The major autolysin of Staphylococc

The major autolysin of Staphylococcus aureus (AtlA) and of Staphylococcus epidermidis (AtlE) are well-studied enzymes Here we created an atlA deletion mutant in S. aureus that formed large cell clusters and was biofilm-negative. In electron micrographs, the mutant cells were distinguished by rough outer cell surface. The mutant could be complemented using the atlE gene from S. epidermidis. To study the role of the repetitive sequences of atlE, we expressed in Escherichia coli the amidase domain encoded by the gene, carrying no repeat regions (amiE) or two repeat regions (amiE-R1,2), or the three repeat regions alone (R1,2,3) as N-terminal His-tag fusion proteins. Only slight differences in the cell wall lytic activity between AmiE and AmiE-R1,2 were observed. The repetitive sequences exhibit a good binding affinity to isolated peptidoglycan and might contribute to the targeting of the amidase to the substrate. AmiE and AmiE-R1,2 have a broad substrate specificity as shown by similar activities with peptidoglycan lacking wall teichoic acid, O-acetylation, or both. As the amidase activity of AtlA and AtlE has not been proved biochemically, we used purified AmiE-R1,2 to determine the exact peptidoglycan cleavage site. We provide the first evidence that the amidase indeed cleaves the amide bond between N-acetyl muramic acid and L-alanine.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

Autolysin สำคัญ ของ Staphylococcus หมอเทศข้างลาย (AtlA) และ Staphylococcus epidermidis (AtlE) เป็นเอนไซม์ studied เชิญที่นี่เราสร้าง mutant ลบ atlA หมอเทศข้างลาย S. ที่เกิดคลัสเตอร์เซลล์ขนาดใหญ่ และมี biofilm ลบ ในอิเล็กตรอน micrographs เซลล์กลายพันธุ์โดดเด่น ด้วยพื้นผิวหยาบภายนอกเซลล์ สามารถตู้ mutant ใช้ยีน atlE จาก S. epidermidis การศึกษาบทบาทของลำดับซ้ำของ atlE เราแสดงใน Escherichia coli โดยยีน การเข้ารหัสโดเมน amidase ถือครองพื้นที่ไม่ซ้ำ (amiE) หรือสองซ้ำภูมิภาค (amiE-R1, 2), หรือสามซ้ำภูมิภาคเพียงอย่างเดียว (R1, 2, 3) เป็นเทอร์มินัล N พระป้ายอาหารโปรตีน เพียงเล็กน้อยความแตกต่างในกิจกรรม lytic ผนังเซลล์ระหว่าง AmiE AmiE R1, 2 ได้ดำเนินการ ลำดับซ้ำแสดงความเกี่ยวข้องผูกพันดีเพื่อแยกเปบทิโดไกลแคน และอาจนำไปสู่การกำหนดเป้าหมายของ amidase กับพื้นผิว AmiE และ AmiE R1, 2 มี specificity พื้นผิวที่กว้างมาก โดยกิจกรรมที่คล้ายกัน ด้วยเปบทิโดไกลแคนขาดผนัง teichoic กรด O acetylation หรือทั้งสอง เป็นกิจกรรม amidase AtlA และ AtlE ได้ไม่ถูกพิสูจน์ biochemically เราใช้บริสุทธิ์ที่ AmiE-R1, 2 เพื่อดูไซต์ปริเปบทิโดไกลแคนแน่นอน เรามีหลักฐานแรกที่ amidase ที่บอนด์ amide ระหว่างกรด N-acetyl muramic และอะลานีน L จริงแยกออก

