Detection of Her2 on breast cancer

Detection of Her2 on breast cancer surface. Fixed and BSA-blocked
SK-BR-3 cells were incubated sequentially with 2.5 of a mouse
anti-Her2 antibody that binds the external domain of Her2 (catalog no.
28-0003; Zymed Laboratories Inc., S. San Francisco, CA) and goat anti-mouse IgG conjugated to QD 535 (80 nM) or QD 630 (40 nM) for 30 min
each. For detection of Her2 with QD-streptavidin, the fixed and BSA-
blocked cells were incubated sequentially with 2 of a humanized
anti-Her2 monoclonal antibody binding to the external domain of Her2
(Herceptin; Genentech, Inc., S. San Francisco, CA) for 30 min, 1.5 
biotinylated goat anti-human IgG (Vector) for 30 min, then 40 nM QD-
streptavidin for 30 min. Nuclei were counterstained with Hoechst 33342
(Molecular Probes, Eugene, OR). To label Her2 on unfixed cells, cultured
live SK-BR-3 cells were washed with cool PBS, incubated sequentially with
5 Herceptin (Genentech) for 1 h, 1.5 biotinylated goat anti-
human IgG (Vector) for 30 min, and 40 nM QD-streptavidin for 30 min.
All antibodies and QD-streptavidin were diluted in PBS containing 10%
(wt/vol) BSA, and all steps were carried out at 4 Labeled cells were suspended in 10% (wt/vol) BSA–PBS. A drop of cell suspension was placed on
a glass slide, covered with a coverslip, examined, and imaged immediately
under an upright fluorescence microscope.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ตรวจสอบของ Her2 บนพื้นผิวมะเร็งเต้านม ถาวร และบีเอสเอบล็อคSK-BR-3 เซลล์ที่ incubated ตามลำดับกับ 2.5 of เมาส์แอนติบอดีต่อต้าน Her2 ที่ binds ภายนอกโดเมนของ Her2 (แค็ตตาล็อกไม่28-0003 Zymed Laboratories Inc., s ได้ San Francisco, CA) และกลวง IgG เพื่อคิวดีสวีต 535 เมาส์ป้องกันแพะ (80 nM) หรือคิวดีสวีต 630 (40 nM) สำหรับ 30 นาทีแต่ละ ตรวจของ Her2 มีคิวดีสวีต-streptavidin คง และบีเอสเอ -เซลล์ที่ถูกบล็อกได้ incubated ตามลำดับกับ 2 of เป็น humanizedผูก monoclonal แอนติบอดีต้าน Her2 ในโดเมนภายนอกของ Her2(Herceptin Genentech, Inc., s ได้ San Francisco, CA) สำหรับ 30 นาที 1.5 biotinylated แพะป้องกันมนุษย์ IgG (เวกเตอร์) สำหรับ 30 นาที แล้ว 40 nM คิวดีสวีต -streptavidin สำหรับแอลฟา 30 นาทีได้ counterstained กับอย่างไร Hoechst 33342(โมเลกุลคลิปปากตะเข้ Eugene, OR) การป้ายชื่อ Her2 ในเซลล์ unfixed อ่างถ่ายทอดสด SK-BR-3 เซลล์ถูกล้าง ด้วย PBS เย็น incubated ตามลำดับด้วย5 Herceptin (Genentech) สำหรับ 1 h, 1.5 biotinylated แพะ anti-มนุษย์ IgG (เวกเตอร์) สำหรับ 30 นาที และ 40 nM streptavidin คิวดีสวีตใน 30 นาทีแอนตี้และคิวดีสวีต streptavidin ทั้งหมดถูกทำให้เจือจางใน PBS ที่ประกอบด้วย 10%(wt/vol) บีเอสเอ และขั้นตอนทั้งหมดได้ดำเนินการที่เซลล์ถูกหยุดชั่วคราวใน 10% (wt/vol) บีเอสเอ-PBS Labeled 4 หยดระงับเซลล์ถูกวางบนแก้วภาพนิ่ง มีการ coverslip ตรวจสอบ และ imaged ทันทีภายใต้กล้องจุลทรรศน์การ fluorescence ตรง

