2.2. Molecular Marker Analysis. DNA

2.2. Molecular Marker Analysis. DNA was extracted from juvenile leaves of 2-week-old plants using a modified protocol as described by Zheng et al. (1995) [19]. PCR was performed in 10 μL reactions containing 5–25 ng of DNA template, 1 μL 10X TB buffer (containing 200mM Tris-HCl pH 8.3, 500mM KCl, 15mM MgCl2), 1 μL of 1mM dNTP, 0.50 μL each of 5μM forward and reverse primers,
and 0.25 μL of Taq DNA polymerase (4U/μL) using an MJ Research single or dual 96-well thermal cycler. After initial denaturation for 5 min at 94◦C, each cycle comprised 1min denaturation at 94◦C, 1min annealing at 55◦C, and 2 min extension at 72◦C with a final extension for 5min at 72◦C at the end of 35 cycles. The PCR products were mixed with bromophenol blue gel loading dye and were analyzed by electrophoresis on 8% polyacrylamide gel using mini vertical polyacrylamide gels for high throughput manual genotyping (CBS Scientific Co. Inc., CA, USA). The gels were stained in 0.5 mg/mL ethidium bromide and were documented using Alpha Imager 1220 (Alpha Innotech, CA, USA). Microsatellite or simple sequence repeat (SSR) markers was used for selection [20].

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.2. การวิเคราะห์เครื่องโมเลกุล ดีเอ็นเอที่สกัดจากใบเยาวชนของพืชอายุ 2 สัปดาห์โดยใช้โพรโทคอแก้ไขตามที่อธิบายไว้โดยเจิ้งและ al. (1995) [19] ทำ PCR ในปฏิกิริยา μL 10 ประกอบด้วย 5 – 25 ng ของดีเอ็นเอต้นแบบ 1 μL 10 X (ประกอบด้วย 200mM ทริสเรทติ้ง HCl pH 8.3, 500mM KCl, MgCl2 15 มม.), บัฟเฟอร์ TB μL 1 ของ dNTP มม. 1, 0.50 μL แต่ละของ 5μM ไปข้างหน้า และย้อนกลับไพรเมอร์และ μL 0.25 ของ Taq DNA พอลิเมอเรส (4U μL) โดยใช้การวิจัย MJ เดี่ยว หรือคู่ร้อนดี 96 cycler แต่ละวงจรประกอบด้วย denaturation 1 นาทีที่ 94◦C, 1 นาทีการอบเหนียวที่ 55◦C และภายใน 2 นาทีที่ 72◦C ขยายสุดท้ายสำหรับ 5 นาทีที่ 72◦C ที่สิ้นสุดของรอบ 35 หลัง denaturation เริ่มต้นใน 5 นาทีที่ 94◦C ผลิตภัณฑ์ PCR ถูกผสมกับเจล bromophenol บลูโหลดย้อม และถูกวิเคราะห์ โดย electrophoresis ในเจล polyacrylamide 8% ใช้มินิแนว polyacrylamide gels สำหรับอัตราความเร็วสูงด้วยตนเอง genotyping (CBS วิทยาศาสตร์ Co. Inc., CA, USA) เจมีสีในโบรไมด์ ethidium 0.5 mg/mL และได้จัดทำเอกสารใช้ 1220 ถ่ายภาพอัลฟา (Alpha Innotech, CA, USA) ชนิด Microsatellite หรือลำดับซ้ำเครื่องหมาย (SSR) ใช้สำหรับเลือก [20]