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

autolysin สำคัญของเชื้อ Staphylococcus aureus (atla) และ Staphylococcus epidermidis (Atle) เป็นอย่างดีการศึกษาเอนไซม์ที่นี่เราได้สร้างมนุษย์กลายพันธุ์ในการลบ atla เชื้อ S. aureus ที่ก่อตัวขึ้นกลุ่มเซลล์ที่มีขนาดใหญ่และเป็นไบโอฟิล์มลบ ในกล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอนเซลล์กลายพันธุ์โดดเด่นด้วยเซลล์ผิวชั้นนอกที่หยาบกร้าน มนุษย์กลายพันธุ์จะได้รับการเสริมโดยใช้ยีน Atle จาก S. epidermidis เพื่อศึกษาบทบาทของลำดับซ้ำ Atle เราแสดงออกใน Escherichia coli โดเมน amidase เข้ารหัสโดยยีนถือไม่มีภูมิภาคซ้ำ (Amie) หรือสองภูมิภาคซ้ำ (Amie-R1,2) หรือสามภูมิภาคซ้ำเพียงอย่างเดียว ( R1,2,3) เป็น N-ขั้วโปรตีนของเขาแท็ก ความแตกต่างเพียงเล็กน้อยในผนังเซลล์กิจกรรม lytic ระหว่าง Amie และ Amie-R1,2 ถูกตั้งข้อสังเกต วนเวียนซ้ำแสดงความใกล้ชิดผูกพันที่ดีที่จะ peptidoglycan โดดเดี่ยวและอาจนำไปสู่​​การกำหนดเป้​​าหมายของ amidase กับพื้นผิว Amie และ Amie-R1,2 มีความจำเพาะสารตั้งต้นในวงกว้างที่แสดงโดยกิจกรรมที่คล้ายกันกับผนัง peptidoglycan ขาดกรด teichoic, O-acetylation หรือทั้งสองอย่าง ในฐานะที่เป็นกิจกรรมของ amidase atla และ Atle ยังไม่ได้รับการพิสูจน์ทางชีวเคมีเราใช้บริสุทธิ์ Amie-R1,2 เพื่อตรวจสอบเว็บไซต์แตกแยก peptidoglycan ที่แน่นอน เรามีหลักฐานแรกที่ amidase แข็งกระด้างแน่นอนพันธบัตร amide ระหว่าง N-acetyl กรด muramic และ L-alanine

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การจำแลงที่สําคัญของเชื้อ Staphylococcus aureus ( atla ) และการผลิตอาหาร ( atle ) ได้ศึกษาเอนไซม์ที่นี่เราสร้าง atla การลบกลายพันธุ์ใน S . aureus ที่ก่อตั้งกลุ่มเซลล์ขนาดใหญ่และฟิล์มเชิงลบ ในกล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอนแบบ เซลล์กลายพันธุ์เป็นอย่างดี นอกเซลล์พื้นผิวขรุขระ กลายพันธุ์จะครบครันใช้ยีน atle จาก S . อาหาร .เพื่อศึกษาบทบาทของลำดับซ้ำของ atle เราแสดงออกในเชื้อ Escherichia coli ที่ amidase โดเมนเข้ารหัสโดยยีนถือไม่มีภูมิภาคย้ำ ( amie ) หรือสองย้ำภูมิภาค ( amie-r1,2 ) หรือ 3 ย้ำภูมิภาคคนเดียว ( r1,2,3 ) เป็นกรดอะมิโนโปรตีนแท็กฟิวชั่นของเขา ความแตกต่างเพียงเล็กน้อยในผนังเซลล์และกิจกรรมของเอนไซม์ระหว่าง amie amie-r1,2 พบ .ลำดับซ้ำแสดงดีผูกความสัมพันธ์กับแยกเปปติโดไกลแคน และอาจนำไปสู่เป้าหมายของ amidase ไปยังพื้นผิว amie amie-r1,2 มีความจำเพาะและพื้นผิวที่แสดงโดยคร่าว ๆที่คล้ายกันกิจกรรมกับเปปติโดไกลแคนขาดผนัง teichoic กรด o-acetylation หรือทั้งสองอย่าง เป็นกิจกรรมของ atla amidase และยังไม่ได้พิสูจน์ biochemically atle ,เราใช้ amie-r1,2 บริสุทธิ์เพื่อกำหนดแน่นอนแอนติไฮโดรเจนแยกออกเว็บไซต์ เรามีหลักฐานแรกที่ amidase แน่นอนคลีฟส์เอไมด์และพันธะระหว่าง n-acetyl muramic กรดอะลานีน .