2.5. Measurement of nitric oxide (N

2.5. Measurement of nitric oxide (NO) and cytokine
production
The AM in RPMI with 10% FCS at a concentration of
0.5  106 cells/ml were incubated with or without LPS (E.
coli, 10 g) for 60 h in a humidified atmosphere at 37°C in
the presence of 5% CO2. After 60 h, the cells were centrifuged
at 2000 rpm for 10 min at 4°C. Cell-free supernatants
were collected and stored at 70°C for later analysis of NO
and TNF-
.
The spleen cells were incubated with and without phorbolphorbol
myristate acetate (PMA, 40 ng) and ionomycin (0.5
nmol) for 60 h. The cells were then centrifuged at 228  g
and the cell free supernatants were collected and stored at
70°C for the later analysis of TNF-
, IFN- and IL-2.
Nitric oxide (NO) production was determined by measuring
its stable metabolic end product, nitrite by colorimetric
reaction using Griess reagent [14]. Concentrations of the
cytokines in the cell culture supernatants were determined
by enzyme-linked immunosorbent assay (OptEIA ELISA
kits, Pharmingen, San Diego, CA).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.5. การวัดของไนตริกออกไซด์ (NO) และ cytokineการผลิตAM ใน RPMI กับ FCS 10% ที่ความเข้มข้นของ0.5 106 เซลล์/มล.ได้รับการกกมี หรือไม่มี LPS (E.โคไล 10 g) สำหรับ 60 ชมบรรยากาศณอุณหภูมิที่ 37 ° C ในการปรากฏตัวของ 5% CO2 หลังจาก 60 ชม เซลล์ได้จากที่ 2000 rpm 10 นาทีที่ 4 องศาเซลเซียส เซลล์ฟรี supernatantsรวบรวม และเก็บไว้ที่ 70° C สำหรับการวิเคราะห์ในภายหลังไม่และ TNF-เซลล์ม้ามได้รับการกกมี และไม่ มี phorbolphorbolอะซิเต myristate (PMA, 40 ฉบับ) และ ionomycin (0.5นาโนโมล) สำหรับ 60 ชม เซลล์ได้แล้วจากที่ 228 กรัมและ supernatants ฟรีของเซลล์ถูกรวบรวม และเก็บไว้ที่70° C สำหรับการวิเคราะห์ในภายหลังของ TNF - IFN - และ IL-2กำหนดโดยวัดจากการผลิตไนตริกออกไซด์ (NO)ความมั่นคงเผาผลาญอาตมา ไนไตรท์ โดยเทียบเคียงปฏิกิริยาที่ใช้น้ำยา Griess [14] ความเข้มข้นของการกำหนดในการเซลล์ supernatants วัฒนธรรมโดยเอนไซม์ลิงค์ immunosorbent assay (OptEIA ELISAชุด Pharmingen, San Diego, CA)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.5 วัดของไนตริกออกไซด์ (NO) และไซโตไคน์
ผลิต
am ใน RPMI 10% FCS ที่มีความเข้มข้นของ
0.5? 106 เซลล์ / มล. ถูกบ่มมีหรือไม่มี LPS ( E.
coli, 10 กรัม) 60 ชั่วโมงในบรรยากาศความชื้นที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสใน
การปรากฏตัวของ 5% ก๊าซ CO2 หลังจากผ่านไป 60 ชั่วโมงเซลล์ที่ถูกหมุนเหวี่ยง
ที่ 2,000 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 10 นาทีที่ 4 ° C supernatants ปราศจากเซลล์
ที่ถูกเก็บรวบรวมและเก็บไว้ที่ 70 องศาเซลเซียสสำหรับการวิเคราะห์ในภายหลังไม่
และ TNF- ?.
เซลล์ม้ามถูกบ่มที่มีและไม่มี phorbolphorbol
myristate acetate (PMA 40 NG) และ ionomycin (0.5
nmol) เป็นเวลา 60 ชั่วโมง เซลล์ที่ถูกปั่นแล้วที่ 228? G
และ supernatants มือถือฟรีที่ถูกเก็บรวบรวมและเก็บไว้ที่
70 องศาเซลเซียสสำหรับการวิเคราะห์ในภายหลังของ TNF- ?, IFN-? และ IL-2
ไนตริกออกไซด์ (NO) การผลิตถูกกำหนดโดยการวัด
ผลิตภัณฑ์ที่สิ้นสุดของการเผาผลาญที่มีเสถียรภาพ, ไนไตรท์โดยสี
ปฏิกิริยาโดยใช้น้ำยา Griess [14] ความเข้มข้นของ
cytokines ใน supernatants เพาะเลี้ยงเซลล์ได้รับการพิจารณา
โดยเอนไซม์ที่เชื่อมโยงการทดสอบอิมมูโน (OptEIA ELISA
ชุด PharMingen, San Diego, CA)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.5 การวัดผลของไนตริกออกไซด์ ( NO ) และไซโตไคน์การผลิตAM ใน RPMI กับ FCS 10 % ที่ความเข้มข้นของ0.5 106 เซลล์ / มิลลิลิตร ) โดยมีหรือไม่มีหล่อลื่น ( E( 10 กรัม ) 60 ชั่วโมง ในบรรยากาศที่ 37 ° C ใน humidifiedการปรากฏตัวของคาร์บอนไดออกไซด์ 5% หลังจาก 60 ชั่วโมง อยู่ที่ระดับเซลล์ที่ 2000 รอบต่อนาที เป็นเวลา 10 นาทีที่ 4 องศา supernatants ฟรีเซลล์การเก็บรวบรวมและเก็บไว้ที่อุณหภูมิ 70 องศา C สำหรับการวิเคราะห์ในภายหลังไม่ได้และ TNF -เซลล์ม้ามถูกบ่มที่มีและไม่มี phorbolphorbol30 องศาเซลเทต ( PMA , 40 กรัม ) และ ionomycin ( 0.5? ) 60 ชั่วโมง เซลล์ แล้วไฟฟ้าที่ 228 กรัมและมือถือฟรี supernatants การเก็บรวบรวมและเก็บรักษาที่70 ° C สำหรับการวิเคราะห์ในภายหลังของ TNF - IFN - 2 .ไนตริก ออกไซด์ ( ไม่ ) การผลิตถูกกำหนดโดยการวัดผลิตภัณฑ์ที่สิ้นสุดของมั่นคงการเผาผลาญโดย Colorimetric , ไนไตรท์ปฏิกิริยาที่ใช้ griess รีเอเจนต์ [ 14 ] ความเข้มข้นของสารในเซลล์เพาะ supernatants สารละลายโดย enzyme-linked immunosorbent assay ( ELISA opteiaชุด pharmingen , San Diego , CA )