2.2. Establishment of primary cultu

2.2. Establishment of primary cultures
Seeds of P. alata were surface-sterilized with 1.0% (w/v) sodium
hypoclorite for 20 min with agitation and washed three times
with sterile deionized water. Disinfected seeds were distributed
between two layers of sterile filter paper soaked with 2.5% gibberellic
acid (GA3) for 5 days. After this period, the seeds were
mechanically scarified with a scalpel, and inoculated on ½ MS
medium (half-strength of MS salts, MS vitamins, and 1.5% (w/v)
sucrose) solidified with 0.7% agar (Merck), followed by incubation
in a germinator with a photoperiod of 8 h using a total irradiance of
28.7 mol m−2 s−1 provided by cool-white fluorescent lamps and
alternate temperatures (30 ◦C for 8 h and 20 ◦C for 16 h) for 60 days
(Osipi and Nakagawa, 2005). In order to obtain primary cultures,
shoot apices and nodal segments were excised from 30-day old
seedlings, inoculated on ½ MSM medium (half-strength of MSM
salts, MS vitamins and 1.5% (w/v) sucrose) solidified with 0.7% agar,
and incubated under a 16-h photoperiod.
In order to optimize shoot elongation, stem segments (2.0 cm)
containing two nodes were excised from plants obtained 60 days
after initiation of primary cultures, and inoculated on B5, ½ B5
or ½ MSM medium supplemented with 5 or 10% coconut water
(Sigma–AldrichChemicalCo.). Threeflasks containing four explants
each were cultured per treatment and maintained under standard
culture conditions for 30 days. Experiments were repeated twice.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.2. การจัดตั้งวัฒนธรรมหลักเมล็ดของ P. สมุนไพรชุมเห็ดเทศถูกฆ่าเชื้อพื้นผิว ด้วยโซเดียม 1.0% (w/v)hypoclorite 20 นาทีกับความปั่นป่วนและล้างสามเวลาด้วยน้ำจุหมัน เมล็ดฆ่าถูกแจกจ่ายระหว่างสองชั้นของกระดาษกรองปลอดเชื้อแช่กับ gibberellic 2.5%กรด (GA3) 5 วัน หลังจากช่วงเวลานี้ เมล็ดได้กลไก scarified กับ scalpel เป็น และ inoculated บน½ MSปานกลาง (แรงครึ่งของเกลือชนิด MS, MS วิตามิน และ 1.5% (w/v)ซูโครส) ละลายวุ้น 0.7% (Merck), ตาม ด้วยกกไข่ใน germinator กับช่วงแสง 8 ชั่วโมงใช้ irradiance ที่รวมของs−1 m−2 โมล 28.7 โดยฟลูออเรสเซนต์สีขาวเย็น และอุณหภูมิอื่น (30 ◦C สำหรับ 8 ชม.) และ 20 ◦C สำหรับ 16 ชม. 60 วัน(Osipi และนาคากาวา 2005) เพื่อให้ได้หลักวัฒนธรรมยิง apices และเซ็กเมนต์ดังถูกสรรพสามิตจาก 30 - วันเก่าต้นกล้า inoculated บนสื่อ MSM ½ (แรงครึ่งของ MSMเกลือ วิตามิน MS และ 1.5% (w/v) ซูโครส) ละลายวุ้น 0.7%และรับการกกใต้ช่วงแสง 16-hการเพิ่มประสิทธิภาพการยืดตัวยิง ต้นกำเนิดส่วน (2.0 cm)ที่มีสองโหนถูกสรรพสามิตจากพืชได้ 60 วันหลังจากเริ่มต้นของ วัฒนธรรมหลัก และ inoculated ใน B5 ½ B5หรือ½ MSM ปานกลางเสริม ด้วยน้ำมะพร้าว 5 หรือ 10%(Sigma – AldrichChemicalCo) Threeflasks ที่ประกอบด้วยสี่เฌลแต่ละถูกล้างต่อการรักษา และรักษามาตรฐานวัฒนธรรมเงื่อนไข 30 วัน การทดลองซ้ำกันสองครั้ง

