Chromatographic fractionation and b

Chromatographic fractionation and bioassay of the culture
extract
P. temperata M1021 was cultured in LB broth for 7 days at
28 ± 2°C in a shaking incubator at 200 ± 20 rpm. The culture
broth was then centrifuged at 12,000 × g for 10 min at 4°C, the
supernatant was filtered through a 0.2-μm cellulose acetate
filter, and the culture filtrate (CF) was used for subsequent
fractionation. A bioactivity-guided fractionation procedure
was followed for metabolite purification. The CF was acidified
to pH 2.8 ± 0.2 with 1 N HCl/NaOH, and subsequently
2 volumes of hexane was mixed with the CF and separated
into organic and aqueous fractions. The aqueous phase was
treated with EtOAc three times (1:1 v/v), and the organic
layers were removed. The organic layers extracted from hexane
and EtOAc were combined and dried under reduced
pressure on a rotary evaporator (Korea) at 40°C. Nearly dry
residues were re-suspended in 1 ml 100% methanol, which
was used for initial bioassay against the G. mellonella larvae.
The insecticidal bioassay was performed by injecting 10 μl
EtOAc extract into the hemocoel of five instar G. mellonella
larvae using a 10 μl Hamilton syringe. The EtOAc extract
of Escherichia coli DH5α was processed using the same
conditions as control. The resulting EtOAc extract was absorbed
onto silica and subjected to fractionation by flash
chromatography on Luna C18 100A column (250 mm × 4.60
mm, 5 μm; Phenomenex), filled with silica gel (70 to 230
mesh; Merck), using a EtOAc-hexane (20:90, 50:50, 100:0,
v/v) and MeOH-EtOAc (2:98, 5:95, 10:90, 20:80, 50:50, and
100:0, v/v) gradient. The bio-active fractions were confirmed
with respect to significant PO inhibition activity.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

แยกส่วน chromatographic และ bioassay ของวัฒนธรรมสารสกัดจากP. temperata M1021 ถูกอ่างในซุปปอนด์สำหรับวันที่28 ± 2° C ใน incubator งก ๆ ที่ 200 ± 20 รอบต่อนาที วัฒนธรรมซุปมี centrifuged แล้วที่ 12000 × g สำหรับที่ 4° C, 10 นาทีsupernatant ถูกกรองผ่าน acetate เป็นเซลลูโลส 0.2-μmใช้สำหรับกรอง และการวัฒนธรรมสารกรอง (CF) ต่อมาแยกส่วน กระบวนการแยกส่วนตัวทางชีวภาพถูกตามสำหรับฟอก metabolite CF ถูก acidifiedการ pH 2.8 ± 0.2 ด้วย 1 N HCl/NaOH และในเวลาต่อมาผสมกับการ CF และแบ่งวอลุ่ม 2 ของเฮกเซนเป็นเศษอินทรีย์ และอควี ระยะอควีถูกรักษา ด้วย EtOAc สามเวลา (1:1 v/v), และแบบอินทรีย์ชั้นถูกเอาออก ชั้นอินทรีย์ที่สกัดจากเฮกเซนและ EtOAc รวม และแห้งลดลงต่ำกว่าความดัน evaporator เป็นโรตารี่ (เกาหลี) ที่ 40 องศาเซลเซียส เกือบแห้งตกค้างเลื่อนออกไปอีกใน 1 ml 100% เมทานอล ที่ใช้สำหรับเริ่มต้น bioassay กับตัวอ่อน mellonella กรัมทำการ insecticidal bioassay โดย injecting 10 μlEtOAc แยกเป็น hemocoel ของ instar ห้า mellonella กรัมตัวอ่อนที่ใช้ μl 10 เข็มฮามิลตัน สารสกัดจาก EtOAcEscherichia coli ของ DH5α ประมวลผลใช้เหมือนกันเงื่อนไขเป็นตัวควบคุม สารสกัดจาก EtOAc ได้ถูกดูดซึมบนซิลิกา และต้องแยกส่วน โดยแฟลชchromatography คอลัมน์ Luna C18 100A (250 มม. × 4.60มม. μm 5 Phenomenex), เต็มไป ด้วยซิลิก้าเจล (70 กับ 230ตาข่าย เมอร์ค), ใช้เป็น EtOAc-โพลี (20:90 คนละครึ่ง 100:0v/v) และทานอ EtOAc (2:98, 5:95, 10:90, 20:80 คนละ ครึ่ง และ100:0, v/v) ไล่โทนสี เศษส่วนการใช้งานทางชีวภาพได้ยืนยันกับกิจกรรมยับยั้ง PO อย่างมีนัยสำคัญ

