2.2. DNA extractionDNA was extracte

2.2. DNA extraction
DNA was extracted using the Wizard method with minor modifications as described by Mafra, Silva, Moreira, Ferreira da Silva, and Oliveira (2008). Briefly, 100 mg of grounded and homogenised sample was transferred to a 2 mL sterile reaction tube followed by the addition of 860 μL of TNE extraction buffer (10 mmol L− 1 Tris, 150 mmol L− 1 NaCl, 2 mmol L− 1 EDTA, 1% SDS), 100 μL of 5 mol L− 1 guanidine hydrochloride solution and 40 μL of proteinase K solution (20 mg mL− 1). After the incubation at 60 °C for 3 h, with occasional stirring, the suspension was centrifuged (15 min, 18,514 g) and 500 μL of the supernatant were mixed with 1 mL of Wizard DNA purification resin (Promega, Madison, WI, USA). The mixture was eluted through a column and the resin was washed with 2 mL of isopropanol solution (80%, v/v). After drying the column, the DNA was eluted by centrifugation (1 min, 10,000 g) with 100 μL of Tris-EDTA buffer (10 mmol L− 1 Tris, 1 mmol L− 1 EDTA) at 70 °C to a new reaction tube. The extractions were performed in duplicate assays for each binary mixture and sample.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.2. DNA สกัดดีเอ็นเอที่สกัดด้วยวิธีช่วยปรับเปลี่ยนเล็กน้อยตามที่อธิบายไว้ โดย Mafra, Silva, Moreira, Ferreira da Silva, Oliveira (2008) สั้น ๆ 100 มก.อย่างป่นเล็กน้อย และ homogenised ถูกถ่ายโอนไป 2 mL หลอดปฏิกิริยาฆ่าเชื้อตามแห่ง μL 860 สนอง TNE แยกบัฟเฟอร์ (10 mmol ตรี L− 1, 150 mmol NaCl L− 1, L− 1 EDTA, 2 mmol 1% SDS), μL 100 5 โมล L− 1 guanidine ไฮโดรคลอไรด์โซลูชันและ μL 40 โซลูชัน proteinase K (20 มิลลิกรัม mL− 1) หลังจากบ่มที่ 60 ° C สำหรับ 3 h กับกวนเป็นครั้งคราว การระงับได้ centrifuged (15 นาที 18,514 g) และ μL 500 ของ supernatant ถูกผสมกับ mL 1 ของตัวช่วยสร้าง DNA ฟอกยาง (Promega เมดิสัน WI สหรัฐอเมริกา) ส่วนผสมที่ eluted ผ่านคอลัมน์ และยางจะถูกล้าง ด้วย mL 2 โซลูชัน isopropanol (80%, v/v) หลังจากแห้งคอลัมน์ ดีเอ็นเอถูกจัด eluted โดย centrifugation (1 นาที 10000 กรัม) กับ μL 100 ทริสเรทติ้ง EDTA บัฟเฟอร์ (10 mmol ตรี L− 1, L− 1 EDTA 1 mmol) ที่ 70 ° C ถึงหลอดปฏิกิริยาใหม่ มีดำเนินการการสกัดใน assays ซ้ำสำหรับแต่ละฐานผสมและตัวอย่าง

