC, tetrazolium สีม่วง (TV) ได้ถูกนำมาใช้
กับแบคทีเรียที่แตกต่างกันเพื่อเน้นกิจกรรมการลดโดย
การสังเกตสีที่เรียบง่าย TTZ ใช้เป็นหลักในการปรากฏตัวของ
ความเข้มข้นสูงของแบคทีเรียหลังจากขั้นตอนการเพิ่มปริมาณซึ่ง
จะช่วยให้สีอย่างรวดเร็วมาก ตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ (พฤษภาคม, et al.,
1960; Pegram 1969; Weinberg, 1953), เกลือ tetrazolium มี
ผลยับยั้งการเจริญเติบโตของแบคทีเรีย แบคทีเรียแกรมลบดังกล่าว
เป็นเชื้อ Salmonella spp ได้รับผลกระทบน้อยลงโดยการปรากฏตัวของ TTZ กว่า
แบคทีเรียแกรมบวก เพื่อที่จะหลีกเลี่ยงผลกระทบที่เป็นพิษนี้ TTZ
ความเข้มข้นจะต้องมีการลดลงอย่างมีนัยสำคัญในการทดลอง
ที่ inocula แบคทีเรียต่ำจะถูกใช้.
Salmonellosis ยังคงเป็นปัญหาสาธารณสุขที่สำคัญ
ทั่วโลก ตามที่ศูนย์ควบคุมและป้องกันโรค
(CDC) 9.4 ล้านอเมริกันทรมานจากการเจ็บป่วยที่เกิดจากอาหาร
เป็นประจำทุกปี หนึ่งล้านของการติดเชื้อเหล่านี้เกิดจากเชื้อ Salmonella spp
(Scallan et al. 2011) เกี่ยวกับสหภาพยุโรปยุโรป
อาหารปลอดภัย (EFSA) ได้รายงานประมาณ 120 000 กรณีของ
เชื้อ Salmonella มนุษย์ต่อปีระหว่างปี 2007 และ 2009 (Pires et al.,
2011).
เช่นนี้มันเป็นสิ่งสำคัญสำหรับอุตสาหกรรมอาหารเพื่อการควบคุมของพวกเขา
ผลิตภัณฑ์ ก่อนที่จะปล่อยในตลาด อุตสาหกรรมอาหารมี
การกำจัดของพวกเขาช่วงของวิธีการตรวจหาเชื้อ Salmonella ซึ่ง
รวมถึงมาตรฐาน ISO 6579: 2002 ที่วิธีการอ้างอิงซึ่งสามารถเวลาสี่
ถึงห้าวันที่จะได้รับผลให้เช่นกันเป็นทางเลือกมากขึ้นอย่างรวดเร็วโดยใช้
เทคโนโลยีที่แตกต่างกันเช่น (Polymerase Chain Reaction PCR)
? (foodproof Salmonella, เมอร์คเยอรมนี) Immunoassays
(Vidas UP Salmonella, bioMerieux ฝรั่งเศส? RIDASCREEN Salmonella,
R-Biopharm เยอรมนี) และสื่อ chromogenic (IBISA, AESFrance; XLD, bioMerieux ฝรั่งเศส) ประสิทธิผลของเหล่านี้อย่างรวดเร็ว
วิธีการตรวจสอบแตกต่างกันในแง่ของความไวและความจำเพาะและ
การแสดงของพวกเขามักจะขึ้นอยู่กับความซับซ้อนของอาหาร
เมทริกซ์ วิธีการเหล่านี้มักจะมีราคาแพงและต้องใช้เวลาหลาย
กิจวัตรก่อน analysis.We ตัวอย่างบริโภคเมื่อเร็ว ๆ นี้มี
รายงานวิธีการตรวจสอบเชื้อ Salmonella ทางเลือกโดยใช้ tetrazolium
เกลือเผยให้เห็นการปรากฏตัวของเชื้อ Salmonella ในระหว่าง
ขั้นตอนการเพิ่มปริมาณ (Junillon et al., 2012) เป็นวิธีการลดความ
เป็นพิษของ TTZ ในสื่อวัฒนธรรมและเพิ่มการตรวจสอบของเรา
วิธี wedecided การตรวจสอบนอกเหนือจากแมกนีเซียมที่
สื่อ ป้องกันผลกระทบของแมกนีเซียมไอออนในแบคทีเรีย
เมมเบรนที่รู้จักกันดี (Fiil และ Branton 1969; โอคอนเนอร์, et al.,
2009; แปลกและมืด 1962; แปลก 1964) ผลของการเชื่อมโยง
แมกนีเซียมของเราสื่อทีวีที่มีการตรวจสอบซึ่งเป็น
หนึ่งใน TTZ เป็นพิษมากขึ้นได้รับการศึกษาโดยใช้แปด Salmonella ที่แตกต่าง
สายพันธุ์ การศึกษาจลนพลศาสตร์ใช้ microplate 96 หลุม
รูปแบบถูกนำมาใช้ในการวิเคราะห์พารามิเตอร์หลักการเจริญเติบโต (ล่าช้า:
l; อัตราการเจริญเติบโต: m) สำหรับสูตรที่แตกต่างผ่านการทดสอบ
การแปล กรุณารอสักครู่..