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

การแยกสารและทดสอบฤทธิ์ทางชีวภาพของวัฒนธรรมสารสกัดจากพี temperata M1021 ได้รับการเพาะเลี้ยงในน้ำซุป LB 7 วันที่28 ± 2 องศาเซลเซียสในศูนย์บ่มเพาะสั่นที่ 200 ± 20 รอบต่อนาที วัฒนธรรมน้ำซุปแล้วถูกหมุนเหวี่ยงที่ 12,000 ×กรัมเป็นเวลา 10 นาทีที่ 4 ° C, ใสถูกกรองผ่านเซลลูโลสอะซิเตท 0.2 ไมครอนกรองและกรองวัฒนธรรม(CF) ใช้สำหรับต่อมาแยก ขั้นตอนการแยกทางชีวภาพแนะนำตามมาสำหรับการทำให้บริสุทธิ์ metabolite CF ถูกกรดจะมีค่าpH 2.8 ± 0.2 กับ 1 N HCl / NaOH และต่อมา2 เล่มของเฮกเซนได้รับการผสมกับ CF และแยกออกเป็นเศษส่วนอินทรีย์และน้ำ ในช่วงน้ำได้รับการรักษาด้วย EtOAc สามครั้ง (1: 1 v / v) และอินทรีย์ชั้นถูกถอดออก ชั้นอินทรีย์สกัดจากเฮกเซนและ EtOAc มารวมกันและแห้งภายใต้การลดความดันในเครื่องระเหยแบบหมุน(เกาหลี) ที่ 40 ° C เกือบแห้งตกค้างเป็นอีกครั้งที่ลอยอยู่ใน 1 มิลลิลิตรเมทานอล 100% ซึ่งใช้สำหรับการทดสอบฤทธิ์ทางชีวภาพครั้งแรกกับตัวอ่อนmellonella กรัม. ชีวภาพสารฆ่าแมลงที่ได้ดำเนินการโดยการฉีด 10 ไมโครลิตรEtOAc ดึงเข้าไปใน hemocoel ห้าวัย G. mellonella ตัวอ่อนใช้ 10 ไมโครลิตรเข็มฉีดยาแฮมิลตัน สารสกัด EtOAc ของอีโคDH5αได้รับการประมวลผลโดยใช้เดียวกันเงื่อนไขที่ควบคุม สารสกัดจากผล EtOAc ถูกดูดซึมเข้าสู่ซิลิกาและอาจจะแยกจากแฟลชโคในคอลัมน์Luna C18 100A (250 × 4.60 มมมม5 ไมครอน; Phenomenex) ที่เต็มไปด้วยซิลิกาเจล (70-230 ตาข่าย; เมอร์ค) โดยใช้ EtOAc- เฮกเซน (20:90, 50:50, 100: 0, v / v) และเมธานอล-EtOAc (2:98, 5:95, 10:90, 20:80, 50:50 และ100: 0, v / V) การไล่ระดับสี โดยเศษชีวภาพที่ใช้งานได้รับการยืนยันเกี่ยวกับการป ณ ฤทธิ์ยับยั้งอย่างมีนัยสำคัญ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

องค์ประกอบของวัฒนธรรมและโครมาโทกราฟี สามารถแยก temperata

หน้า m1021 เลี้ยงใน broth LB 7 วันที่ 28 ±° C
2 ในตู้อบที่ 200 ±สั่น 20 รอบต่อนาที วัฒนธรรม
ซุปก็ระดับที่ 12 × G สำหรับ 10 นาทีที่ 4 ° C ,
น่านถูกกรองผ่านμเซลลูโลสอะซิเตต 0.2 M -
กรองและ culture filtrate ( CF ) ใช้ตามมา
( .เป็นส่วนการแนะนำขั้นตอน
ตามมาสำหรับอาหารบริสุทธิ์ CF คือปรับ pH 2.8 ± 0.2
1 N NaOH HCl / และต่อมา
2 ปริมาณเฮกเซนผสมกับ CF และแยก
เป็นเศษส่วนอินทรีย์และสารละลาย . ขั้นตอนในการ etoac เป็น
3 ครั้ง ( 1 : 1 v / v ) และชั้นอินทรีย์
ถูกถอดออก ชั้นอินทรีย์ จากสารสกัดเฮกเซน
และ etoac ถูกรวมและทำแห้งภายใต้ความดันลดลง
ระเหยแบบหมุน ( เกาหลี ) ที่ 40 ° C
เกือบแห้งดินอีกครั้ง แขวนลอยในเมทานอล 100% 1 มิลลิลิตร ซึ่งสามารถใช้สำหรับการเริ่มต้น
mellonella กับ G )
) โดยใช้วิธีฉีดสารสกัด 10 L
etoac μเข้าไป ฮีโมซีล 5 กรัม mellonella
ตัวอ่อนวัยใช้ 10 μลิตรแฮมิลตันฉีดยาการ etoac สกัดของ Escherichia coli DH5 α

ถูกประมวลผลโดยใช้เงื่อนไขเดิมที่ควบคุม ผล etoac สกัดถูกดูดซึม
บนซิลิกาและต้องแยกแฟลช
เซลลูน่า c18 100A คอลัมน์ ( 250 มม. × 4.60 mm μ
5 M ; phenomenex ) ใส่ซิลิกาเจล ( 70 - 230
ตาข่าย ; เมอร์ค ) โดยใช้ etoac เฮกเซน ( 20:90 50 100 : 0 ,
, V / V ) และปริมาณ etoac ( 2:98 5:95 10:90 , , ,: 50 และ 100 : 0
, V / V ) ลาด . ไบโอแอคทีฟ เศษส่วน พบว่ากิจกรรมการยับยั้ง
ด้วยความเคารพ ปอ ที่สําคัญ