2.4. Determination of POD residual activity
POD activity was determined using pyrogallol as a substrate
according to the method described by Kwak et al. [21]. The sample
was centrifuged at 10,000g, 4 C for 10 min with Avanti J-E Centrifuge
(Beckman Coulter, Inc., USA). The total volume of the reaction
mixture was 3.0 mL which contained 2.2 mL sample, 0.32 mL of
100 mM (w/v) potassium-phosphate buffer (pH 6), 0.32 mL of 5%
(w/v) pyrogallol and 0.16 mL of 0.147 M (v/v) H2O2. The reaction
was initiated by the addition of H2O2 and the increase in absorbance
was recorded using a spectrophotometer (LabTech Bluestar-
A UV spectrophotometer) at 420 nm in 3 min. Following
equation was used to calculate the percent residual activity of
POD:
Residual activityð%Þ ¼ 100 At=A0 ð1Þ
where At is the enzyme activity of treated sample and A0 is the enzyme
activity of the control sample.
2.4 การกำหนดกิจกรรมส่วนที่เหลือเท่านั้นกำหนดกิจกรรมฝักใช้ pyrogallol เป็นพื้นผิวตามวิธีการอธิบายไว้โดย Kwak et al. [21] ตัวอย่างถูก centrifuged 10, 000g, C 4 ใน 10 นาที ด้วยเครื่องหมุนเหวี่ยง J-E เรียนโรส(Beckman Coulter, Inc., USA) ปริมาตรรวมของปฏิกิริยาส่วนผสมมี 3.0 mL ซึ่งประกอบด้วยตัวอย่าง 2.2 mL, 0.32 mL ของ100 มม. (w/v) โพแทสเซียมฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (pH 6), 0.32 มล.ของ 5%(w/v) pyrogallol และมล 0.16 เมตร 0.147 (v/v) H2O2 ปฏิกิริยาเริ่ม โดยการเพิ่ม H2O2 และเพิ่ม absorbanceบันทึกโดยใช้เครื่องทดสอบกรดด่างการ (LabTech บรรณาธิการ-เครื่องทดสอบกรดด่าง UV) ที่ 420 nm ในนาทีที่ 3 ต่อไปนี้สมการที่ใช้คำนวณกิจกรรมส่วนที่เหลือร้อยละของฝัก:ส่วนที่เหลือ activityð %Þ¼ 100 ที่ = A0 ð1Þซึ่งเป็นเอนไซม์ของอย่างบำบัด และ A0 เป็นเอนไซม์กิจกรรมของตัวอย่างควบคุม
การแปล กรุณารอสักครู่..