RAPD analysisDNA extraction and RAP

RAPD analysis
DNA extraction and RAPD amplification
Fresh young leaves of 4 J. multiflorum cultivars and outgroup plants were grounded in liquid nitrogen and the total genomic DNA was individually extracted using a modified CTAB protocol [13]. Two microliter of extracted DNA were added to 20 μl of PCR reaction mixture containing of 1X amplification buffer, 4.0 mM MgCl2, 0.2 mM of dNTPs, 1U of Taq DNA polymerase (Thermo Scientific, EU) and 0.4 μM RAPD primers (Operon Technologies, USA). The PCR amplification was performed using a DNA thermal cycler (AB Applied Biosystems, USA) with an initial denaturation of 95°C for 5 min, followed by 45 cycles of 95°C for 1 min, 36°C for 1 min, 72°C for 1 min and then followed by a final elongation of 72°C for 3 min. The PCR amplification products were separated on 1.5% agarose gel electrophoresis, stained with ethidium bromide and visualized under UV transilluminator. RAPD fragments were photographed by gel documentation system (InGenius 3, USA).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

การวิเคราะห์ RAPDสกัดดีเอ็นเอและอาร์เอพีดีขยายหนุ่มสดใบแดงเจ 4 พันธุ์ และ outgroup พืชถูกเหตุผลในไนโตรเจนเหลว และดีเอ็นเอออกรวมถูกแยกโดยใช้โพรโทคอ CTAB แก้ไข [13] แต่ละ ไมโครลิตรสองของดีเอ็นเอที่สกัดถูกเพิ่มไป 20 μl PCR ปฏิกิริยาผสมมี 1 X ขยายบัฟเฟอร์ 4.0 มม. MgCl2, 0.2 mM ของ dNTPs, 1U Taq DNA พอลิเมอเรส (วิทยาศาสตร์เทอร์โม EU) และ 0.4 ไมครอน RAPD ไพรเมอร์ (Operon เทคโนโลยี สหรัฐอเมริกา) กระบือที่ดำเนินการด้วยความร้อน cycler ดีเอ็นเอ (AB ใช้ศาสตร์เชิงชีวภาพ สหรัฐอเมริกา) แปรสภาพการเริ่มต้นที่ 95° C 5 นาที ตาม ด้วยรอบ 45 95 องศาเซลเซียส 1 นาที 1 นาที 36° C 72° C เป็นเวลา 1 นาทีแล้ว ตาม ด้วยการยืดตัว 72° C เป็นเวลา 3 นาทีสุดท้าย ขยายผลิตภัณฑ์ PCR จากกัน 1.5% agarose เจลอิ ย้อม ด้วยโบรไมด์ ethidium และแสดงเป็นภาพภายใต้ UV transilluminator ส่วนอาร์เอพีดีได้ถ่ายภาพ โดยระบบเอกสารเจล (InGenius 3 สหรัฐอเมริกา)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

อาร์เอพีวิเคราะห์
สกัดดีเอ็นเอและอาร์เอพีขยาย
ใบอ่อนสดของ 4 เจ multiflorum พันธุ์และพืช outgroup ถูกเหตุผลในไนโตรเจนเหลวและดีเอ็นเอทั้งหมดถูกสกัดเป็นรายบุคคลโดยใช้โปรโตคอล CTAB การแก้ไข [13] สองไมโครลิตรของ DNA ที่สกัดถูกเพิ่มถึง 20 ไมโครลิตรของ PCR ผสมปฏิกิริยาที่มีของบัฟเฟอร์ขยาย 1X, 4.0 มิลลิ MgCl2 0.2 มิลลิเมตร dNTPs, 1U ของ Taq DNA Polymerase (Thermo Scientific, EU) และ 0.4 ไมครอนไพรเมอร์อาร์เอพี (Operon Technologies ประเทศสหรัฐอเมริกา ) ขยาย PCR ได้ดำเนินการโดยใช้ Cycler ดีเอ็นเอความร้อน (AB Applied Biosystems, สหรัฐอเมริกา) กับ denaturation เริ่มต้นของ 95 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 5 นาทีตามด้วย 45 รอบจาก 95 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 1 นาที 36 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 1 นาที 72 ° C เป็นเวลา 1 นาทีแล้วตามด้วยการยืดตัวสุดท้ายของ 72 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 3 นาที ผลิตภัณฑ์ขยาย PCR ถูกแยกออก 1.5% agarose gel electrophoresis, ย้อมด้วย ethidium bromide และมองเห็นภายใต้ transilluminator รังสียูวี อาร์เอพีเศษถูกถ่ายภาพโดยระบบเอกสารเจล (ingenius 3, สหรัฐอเมริกา)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การวิเคราะห์ RAPDการสกัดดีเอ็นเออาร์เอพีดีและเพิ่มจำนวนใบอ่อนสดของ 4 กลุ่ม เจ. มัลติฟลอรั่มพันธุ์และพืชกักบริเวณในไนโตรเจนเหลวและดีเอ็นเอจีโนมทั้งหมดเป็นแบบสกัดที่ใช้แก้ไข ctab โปรโตคอล [ 13 ] 2 ไมโครลิตร สกัดดีเอ็นเอที่ถูกμ 20 ลิตรเพื่อตรวจหาส่วนผสมประกอบด้วย 1x ขยาย บัฟเฟอร์ , MgCl2 4.0 มม. , 0.2 มม. dntps วิด , ของดีเอ็นเอพอลิเมอเรส ทัค ( เทอร์โมวิทยาศาสตร์ , EU ) และ 0.4 μ M RAPD primers ( เทคโนโลยี โอเปอรอน สหรัฐอเมริกา ) การตรวจ DNA amplification คือการใช้ความร้อนรอบ ( ใช้ AB ซึ่ง , USA ) กับ ( เริ่มต้นที่ 95 องศา C เป็นเวลา 5 นาที ตามด้วย 45 รอบ 95 องศา C เป็นเวลา 1 นาที , 36 ° C เป็นเวลา 1 นาที 72 ° C เป็นเวลา 1 นาที แล้วตามด้วยยืดสุดท้ายของ 72 เมตร C เป็นเวลา 3 นาทีเพื่อขยายผลิตภัณฑ์แยกบน 1.5 % เจลอิเล็กเปื้อนทิเดียมโบรไมด์และมองเห็นภายใต้ UV transilluminator . ชิ้น RAPD ได้ถ่ายภาพด้วยระบบเอกสาร เจล ( ingenius 3 , USA )