1 . แนะนำเกลือ tetrazolium ( ttz ) ค้นพบใน 1894 โดยวอนเพกมานกับ Runge ได้พบตั้งแต่ต้นทศวรรษ 1950 ( อัลแมนบุชเชอร์1973 ) กว้างโปรแกรมประยุกต์ในการสาธิตการลดฟังก์ชันเคมี , ชีวเคมี , histo - cytochemistry และจุลชีววิทยา ( อัลแมนเขียง , 1973 ; jambor 2497 1955 ; โกรดิและ kettrup , 1988 ; คุง และ abood 1949 ; เพแกรม , 1969 ) ที่และไม่มีสีละลายน้ำ 2,3,5-triphenyltetrazolium คลอไรด์( TTC ) ซึ่งรูปแบบเหลือเชื่อหลังไม่ละลายน้ำแดงลดเป็นหนึ่งในส่วนใหญ่การศึกษา tetrazolium และเกลือ ( บักเนอร์savageau , 1977 ; mattila , 1987 ; เพแกรม 1969 ; tengerdy et al . , 1967 )ในลักษณะที่คล้ายคลึงกับ TTC tetrazolium ม่วง ( TV ) ได้ถูกใช้ด้วยแบคทีเรียที่แตกต่างกันเพื่อเน้นการลดกิจกรรมโดยสังเกตสีง่าย ttz ส่วนใหญ่ใช้ในการแสดงตนของความเข้มข้นสูงของแบคทีเรียหลังการก้าวที่ช่วยให้รวดเร็วมากสี ตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ ( อาจ et al . ,1960 ; เพแกรม 1969 ; ไวน์เบิร์ก , 1953 ) , เกลือ tetrazolium มีผลยับยั้งการเจริญเติบโตของเชื้อแบคทีเรีย แบคทีเรียแกรมลบเช่นเป็น ซัลโมเนลลา น้อยที่ได้รับผลกระทบจากการปรากฏตัวของ ttz มากกว่าแบคทีเรียกรัมบวก เพื่อหลีกเลี่ยงปัญหานี้ ttz ผลเป็นพิษความเข้มข้นต้องลดลงอย่างมาก ในการทดลองที่ inocula แบคทีเรียน้อยจะใช้ซาลโมเนลโลซีสยังคงเป็นปัญหาทางสาธารณสุขทั่วโลก ตามที่ศูนย์ควบคุมและป้องกันโรค( CDC ) , 9.4 ล้านคนอเมริกันทรมานจากโรคอาหาร borneรายปี หนึ่งล้านของเชื้อเหล่านี้จะเกิดจากเชื้อ Salmonella spp( scallan et al . , 2011 ) ในสหภาพยุโรป , ยุโรปเจ้าหน้าที่ความปลอดภัยอาหาร ( efsa ) ได้รายงานเกี่ยวกับ 120 000 รายมนุษย์ซัลโมเนลล่าต่อปีระหว่าง 2007 และ 2009 ( เปเรซ et al . ,2011 )เช่น , มันเป็นสิ่งสำคัญสำหรับอุตสาหกรรมอาหารเพื่อการควบคุมของพวกเขาผลิตภัณฑ์ก่อนปล่อยในตลาด อุตสาหกรรมอาหารที่จัดช่วงของวิธีการของ Salmonella ซึ่งพวกเขารวมถึง ISO 6579:2002 วิธีมาตรฐาน ซึ่งสามารถใช้สี่5 วันเพื่อให้ได้ผลและเพิ่มทางเลือกการใช้อย่างรวดเร็วเทคโนโลยีที่แตกต่างกัน เช่น เทคนิคพีซีอาร์ ( PCR )( foodproof Salmonella , เมอร์คมิลลิพอร์ ( เยอรมนี )( vidas ขึ้นเชื้อ Salmonella biomerieux ridascreen Salmonella , ฝรั่งเศสr-biopharm เยอรมนี ) และการสนทนาผ่านข้อความโต้ตอบแบบทันทีสื่อ ( ibisa aesfrance xld biomerieux ฝรั่งเศส , ; , ) ประสิทธิผลของเหล่านี้อย่างรวดเร็ววิธีการค้นหาแตกต่างกันในแง่ของความไวและความจำเพาะและการแสดงของพวกเขามักจะขึ้นอยู่กับความซับซ้อนของอาหารเมทริกซ์ วิธีการเหล่านี้มักจะสามารถเป็นบทเรียนราคาแพง และต้องใช้หลายเวลาการบริโภค manipulations ก่อนการวิเคราะห์ตัวอย่าง เรามีเมื่อเร็ว ๆ นี้รายงานทางเลือกของ Salmonella โดยใช้ tetrazoliumเกลือที่จะเปิดเผยการปรากฏตัวของ Salmonella ในกระบวนการเสริมสมรรถนะ ( junillon et al . , 2012 ) เป็นวิธีการลดพิษของ ttz ในวัฒนธรรมสื่อและการตรวจสอบของเราวิธี wedecided ศึกษาเพิ่มแมกนีเซียมกับสื่อ การศึกษาฤทธิ์ของแมกนีเซียมไอออนในแบคทีเรียเยื่อที่เป็นที่รู้จักกันดี ( และ fiil branton 1969 ; O " Connor et al . ,2009 ; แปลกและเข้ม , 1962 ; แปลก , 1964 ) ผลของการประกอบแมกนีเซียมของเราตรวจจับสื่อที่มีทีวี ซึ่งเป็นหนึ่งใน ttz เป็นพิษมากขึ้น ศึกษาใช้แปดต่างเชื้อ3 . การศึกษาจลนศาสตร์การใช้ 96 ดีพื้นที่ภาคเหนือของประเทศไทยรูปแบบวิเคราะห์พารามิเตอร์การเติบโตหลัก ( ล่าช้า :ลิตร อัตราการขยายตัว : m ) สูตรที่แตกต่างกันการทดสอบ
การแปล กรุณารอสักครู่..
