5.5. Total RNA extraction and North

5.5. Total RNA extraction and Northern blot analysis

Frozen banana and plantain peels or pulps were ground
into powder in liquid nitrogen. Total RNA was extracted
according the hot borate method of Wan and Wilkins (1994).
10 µg total RNA was separated through electrophoresis
and capillary blotted onto a polyvinylidene fluoride(PVDF)
membrane (Biodyne
B, 0.45 µm, Pall, America), and was
blot-dried and cross-linked using UV at 280 nm. Gene cloning
and DIG-labelled specific probes were mead accroding to
Yang
et
al.
(2009a).
The
DNA
probes were DIG-labelled
using
a PCR DIG Probe Synthesis Kit (Roche, Germany).

The membrane was hybridized with the DIG-labelled probe
for 16 h at 45°C in high-SDS buffer (7% sodium dodecyl
sulfate (SDS), 5× SSC, 50 mol L–1
sodium-phosphate,
pH 7.0, 2% blocking reagent (Roche, Germany) and 0.1%
N-lauroylsarcosine) containing 50% deionized formamide
(v/v). Blots were washed twice at 37°C in 2× saline sodium
citrate (SSC) and 0.1% SDS for 10 min, followed by washing
twice at 62°C in 0.2× SSC and 0.1% SDS for 30 min. The
membranes were then subjected to immunological detection
following the manufacturer’s instructions (Roche, Germany).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

5.5. รวมสกัดอาร์เอ็นเอและเหนือทำลายวิเคราะห์ Peels กล้วยและกล้ายแช่แข็งหรือ pulps ถูกพื้นดินเป็นผงในไนโตรเจนเหลว ถูกสกัดอาร์เอ็นเอทั้งหมดตามวิธี borate ร้อนของ Wan และ Wilkins (1994) 10 ไมโครกรัมเป็นเครื่องรวมอาร์เอ็นเอที่แยกโดยใช้ electrophoresisและแรง blotted บน polyvinylidene fluoride(PVDF) เมมเบรน (BiodyneB, 0.45 µm แถบวาย อเมริกา), และคืนในตาแห้ง และ cross-linked ใช้ UV ที่ 280 nm ยีนที่โคลนและคลิปปากตะเข้เฉพาะ DIG มัน accroding มีดไปยางร้อยเอ็ดอัล(2009a) ที่ดีเอ็นเอคลิปปากตะเข้ได้ DIG มันโดยใช้PCR DIG โพรบชุดสังเคราะห์ (Roche เยอรมนี) เมมเบรนได้ผสมพันธุ์กับโพรบ DIG มัน สำหรับ h 16 ที่ 45° C ในบัฟเฟอร์สูง SDS (7% โซเดียม dodecylซัลเฟต (SDS), SSC, 5 ×โมล 50 L-1 โซเดียมฟอสเฟตpH 7.0 บล็อกรีเอเจนต์ (Roche เยอรมนี) และ 0.1% 2% N-lauroylsarcosine) ประกอบด้วย 50% deionized formamide(v/v) กันบล็อทถูกล้างสองครั้งที่ 37° C ในโซเดียม saline × 2ซิเตรต (SSC) และ 0.1% SDS สำหรับ 10 นาที ตาม ด้วยการซักผ้าครั้งที่ 62° C ใน 0.2 × SSC และ 0.1% SDS ใน 30 นาทีเข้าได้แล้วต้องตรวจหาภูมิคุ้มกันตามคำแนะนำของผู้ผลิต (Roche เยอรมนี)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