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.2 สถานประกอบการของวัฒนธรรมหลัก
เมล็ดชุมเห็ดเทศพีถูกพื้นผิวที่ผ่านการฆ่าเชื้อด้วย 1.0% (w / v) โซเดียม
hypoclorite สำหรับ 20 นาทีกับการกวนและล้างสามครั้ง
ด้วยน้ำปราศจากไอออนผ่านการฆ่าเชื้อ เมล็ดฆ่าเชื้อกระจาย
ระหว่างสองชั้นของกระดาษกรองผ่านการฆ่าเชื้อแช่ด้วย Gibberellic 2.5%
กรด (GA3) เป็นเวลา 5 วัน หลังจากช่วงเวลานี้เมล็ดพันธุ์ที่ถูก
scarified กลด้วยมีดผ่าตัดและเชื้อบน½ MS
กลาง (ครึ่งหนึ่งของความแข็งแรงของเกลือ MS, วิตามิน MS และ 1.5% (w / v)
ซูโครส) ผลึกด้วย% วุ้น (เมอร์ค) 0.7 ตาม โดยการบ่ม
ใน Germinator กับแสง 8 ชั่วโมงโดยใช้รังสีรวมของ
28.7 mol M-2 s-1 ให้โดยเย็นสีขาวหลอดและ
อุณหภูมิสลับ (30 ◦Cเป็นเวลา 8 ชั่วโมงและ 20 ◦Cเป็นเวลา 16 ชั่วโมง) สำหรับ 60 วัน
(Osipi และนาคางาวะ, 2005) เพื่อให้ได้รับวัฒนธรรมหลัก
ยิง apices และกลุ่มสำคัญที่ถูกตัดจากเก่า 30 วัน
ต้นกล้าเชื้อในสื่อ MSM ½ (ครึ่งแข็งแรงของชายรักชาย
เกลือ, วิตามิน MS และ 1.5% (w / v) ซูโครส) ผลึกกับ 0.7% วุ้น
และบ่มภายใต้ 16-H แสง.
เพื่อเพิ่มประสิทธิภาพการยืดตัวยิงลำต้นส่วน (2.0 ซม.)
มีสองโหนดถูกตัดจากพืชที่ได้รับ 60 วัน
หลังจากการเริ่มต้นของวัฒนธรรมหลักและเชื้อใน B5, ½ B5
หรือ½กลุ่มชายรักชาย เติมน้ำมะพร้าว 5 หรือ 10%
(Sigma-AldrichChemicalCo.) Threeflasks มีสี่ชิ้น
แต่ละถูกเพาะเลี้ยงต่อการรักษาและการบำรุงรักษาภายใต้มาตรฐาน
เงื่อนไขวัฒนธรรมเป็นเวลา 30 วัน การทดลองซ้ำกันสองครั้ง

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.2 . สถานประกอบการของวัฒนธรรมหลักเมล็ดพันธุ์แห่งหน้า ชุมเห็ดเทศ ฆ่าเชื้อที่ผิวด้วย 1% ( w / v ) โซเดียมhypoclorite 20 นาทีด้วยการกวน และล้าง 3 ครั้งเป็นหมันคล้ายเนื้อเยื่อประสานกับน้ำ ฆ่าเชื้อเมล็ดกระจายระหว่างสองชั้นของปลอดเชื้อกรองกระดาษที่แช่ด้วย 2.5% จิบเบอเรลลิคacid ( GA3 ) เป็นเวลา 5 วัน หลังจากระยะเวลานี้ เมล็ดการ scarified กับมีดผ่าตัด , และหัวเชื้อใน½ MSปานกลาง ( แรงครึ่งหนึ่งของเกลือ MS , MS วิตามินและ 1.5 % ( w / v )ซูโครส ) แข็งกับ 0.7% agar ( Merck ) ตามระยะเวลาในช่วง germinator ด้วย 8 H ที่ใช้ทั้งหมดดังกล่าวของ28.7 mol m − 2 s − 1 โดยเย็นสีขาวเรืองแสงและโคมไฟอุณหภูมิสลับ 30 ◦ C 8 H และ 20 ◦ C 16 H ) 60 วัน( osipi กับ Nakagawa , 2005 ) เพื่อรับวัฒนธรรมหลักส่วนข้อ apices ยิงและถูกตัดจากเดิม 30 วันดำนา , ปลูกบน MSM ½ขนาดกลาง ( แรงครึ่งหนึ่งของชายรักชายเกลือ , นางสาววิตามินและ 1.5 % ( w / v ) ซูโครส ) แข็งกับ 0.7% วุ้นโดยภายใต้ 16-h แสง .เพื่อเพิ่มประสิทธิภาพการยิง การยืดตัว ส่วนก้าน ( 2.0 ซม. )ที่ประกอบด้วยสองโหนดถูกตัดจากพืชได้ 60 วันหลังจากการเริ่มต้นของวัฒนธรรมหลัก และหัวเชื้อใน B5 , ½ B5หรือ MSM ½เติม 5 หรือ 10 % มะพร้าวน้ำ( Sigma ) aldrichchemicalco . ) threeflasks ที่มีสี่อาหารแต่ละคนถูกเลี้ยงต่อการดูแลรักษาตามมาตรฐานสภาพเพาะเลี้ยงเป็นเวลา 30 วัน ทดลองซ้ำ 2 ครั้ง