To get one step closer to our final

To get one step closer to our final approach, we expressed His-GFP directly on Ni-NTA coated iRIf-slides. Therefore, we pipetted 15 µL of our DiaMIX containing the His-GFP DNA template and the DiaMIX without DNA as a negative control on a slide. The slides were incubated for 3 h at 37°C and additionally overnight at 4°C. We performed an iRIf measurement where biotinylated anti-GFP was flushed over the slide, followed by Cy5-labeled streptavidin. In the iRIf, the signal was really weak. Nonetheless, the strep-Cy5 bound to the biotinylated anti-GFP and therefore enabled a detection via a microarray scanner optimized for the detection of Cy-5. The result of the microarray scan at 635 nm is shown in figure 10. We were able to detect small amounts of cell-free expressed His-GFP that diffused to the glass surface and bound to the Ni-NTA with the microarray scanner. The weak binding shows that this part of our systems still needs some optimization.



In-chamber Expression of GFP
The last step towards a final application in the DiaCHIP is the performance of a cell-free expression reaction between the silicone and the glass slide of the microfluidic chamber. Immobilized, linear DNA on the PDMS slide should be transcribed and translated into proteins. Due to time constraints, we were not able to optimize this process. Nonetheless, our initial results can be found on this results page!.

Cell-free Expression of Disease-Specific Antigens

Sadly, we could not show binding of the respective antibodies/serum with the iRIf measurement device. This could be due to folding problems of the antigen during cell-free expression. Moreover, the concentration of expressed C. tetani antigen might not have been high enough to be detected by iRIf measurements.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

จะได้รับหนึ่งขั้นการสุดท้ายของเรา เราแสดงพระ GFP บน Ni NTA เคลือบ iRIf-ภาพนิ่ง ดังนั้น เรา pipetted 15 µL ของ DiaMIX ของเราที่ประกอบด้วยแม่แบบดีเอ็นเอของเขา GFP และ DiaMIX โดย DNA เป็นตัวควบคุมที่เป็นค่าลบบนภาพนิ่ง ภาพนิ่งที่ได้รับการกก 3 ชั่วโมงที่อุณหภูมิ 37° C และนอกจากนี้ข้ามคืนที่อุณหภูมิ 4 องศาเซลเซียส เราทำการวัด iRIf ที่ biotinylated ต่อต้าน-GFP ถูก flushed ผ่านภาพนิ่ง ตาม ด้วยชื่อ Cy5 streptavidin ใน iRIf สัญญาณเป็นอ่อนแอจริง ๆ กระนั้น strep-Cy5 ผูกพันกับ biotinylated ต่อต้าน-GFP และเปิดใช้งานตรวจจับผ่านสแกนเนอร์ microarray เหมาะสำหรับการตรวจสอบของ Cy-5 ดังนั้น ผลลัพธ์ของการสแกน microarray ที่ 635 nm จะปรากฏในรูป 10 เราก็สามารถตรวจพบเซลล์ฟรีแสดงพระ-GFP ที่กระจายไปยังพื้นผิวของแก้ว และผูกไว้กับ Ni-NTA กับสแกนเนอร์ microarray จำนวนเล็กน้อย การรวมอ่อนแอแสดงว่า นี้เป็นส่วนหนึ่งของระบบของเรายังต้องการเพิ่มประสิทธิภาพบางอย่างนิพจน์ในหอของ GFPขั้นตอนสุดท้ายสู่การประยุกต์ใช้ขั้นสุดท้ายใน DiaCHIP มีประสิทธิภาพของปฏิกิริยาเซลล์ฟรีนิพจน์ระหว่างซิลิโคนและเลื่อนกระจกของห้อง microfluidic ดีเอ็นเอแบบตรึง เชิงเส้นบนภาพนิ่ง PDMS ควรจะทับศัพท์ในรูป และแปลเป็นโปรตีน เนื่องจากเวลาจำกัด เราก็ไม่สามารถที่จะเพิ่มประสิทธิภาพของกระบวนการนี้ กระนั้น ผลของเราเริ่มต้นได้ในหน้าผลลัพธ์นี้เซลล์ฟรีการแสดงออกของแอนติเจนของโรคเฉพาะเศร้า เราไม่สามารถแสดงรวมของแอนติบอดี/ซีรั่มเกี่ยวข้องกับอุปกรณ์การวัด iRIf อาจเนื่องจากพับปัญหาของ antigen ที่ระหว่างนิพจน์เซลล์ฟรี นอกจากนี้ ความเข้มข้นของ antigen แสดง C. tetani อาจไม่ได้สูงพอที่จะตรวจพบ โดยการวัด iRIf