5.5 การสกัดอาร์เอ็นเอทั้งหมดและการวิเคราะห์ blot ภาคเหนือแช่แข็งเปลือกกล้วยและกล้าหรือเยื่อมาบดเป็นผงในไนโตรเจนเหลว รวม RNA ถูกสกัดตามวิธีborate ร้อน Wan และวิลกินส์ (1994). 10 ไมโครกรัม RNA รวมถูกแยกผ่าน electrophoresis และเส้นเลือดฝอยเปื้อนบนฟลูออไร Polyvinylidene (PVDF) เมมเบรน (Biodyne B, 0.45 ไมโครเมตรพอลอเมริกา) และเป็นลบแห้งและเชื่อมโยงโดยใช้รังสียูวีที่ 280 นาโนเมตร การโคลนยีนและ DIG ที่มีข้อความโพรบที่เฉพาะเจาะจงมธุรส accroding เพื่อ Yang et al. (2009a). ดีเอ็นเอโพรบถูก DIG ติดฉลากโดยใช้PCR DIG Probe สังเคราะห์ Kit (Roche, เยอรมนี). เมมเบรนที่ได้รับการไฮบริดที่มีการสอบสวน DIG ติดฉลาก16 ชั่วโมงที่ 45 องศาเซลเซียสในบัฟเฟอร์ SDS สูง (7% โซเดียมโดเดซิลซัลเฟต(SDS) 5 × SSC 50 mol L-1 โซเดียมฟอสเฟตพีเอช 7.0, 2% ปิดกั้นสาร (Roche, เยอรมนี) และ 0.1% N-lauroylsarcosine) ที่มี 50% ปราศจากไอออน formamide (v / v) blots ถูกล้างครั้งที่สองที่ 37 ° C ใน 2 ×น้ำเกลือโซเดียมซิเตรต(เอสเอส) และ 0.1% SDS เป็นเวลา 10 นาทีตามด้วยการซักผ้าเป็นครั้งที่สองที่62 องศาเซลเซียสใน 0.2 × SSC และ 0.1% SDS เป็นเวลา 30 นาที เยื่อจากนั้นก็อยู่ภายใต้การตรวจสอบภูมิคุ้มกันตามคำแนะนำของผู้ผลิต (Roche, เยอรมนี)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

5.5 . การสกัดอาร์เอ็นเอทั้งหมดและ blot การวิเคราะห์ทางเหนือ

กล้วยและเปลือกต้นไม้ หรือพื้น
เป็นผงมีเยื่อแช่แข็งในไนโตรเจนเหลว อาร์เอ็นเอทั้งหมดถูกสกัด
ตามร้อนบอเรตวิธีการวานและวิลกินส์ ( 1994 )
10 µกรัมรวม RNA ถูกแยกผ่าน electrophoresis
และเส้นเลือดฝอยเปื้อนบนีนฟลูออไรด์ ( PVDF )
เมมเบรน ( biodyne
b 0.45 µ M , พอล , อเมริกา ) , และ
blot แห้งและเชื่อมโยงการใช้ UV ที่ 280 nm . การโคลนยีนและชื่อเฉพาะและขุด


เป็นทุ่งหญ้า accroding ยาง

( 2009a et al . ) .



ถูกขุดและดีเอ็นเอที่มีการใช้ : PCR ขุดชุดการสังเคราะห์โพรบ ( โรช , เยอรมัน )

ใจ ) กับขุด labelled โพรบ
16 H 45 ° C ในบัฟเฟอร์สูง SDS ( 7 % โซเดียมโดเดซิลซัลเฟต ( SDS )
5 × SSC 50 โมล L )
1
โซเดียมฟอสเฟต pH 70 , 2% กั้นสารเคมี ( โรช , เยอรมนี ) และ 0.1 %
n-lauroylsarcosine ) ที่มี 50% คล้ายเนื้อเยื่อประสาน Formamide
( v / v ) ไม้ถูกล้างสองครั้งที่ 37 ° C ใน 2 ×เกลือโซเดียม
ซิเตรต ( SSC ) และ 0.1 % เป็นเวลา 10 นาที ตามด้วยล้าง
สองครั้งที่ 62 ° C ใน 0.2 × SSC และ 0.1% SDS เป็นเวลา 30 นาทีแล้ว
+
ตรวจหาภูมิคุ้มกันภายใต้คำแนะนำของผู้ผลิต ( โรเช่ , เยอรมนี )