Blood samples (six fish at a time i

Blood samples (six fish at a time in each group) from the
caudal vein were collected from one of the replicate tanks
in each treatment after 30 days of post-challenged with A.
hydrophila. Heparin was used as an anticoagulant. Individual
fish was sampled only once to avoid the influence on
the assays due to multiple bleeding and handling stress on
the fish. For assay, leucocytes were separated from each
blood sample by density-gradient centrifugation (Rowley,
1990). One millilitre of histopaque 1.119 (Sigma) containing
100 ml of bacto-haemagglutination buffer, pH 7.3
(Difco, USA), was dispensed into siliconised tubes and
added to 1 ml of a mixture of 1.077 density histopaque
haemagglutination buffer and 1 ml of blood was carefully
layered on the top. The tubes were centrifuged at 700 g
for 15 min at 4 8C. After centrifugation, plasma was
collected and stored at 20 8C until used for analysis.
Separated leucocytes were gently removed and dispensed
into siliconised tubes, containing phenol red free HBSS
2 R. Harikrishnan et al. / Veterinary Parasitology 170 (2010) 1–7
(Sigma). Cells were then washed twice in HBSS and
adjusted to 1 107 viable cells ml1
.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

เลือดตัวอย่างหกปลาเวลาในแต่ละกลุ่ม) จากการหลอดเลือดดำครีบถูกเก็บรวบรวมจากถัง replicate อย่างใดอย่างหนึ่งในแต่ละหลังจาก 30 วันของหลังที่ท้าทายกับก.hydrophila เฮถูกใช้เป็นสารกันเลือดแข็งตัว แต่ละบุคคลปลาเป็นตัวอย่างเพียงครั้งเดียวเพื่อหลีกเลี่ยงอิทธิพลในassays เนื่องจากเลือดออกและการจัดการความเครียดในหลายปลา สำหรับทดสอบ เม็ดเลือดขาวถูกแยกออกจากกันตัวอย่างเลือด โดยการหมุนเหวี่ยงการไล่ระดับความหนาแน่น (ลีย์1990) . หนึ่ง millilitre ของ histopaque หวัง 1.119 (Sigma) ที่ประกอบด้วย100 มิลลิลิตร bacto haemagglutination บัฟเฟอร์ pH 7.3(Difco สหรัฐอเมริกา), ถูกฉีดลงในหลอด siliconised และลง 1 มล.ส่วนผสมของความหนาแน่น 1.077 histopaquehaemagglutination บัฟเฟอร์และ 1 มิลลิลิตรของเลือดเป็นอย่างดีชั้นด้านบน ได้จากหลอดที่ 700 กรัม15 นาทีที่ 4 8C. หลังจากหมุนเหวี่ยง เป็นพลาสม่ารวบรวม และเก็บไว้ที่ 20 8C จนใช้สำหรับวิเคราะห์แยกเม็ดเลือดขาวถูกลบออก และจ่ายเบา ๆลงในหลอด siliconised ที่ประกอบด้วยสีแดงฟีนอลฟรี HBSS2 R. Harikrishnan et al. / สัตวแพทย์ปรสิตวิทยา 170 (2010) 1 – 7(Sigma) เซลล์ถูกล้างแล้วสองครั้งใน HBSS และปรับให้เซลล์ทำงานได้ที่ 1 107 ml1.

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ตัวอย่างเลือด (หกปลาในเวลานั้นในแต่ละกลุ่ม) จาก
หลอดเลือดดำหางที่ถูกเก็บรวบรวมจากหนึ่งในถังซ้ำ
ในการรักษาแต่ละครั้งหลังจาก 30 วันของการโพสต์ท้าทายกับ A.
hydrophila เฮถูกใช้เป็นสารกันเลือดแข็ง บุคคล
ปลาเป็นตัวอย่างเพียงครั้งเดียวเพื่อหลีกเลี่ยงอิทธิพลต่อ
การตรวจเนื่องจากมีเลือดออกหลายและความเครียดในการจัดการเกี่ยวกับ
ปลา สำหรับการทดสอบเม็ดเลือดขาวถูกแยกออกจากกัน
ตัวอย่างเลือดโดยความหนาแน่นลาดหมุนเหวี่ยง (ลีย์,
1990) หนึ่งมิลลิลิตร histopaque 1.119 (ซิกม่า) ที่มี
100 มล. ของบัฟเฟอร์ bacto-haemagglutination พีเอช 7.3
(Difco, USA) ได้รับการจ่ายเข้าไปในท่อ siliconised และ
เพิ่มถึง 1 มิลลิลิตรส่วนผสมของ 1.077 หนาแน่น histopaque
บัฟเฟอร์ haemagglutination และ 1 มิลลิลิตรของเลือด อย่างรอบคอบ
ชั้นบน หลอดถูกหมุนเหวี่ยงที่ 700 กรัม
เป็นเวลา 15 นาทีที่ 4 8C หลังจากการหมุนเหวี่ยง, พลาสม่าได้รับการ
รวบรวมและเก็บไว้ที่ 20 8C จนใช้ในการวิเคราะห์.
เม็ดเลือดขาวแยกถูกถอดออกอย่างอ่อนโยนและจ่าย
เข้าไปในท่อ siliconised มีฟีนอลสีแดงฟรี HBSS
2 อาร์ Harikrishnan et al, / สัตวแพทย์ปรสิตวิทยา 170 (2010) 1-7
(ซิกม่า) เซลล์ที่ถูกล้างแล้วสองครั้งใน HBSS และ
ปรับให้ 1 107 เซลล์
ML1

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ตัวอย่างเลือด ( ปลาหกครั้งในแต่ละกลุ่ม ) จากเส้นเลือดที่หาง เก็บจากของเลียนแบบ รถถังในการรักษาแต่ละครั้ง หลังจาก 30 วันของการโพสต์ท้าทายกับตับ . ยาถูกใช้เป็นเลือด บุคคลปลาตัวอย่างเพียงครั้งเดียวเพื่อหลีกเลี่ยงอิทธิพลในหรือเนื่องจากหลายและการจัดการความเครียดในเลือดปลา สำหรับตรวจสอบและ leucocytes แยกจากแต่ละตัวอย่างเลือด โดยการเหวี่ยงแยก ( Rowley , ความหนาแน่น1990 ) 1 มิลลิลิตรของ histopaque 1.119 ( Sigma ) ที่มี100 มิลลิลิตร haemagglutination Bacto บัฟเฟอร์ pH 7.3( difco , USA ) ถูกจ่ายเข้าไปในท่อ siliconised และเพิ่ม 1 มิลลิลิตร ผสม histopaque 1.077 ความหนาแน่นบัฟเฟอร์ haemagglutination 1 มิลลิลิตรของเลือดเป็นอย่างระมัดระวังชั้นด้านบน ท่ออยู่ที่ระดับ 700 กรัม15 นาทีที่ 4 8C หลังจากปั่น พลาสม่า คือรวบรวม และจัดเก็บที่ 20 8C จนใช้ในการวิเคราะห์แยก leucocytes ออกเบา ๆและจ่ายเป็นท่อที่มี hbss siliconised , ฟีนอลเรดฟรี2 . harikrishnan et al . สัตวแพทย์ปรสิตวิทยา / 170 ( 2010 ) 1 – 7( Sigma ) เซลล์แล้วล้างสองครั้งใน hbss และปรับเซลล์ ml1 1 107 ได้.