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ที่จะได้รับหนึ่งขั้นตอนที่ใกล้ชิดกับวิธีสุดท้ายของเราเราแสดง His-GFP โดยตรงบน Ni-NTA เคลือบ iRIf ภาพนิ่ง ดังนั้นเราจึงปิเปต 15 ไมโครลิตรของ DiaMIX เราที่มีแม่แบบของเขา-GFP ดีเอ็นเอและ DiaMIX โดยไม่ต้องดีเอ็นเอเป็นตัวควบคุมเชิงลบเกี่ยวกับภาพนิ่ง สไลด์ถูกบ่มเป็นเวลา 3 ชั่วโมงที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสและยังค้างคืนที่ 4 องศาเซลเซียส เราดำเนินการวัด iRIf ที่ biotinylated ป้องกัน GFP ถูกล้างมากกว่าภาพนิ่งตามด้วยสเต Cy5 ติดฉลาก ใน iRIf สัญญาณอ่อนแอจริงๆ อย่างไรก็ตามอักเสบ-Cy5 ผูกไว้กับ biotinylated ป้องกัน GFP และดังนั้นจึงเปิดใช้งานการตรวจสอบผ่านสแกนเนอร์ microarray ที่ดีที่สุดสำหรับการตรวจหาภาวะ-5 ผลมาจากการสแกน microarray ที่ 635 นาโนเมตรจะแสดงในรูปที่ 10 เราก็สามารถที่จะตรวจสอบจำนวนเงินที่เล็ก ๆ ของมือถือฟรีแสดงของเขา-GFP ที่กระจายไปยังพื้นผิวกระจกและผูกไว้กับ Ni-NTA กับสแกนเนอร์ microarray แสดงให้เห็นว่ามีผลผูกพันที่อ่อนแอว่าเป็นส่วนหนึ่งของระบบของเรานี้ยังคงต้องการเพิ่มประสิทธิภาพบาง.



ในห้องแสดงออกของ GFP
ขั้นตอนสุดท้ายไปสู่การประยุกต์ใช้ในขั้นสุดท้าย DiaCHIP คือประสิทธิภาพการทำงานของปฏิกิริยาการแสดงออกมือถือฟรีระหว่างซิลิโคนและกระจกสไลด์ของ ห้อง microfluidic ตรึงดีเอ็นเอเชิงเส้นบนสไลด์ PDMS ควรได้รับการคัดลอกและแปลเป็นโปรตีน เนื่องจากข้อ จำกัด ของเวลาที่เราไม่สามารถที่จะเพิ่มประสิทธิภาพของกระบวนการนี้ อย่างไรก็ตามผลเบื้องต้นของเราสามารถพบได้ในผลนี้หน้า !.

Expression มือถือฟรีของแอนติเจนเฉพาะโรค

น่าเศร้าที่เราไม่สามารถแสดงผลผูกพันของแอนติบอดีที่เกี่ยวข้อง / ซีรั่มกับอุปกรณ์วัด iRIf ซึ่งอาจจะเกิดจากการพับปัญหาของแอนติเจนในระหว่างการแสดงออกมือถือฟรี นอกจากนี้ความเข้มข้นของการแสดงออกซีแอนติเจน tetani อาจจะไม่ได้รับสูงพอที่จะตรวจพบได้โดยการวัด iRIf

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ที่จะได้รับหนึ่งขั้นใกล้วิธีสุดท้ายของเรา เราแสดง GFP ของเขาโดยตรง ผมค้าขาย เคลือบ irif สไลด์ ดังนั้น เรา pipetted 15 µ l diamix ของเราที่มี GFP ดีเอ็นเอแม่แบบของเขาและ diamix ไม่มี DNA เป็นตัวควบคุมเชิงลบเกี่ยวกับภาพนิ่ง ภาพนิ่งถูกบ่มที่ 37 ° C เป็นเวลา 3 ชั่วโมง และนอกจากนี้ ค้างคืนที่ 4 องศา เราทำการ irif การวัดที่ต่อต้านก็หน้าแดงกว่าไล GFP สไลด์ ตามด้วย cy5 ป้าย streptavidin . ใน irif สัญญาณอ่อนมาก อย่างไรก็ตาม strep-cy5 ผูกพันกับไล GFP และดังนั้นจึงช่วยป้องกันการตรวจจับผ่าน microarray สแกนเนอร์ที่ดีที่สุดสำหรับการตรวจหา cy-5 . ผลของ microarray สแกนที่ 635 nm จะแสดงในรูปที่ 10 เราสามารถตรวจสอบจำนวนเงินขนาดเล็กของการสังเคราะห์ที่แสดงออกของเขา GFP ที่มีพื้นผิวแก้ว และผูกไว้กับผมค้าขายกับ microarray สแกนเนอร์ อ่อนแอผูกพันแสดงให้เห็นว่านี้เป็นส่วนหนึ่งของระบบของเรายังต้องการเพิ่มประสิทธิภาพการแสดงออกของ GFP ในแชมเบอร์สุดท้าย ก้าวไปสู่โปรแกรมสุดท้ายใน diachip คือการแสดงสีหน้าของการสังเคราะห์ปฏิกิริยาระหว่างซิลิโคนและกระจกสไลด์ของหอการค้าไมโครฟลูอิดิก . ตรึง , ดีเอ็นเอบนเส้นโดยสไลด์ควรคัดลอกและแปลเป็นโปรตีน เนื่องจากข้อจำกัดด้านเวลา เราไม่สามารถที่จะปรับกระบวนการนี้ กระนั้น ผลลัพธ์ของเราเริ่มต้นสามารถพบได้ในหน้าผล ! .การแสดงออกของแอนติเจนเฉพาะโรคเซลล์ฟรีน่าเสียดายที่เราไม่สามารถแสดงข้อผูกพันของตน ) / เซรั่มกับ irif การวัดอุปกรณ์ นี้อาจจะเนื่องจากปัญหาการพับของการสังเคราะห์แอนติเจนในการแสดงออก . นอกจากนี้ความเข้มข้นของแอนติเจนที่แสดงซีเตตานิ อาจจะไม่ได้สูงมากพอที่จะตรวจพบโดยการวัด irif .