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.2 การวิเคราะห์โมเลกุลเครื่องหมาย ดีเอ็นเอที่สกัดจากใบของเด็กและเยาวชนของพืช 2 สัปดาห์เก่าโดยใช้โปรโตคอลการแก้ไขตามที่อธิบายไว้โดยเจิ้งเหอและคณะ (1995) [19] PCR ได้รับการดำเนินการใน 10 ไมโครลิตรปฏิกิริยาที่มี 5-25 ng ของดีเอ็นเอแม่แบบ, บัฟเฟอร์ 1 ไมโครลิตร 10X TB (ที่มี 200mm Tris-HCl pH 8.3 500mm KCl, 15 มม MgCl2) 1 ไมโครลิตร 1 มม dNTP, 0.50 ไมโครลิตรแต่ละ 5 ไมครอนไปข้างหน้าและ ย้อนกลับไพรเมอร์,
และ 0.25 ไมโครลิตรของ Taq DNA polymerase (4U / ไมโครลิตร) โดยใช้การวิจัย MJ เดียวหรือสอง 96 ดี Cycler ความร้อน หลังจากที่สูญเสียสภาพธรรมชาติเริ่มต้นเวลา 5 นาทีที่94◦Cวงจรประกอบด้วยแต่ละ denaturation 1min ที่94◦C, หลอม 1min ที่55◦Cและนามสกุล 2 นาทีที่72◦Cมีนามสกุลสุดท้ายสำหรับ 5 นาทีที่72◦Cในตอนท้ายของ 35 รอบ ผลิตภัณฑ์พีซีอาร์ได้รับการผสมกับ Bromophenol โหลดเจลสีฟ้าสีย้อมและนำมาวิเคราะห์โดย electrophoresis ในเจล polyacrylamide 8% โดยใช้มินิเจล polyacrylamide แนวตั้งสำหรับอัตราความเร็วสูง genotyping คู่มือ (ซีบีเอสทางวิทยาศาสตร์อิงค์ จำกัด , CA, USA) เจลมีการย้อมใน 0.5 mg / ml ethidium bromide และได้รับการบันทึกโดยใช้อัลฟา Imager 1220 (อัลฟา Innotech, CA, USA) ไมโครหรือทำซ้ำลำดับง่าย (SSR) เครื่องหมายถูกนำมาใช้สำหรับการเลือก [20]

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.2 . การวิเคราะห์เครื่องหมายโมเลกุล ดีเอ็นเอที่สกัดจากใบของพืชในส 2-week-old ใช้แก้ไขพิธีสารตามที่อธิบายไว้โดยเจิ้ง et al . ( 1995 ) [ 19 ] เทคนิคในการปฏิบัติ 10 μ L ปฏิกิริยาที่มี 5 – 25 นาโนแม่แบบดีเอ็นเอ 1 μผม 10x ) บัฟเฟอร์ ( 200mm ซึ่งประกอบด้วยกรดไฮโดรคลอริก pH 8.3 500mm KCl 15mm MgCl2 ) 1 μ L 1 มิลลิเมตร dntp 0.50 μลิตรละ 5 μ M ไปข้างหน้าและย้อนกลับและไพรเมอร์ ,
025 μ L ของดีเอ็นเอพอลิเมอเรส ทัค ( 4U / μ L ) โดยใช้การวิจัยแบบเดียวหรือสอง 96 ดีความร้อนรอบ . หลังจากที่เริ่มต้นการหยุดชั่วคราวสำหรับ 5 นาทีที่ 94 ◦ C แต่ละวงจรประกอบด้วย ( 1 นาทีที่ 94 ◦ C เสียอบอ่อนที่อุณหภูมิ 55 ◦ C และ 2 นาทีที่ 72 ◦ส่วนขยาย C กับส่วนขยายสุดท้ายสำหรับ 5 นาทีที่ 72 ◦ C ที่จบ 3 รอบผลิตภัณฑ์ทั้งหมดจะถูกผสมกับโบรโมฟีนอลบลูเจลโหลดสีและวิเคราะห์โดยวิธีอิเล็กโทรโฟรีซีสบนโพลีอะคริลาไมด์เจลอะคริลาไมด์เจลขนาดเล็กแนวตั้ง 8 % ใช้คู่มือส่งเสริมการส่งผ่านสูงทางวิทยาศาสตร์ Co . Inc . , CA , USA ) เจลใช้ย้อมใน 0.5 mg / ml และเอกสารการใช้โบรไมด์คู่อัลฟ่า ( Alpha ) 1220 Innotech , CA , USA )ใช้หรือทำซ้ำลำดับง่าย ( SSR ) เครื่องหมายที่ใช้สำหรับการเลือก [ 20 ]