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.2 สกัดดีเอ็นเอ
ดีเอ็นเอถูกสกัดโดยใช้ตัวช่วยสร้างวิธีการที่มีการปรับเปลี่ยนเล็กน้อยตามที่อธิบาย Mafra, ซิลวา Moreira, เฟร์ดาซิลวาและ Oliveira (2008) สั้น ๆ 100 มิลลิกรัมต่อสายดินและเข้ากันตัวอย่างถูกย้ายไปหลอดปฏิกิริยา 2 มิลลิลิตรผ่านการฆ่าเชื้อตามด้วยนอกเหนือจาก 860 ไมโครลิตรของ TNE บัฟเฟอร์สกัด (10 มิลลิโมล L- 1 Tris, 150 มิลลิโมล L- โซเดียมคลอไรด์ 1, 2 มิลลิโมล L- 1 EDTA , 1% SDS) 100 ไมโครลิตรจาก 5 โมลสารละลายไฮโดรคลอไร L- 1 guanidine และ 40 ไมโครลิตรของโปร K แก้ปัญหา (20 มิลลิกรัม ML- 1) หลังจากการบ่มที่ 60 ° C เป็นเวลา 3 ชั่วโมงมีเป็นบางครั้งจังหวะที่หมุนเหวี่ยง (15 นาที, 18,514 กรัม) และ 500 ไมโครลิตรของสารละลายที่ได้รับการผสมกับ 1 มิลลิลิตรของตัวช่วยสร้างดีเอ็นเอเรซินบริสุทธิ์ (Promega, Madison, WI, สหรัฐอเมริกา ) ส่วนผสมที่ถูกชะผ่านคอลัมน์และเรซินถูกล้างด้วย 2 มิลลิลิตรของการแก้ปัญหา isopropanol (80% v / v) หลังจากการอบแห้งคอลัมน์ดีเอ็นเอถูกชะโดยการหมุนเหวี่ยง (1 นาที, 10,000 กรัม) 100 ไมโครลิตรของบัฟเฟอร์ Tris-EDTA (10 มิลลิโมล L- 1 Tris, 1 มิลลิโมล L- 1 EDTA) ที่ 70 ° C ถึงหลอดปฏิกิริยาใหม่ . การสกัดสารที่ได้รับการดำเนินการในการตรวจซ้ำสำหรับแต่ละส่วนผสมไบนารีและตัวอย่าง

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.2 . การสกัดดีเอ็นเอ
ดีเอ็นเอโดยใช้ตัวช่วยสร้างการปรับเปลี่ยนเล็กน้อยด้วยวิธีตามที่อธิบายไว้โดยมาฟรา ซิลวา โมไรร่า , แฟร์ไรร่า ดา ซิลวา และ โอลิเวียร่า , ( 2008 ) สั้น 100 มิลลิกรัม ใน homogenised ตัวอย่างถูกส่งไป 2 ml หลอดฆ่าเชื้อปฏิกิริยาตามด้วยนอกเหนือจาก 860 μ L ของบัฟเฟอร์การสกัด tne ( 10 mmol l − 1 หรือ− 1 , 150 มิลลิโมล L NaCl 2 mmol l − 1 EDTA , 1% SDS )100 μ L 5 โมล L − 1 กัวนิดีน ไฮโดรคลอไรด์ โซลูชั่น และ 40 μ l k ( 20 มิลลิกรัมต่อมิลลิลิตร สารละลายโปรตีน− 1 ) หลังจากบ่มที่อุณหภูมิ 60 องศา C 3 H , กวนเป็นครั้งคราว , ระงับได้ระดับ ( 15 นาที 18514 กรัม และ 500 μ L ของที่นำผสม 1 มิลลิลิตรของพ่อมดดีเอ็นเอบริสุทธิ์เรซิน ( promega เมดิสัน , WI , USA )ตัวอย่างส่วนผสมผ่านคอลัมน์และล้างด้วยเรซิน 2 ml ของไอโซโพรพานอล โซลูชั่น ( 80 % v / v ) หลังจากคอลัมน์แห้ง ดีเอ็นเอตัวอย่างโดยการเหวี่ยงแยก ( 1 นาที , 10 , 000 กรัม ) กับ 100 μลิตรโดย EDTA บัฟเฟอร์ ( 10 mmol l − 1 ต่อ 1 มิลลิโมล L − 1 EDTA ) ที่ 70 องศา C เป็นหลอดปฏิกิริยาใหม่ ในการสกัดการใช้ซ้ำในแต่ละแบบผสมและตัวอย่าง