In order to easily identify the origin of calli in this phase of the experiment, only calli produced in induction medium supplemented with 0.5 mg/l 2,4-D and 1.0 mg/l BAP (I1) were used for differentiation. Calli were subcultured 2–3 times for one month each round on the same medium used for callus multiplication, until calli numbers were sufficient for the regeneration experiment. The calli were divided into small pieces (2 cm × 2 cm), then one piece was transferred to each flask of differentiation media mentioned. Flasks were incubated under a 12 h photoperiod at 30–40 μmol/m2/s provided by fluorescent 20 W daylight lamps at 25 ± 1 °C for 30 d. A completely randomized design was used, with ten total replicates, each of six flasks, for each type of differentiation medium.
2.5. Plantlet rooting and transplanting
Healthy shoots differentiated from green calli with 3–4 true leaves were excised from the culture and transferred to one of four types of rooting media. All rooting media consisted of MS salts, 30 g/l sucrose, 6.5 g/l agar, and pH adjusted to 5.9–6.0. Each type (labeled as R1–R4 in Table 3) was supplemented with four levels of IBA (0, 0.05, 0.1, 0.2 mg/l) and subjected to autoclaving as previously described. The rooting experiment was again devised as complete randomized design, with 50 replicates of one regenerated plantlet per replicate at each level of IBA.
เพื่อระบุจุดเริ่มต้นของ calli ในระยะนี้การทดลองง่าย ๆ calli เท่านั้นผลิตในสื่อเหนี่ยวนำเสริม ด้วย 2, 4-D 0.5 mg/l และ 1.0 mg/l BAP (I1) ใช้สำหรับการสร้างความแตกต่าง Calli ได้ subcultured 2 – 3 ครั้งในหนึ่งเดือนแต่ละรอบในสื่อเดียวกันที่ใช้สำหรับให้คูณ จนกว่าหมายเลข calli ได้เพียงพอสำหรับการทดลองฟื้นฟู Calli ถูกแบ่งออกเป็นชิ้นเล็ก ๆ (2 cm × 2 cm), แล้วชิ้นหนึ่งถูกถ่ายโอนไปหนาวแต่ละสื่อสร้างความแตกต่างที่กล่าว น้ำมี incubated ภายใต้การช่วงแสง 12 h ที่ 30 – 40 μmol/m2/s โดยเรืองแสง 20 W โคมไฟตามฤดูกาลที่ 25 ± 1 ° C สำหรับ 30 d แบบ randomized สมบูรณ์ใช้ กับสิบรวมเหมือนกับ น้ำหก แต่ละสำหรับแต่ละชนิดของสื่อที่สร้างความแตกต่าง2.5. plantlet rooting และ transplantingถ่ายภาพสุขภาพ differentiated จาก calli สีเขียวมีใบจริง 3-4 ได้ excised จากวัฒนธรรม และโอนย้ายไปหนึ่งในสี่ชนิด rooting media Rooting media ทั้งหมดประกอบด้วย MS เกลือ ซูโครส 30 g/l, agar 6.5 g/l และ pH 5.9-6.0 ปรับปรุง แต่ละชนิด (ป้ายเป็น R1-R4 ในตารางที่ 3) เสริม ด้วยอิบา (0, 0.05, 0.1, 0.2 mg/l) ระดับสี่ และการ autoclaving ที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้เป็น มีการคิดค้นทดลอง rooting ถูกอีกเป็นสมบูรณ์แบบ randomized กับ 50 เหมือนกับของหนึ่งสร้าง plantlet ต่อจำลองของอิบา
การแปล กรุณารอสักครู่..
