A method combining immunomagnetic s

A method combining immunomagnetic separation (IMS) and real-time (5V-nuclease) PCR was developed to detect
Escherichia coli O157:H7. Monoclonal antibody specific for the E. coli O157 antigen was added to protein A-coated magnetic
particles to create antibody-coated beads. The beads specifically captured E. coli O157:H7 from bacterial suspensions. The cells
were eluted from the beads and lysed by heating; the eluate was then assayed by real-time PCR, using primers and probe
specifically targeting the eaeA gene of E. coli O157:H7. Approximately 50% of the cells in suspension were captured by the
beads and detected by real-time PCR. No cross-reactivity was detected when other strains of E. coli were tested. This method
was applied to detect E. coli O157:H7 from ground beef. Both cell capture efficiency and real-time PCR efficiency were
reduced by meat-associated inhibitors. However, we were still able to detect up to 8% of E. coli O157:H7 from inoculated
ground beef samples. The detection sensitivity varied among ground beef samples. The minimum detection limit was b5
102
cells ml1 for suspensions of E. coli O157:H7 in buffer and 1.3
104 cells g1 for E. coli O157:H7 in ground beef. The
combination of IMS and real-time PCR results in rapid, specific and quantitative detection of E. coli O157:H7 without the need
for an enrichment culture step

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

วิธีการรวมแยก immunomagnetic (IMS) และ PCR แบบเรียลไทม์ (5V-nuclease) ถูกพัฒนาขึ้นเพื่อตรวจสอบEscherichia coli O157:H7 Monoclonal แอนติบอดีเฉพาะสำหรับตรวจหา E. coli O157 ถูกเพิ่มโปรตีน A-เคลือบแม่เหล็กอนุภาคการสร้างแอนติบอดีที่เคลือบลูกปัด ปัดจับ O157:H7 E. coli จากบริการเชื้อแบคทีเรียโดยเฉพาะ เซลล์eluted จากเม็ด และ lysed โดยความร้อน eluate ถูกแล้ว assayed โดย PCR แบบเรียลไทม์ การใช้ไพรเมอร์และโพรบโดยเฉพาะเป้าหมายยีน eaeA ของ O157:H7 E. coli ประมาณ 50% ของเซลล์ในระบบกันสะเทือนถูกจับโดยลูกปัด และตรวจ ด้วย PCR แบบเรียลไทม์ Cross-reactivity ไม่พบเมื่อมีทดสอบสายพันธุ์อื่น ๆ ของ E. coli วิธีการนี้ใช้ตรวจหา O157:H7 E. coli จากเนื้อดิน เซลล์จับประสิทธิภาพและประสิทธิภาพ PCR แบบเรียลไทม์ลดลง โดยการเชื่อมโยงเนื้อ inhibitors อย่างไรก็ตาม เราก็ยังคงสามารถตรวจพบ E. coli O157:H7 ถึง 8% จาก inoculatedตัวอย่างเนื้อดิน ความไวในการตรวจหารายการที่แตกต่างกันระหว่างตัวอย่างเนื้อดิน ขีดจำกัดต่ำสุดตรวจถูก b5 102เซลล์ ml 1 สำหรับบริการของ O157:H7 E. coli ในบัฟเฟอร์และเซลล์ 1.3 104 g 1 สำหรับ O157:H7 E. coli ในเนื้อดิน ที่IMS และ PCR แบบเรียลไทม์ให้ผลตรวจที่รวดเร็ว เฉพาะ และเชิงปริมาณ O157:H7 E. coli โดยไม่ต้องสำหรับขั้นตอนการวัฒนธรรมโดดเด่น

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

วิธีการรวมที่แยก ( IMS ) และแบบเรียลไทม์ ( 5V นิวเคลียส ) ซึ่งถูกพัฒนาขึ้นเพื่อตรวจหาเชื้อ Escherichia coli เป็นสมาชิก : H7
. โมโนโคลนอลแอนติบอดีที่จำเพาะต่อเชื้อ E . coli เป็นสมาชิกแอนติเจนคือเพิ่มโปรตีน a-coated แม่เหล็ก
อนุภาคเพื่อสร้างลูกปัดเคลือบแอนติบอดี เม็ด โดยจับตัวเป็นสมาชิกจากแบคทีเรีย E . coli ) สารแขวนลอย . เซลล์
มีตัวอย่างจากลูกปัดและ lysed โดยความร้อน ; สารละลาย ( eluate ) ถูก assayed โดยวิธี PCR แบบเรียลไทม์ โดยใช้ไพรเมอร์และสอบสวน
โดยเฉพาะเป้าหมาย eaea ยีนของเชื้อ E . coli เป็นสมาชิก : H7 . ประมาณ 50% ของเซลล์แขวนลอยอยู่ถูกจับโดย
ลูกปัดและตรวจด้วย PCR แบบเรียลไทม์ ไม่พบปฏิกิริยาข้ามของ E . coli สายพันธุ์อื่น ๆเมื่อถูกทดสอบ วิธีนี้ถูกนำมาใช้เพื่อตรวจจับ
E( เป็นสมาชิก ) จากเนื้อดิน ประสิทธิภาพการจับภาพทั้งเซลล์และ PCR แบบเรียลไทม์ประสิทธิภาพถูก
ลดลงเนื้อเกี่ยวข้องตัวยับยั้ง อย่างไรก็ตาม เรายังสามารถตรวจจับได้ถึง 8% ของ E . coli เป็นสมาชิก : H7
ตัวอย่างเชื้อจากเนื้อดิน การตรวจหาความไวแตกต่างกันระหว่างตัวอย่างเนื้อดิน จำกัดการตรวจสอบน้อยที่สุดคือ B5
102
เซลล์ ml  1 สำหรับช่วงล่างของ E . coli เป็นสมาชิก : H7 ในบัฟเฟอร์และ 13
104 กรัม  1 เซลล์ E . coli เป็นสมาชิก : H7 ในเนื้อดิน
รวม IMS และเรียลไทม์พีซีอาร์ผลอย่างรวดเร็ว , การตรวจหาเชื้อ E . coli เป็นสมาชิกที่เฉพาะเจาะจงและเชิงปริมาณ ) โดยไม่ต้องมีขั้นตอนการ
วัฒนธรรม