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

การตรวจ HER2 บนพื้นผิวที่เป็นมะเร็งเต้านม คงที่และ BSA-บล็อก
SK-BR-3 เซลล์ถูกบ่มตามลำดับ 2.5
ofเมาส์แอนติบอดีต่อต้านHER2 ที่ผูกโดเมนภายนอกของ HER2 (แคตตาล็อก no.
28-0003; Zymed Laboratories Inc. , S . San Francisco, CA) และแพะ IgG ป้องกันเมาส์ผันไป QD 535 (80 นาโนเมตร) หรือ QD 630 (40 นาโนเมตร) เป็นเวลา 30
นาทีในแต่ละ สำหรับการตรวจสอบของ HER2 กับ QD-streptavidin ที่คงที่และ BSA-
บล็อกเซลล์ถูกบ่มตามลำดับมี 2 of humanized
ต่อต้าน HER2 โมโนโคลนอลแอนติบอดีที่มีผลผูกพันไปยังโดเมนภายนอกของ HER2
(Herceptin; Genentech, Inc เอส San Francisco, CA) เป็นเวลา 30 นาที 1.5 
biotinylated แพะ IgG ต่อต้านมนุษย์ (เวกเตอร์) เป็นเวลา 30 นาทีแล้ว 40 นาโนเมตร QD-
streptavidin เป็นเวลา 30 นาที นิวเคลียสถูก counterstained กับ Hoechst 33342
(วัดระดับโมเลกุล, Eugene, OR) ป้าย HER2
ไม่เจาะจงต่อเซลล์เพาะเลี้ยงสดSK-BR-3 เซลล์ถูกล้างด้วยพีบีเอสเย็นบ่มตามลำดับกับ
5 Herceptin (Genentech) เป็นเวลา 1 ชั่วโมง 1.5 biotinylatedแพะต่อต้าน
IgG มนุษย์ (เวกเตอร์) เป็นเวลา 30 นาทีและ 40 นาโนเมตร QD-streptavidin เวลา 30 นาที.
ทั้งหมดแอนติบอดีและ QD-streptavidin ถูกเจือจางในพีบีเอสที่มี 10%
(น้ำหนัก / ปริมาตร) บีเอสเอและทุกขั้นตอนได้ดำเนินการใน 4  เซลล์Labeledถูกระงับใน 10% (น้ำหนัก / ปริมาตร) บีเอสเอพีบีเอส- การลดลงของเซลล์แขวนลอยที่ถูกวางไว้บนสไลด์แก้วปกคลุมด้วย coverslip การตรวจสอบและถ่ายภาพได้ทันทีภายใต้กล้องจุลทรรศน์เรืองแสงตรง

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

her2 บนพื้นผิวการตรวจหามะเร็งเต้านม คงที่และ BSA บล็อก
sk-br-3 เซลล์ถูกบ่มราว 2.5 ของหนู
anti-her2 แอนติบอดีที่ผูกโดเมนภายนอกของ her2 ( แคตตาล็อกไม่
28-0003 ; zymed ห้องปฏิบัติการ Inc สหรัฐอเมริกาซานฟรานซิสโก , CA ) และ IgG anti เมาส์แพะ conjugated กับควอนตัมด็อต 535 ( 80 nm ) หรือควอนตัมด็อต 630 ( 40 nm ) 30 มิน
แต่ละ การตรวจหา her2 ควอนตัมด็อต streptavidin ด้วย ,คงที่และ BSA -
บล็อค cells ) ตามลำดับ 2 .
anti-her2 ของโมโนโคลนอลแอนติบอดีผูกกับภายนอกโดเมนของ her2
( เฮอร์เซปติน ; ใหม่ๆ , Inc สหรัฐอเมริกาซานฟรานซิสโก , CA ) สำหรับ 30 นาทีที่ 1.5 
ไลแพะ IgG anti มนุษย์ ( เวกเตอร์ ) เป็นเวลา 30 นาที แล้ว 40 นาโนเมตร ควอนตัมด็อต -
streptavidin เป็นเวลา 30 นาที นิวเคลียสมี counterstained กับ Hoechst 33342
( โมเลกุลโพรบ ยูจีน หรือ ) ป้าย her2 ในเซลล์เพาะเลี้ยง
อยู่จ. , sk-br-3 เซลล์มีการล้างด้วย pbs เย็นบ่มราวกับ ( ใหม่ๆ )
5 in 1 H , 1.5 ไลแพะ anti -
IgG มนุษย์ ( เวกเตอร์ ) เป็นเวลา 30 นาที และ 40 nm ควอนตัมด็อต streptavidin 30 นาที
แอนติบอดีทั้งหมดและควอนตัมด็อต streptavidin ถูกเจือจาง ในช่อง บรรจุ 10 %
( น้ำหนัก / ปริมาตร ) บีเอสเอและทุกขั้นตอน ได้ดำเนินการใน 4 ติดป้ายเซลล์ถูกระงับใน 10 % ( น้ำหนัก / ปริมาตร ) และบีเอสเอ PBS หยดเซลล์แขวนลอยอยู่ใน
สไลด์แก้ว , ปกคลุมด้วยปิดสไลด์ ตรวจสอบ และ อื่นๆ ภายใต้กล้องจุลทรรศน์ทันที

ตรง