The membrane is hybridised overnigh

The membrane is hybridised overnight at 42◦C in a
water bath with gentle agitation. The stringency of posthybridisation washes should be determined experimentally
for each particular probe. Membranes are washed sequentially, starting in 2 × SSC and 0.1% SDS three times for
10 minutes at room temperature, then twice for 15 minutes
at 65◦C. Membranes hybridised with homologous, long
(longer than 300 bp) probes will probably require stringent washing conditions (i.e., lower salt concentrations);
the salt concentration can be reduced by using 0.1 × SSC
and 0.1% SDS. High stringency washes can be omitted if the
membranes are judged to be washed sufficiently. This is determined by monitoring the membranes with a hand-held
Geiger-Muller counter (1 ¨ −5 counts per minute above background, depending on calibration of the monitor). Washed
membranes are left damp and wrapped in SaranTM wrap,
placed in an autoradiography cassette containing intensifying screens with X-ray film (HyperfilmTM) and exposed at
−70◦C, for between 12 hours and 5 days, depending on the
intensity of the signal.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

เมมเบรนมี hybridised ค้างคืนที่ 42◦C ในการห้องน้ำ ด้วยอาการกังวลต่อเบา ๆ ควรกำหนด stringency ของ posthybridisation washes experimentallyสำหรับแต่ละโพรบเฉพาะ เยื่อหุ้มจะล้างตามลำดับ เริ่มต้น 2 × SSC และ 0.1% SDS สามครั้งสำหรับ10 นาที ที่อุณหภูมิห้อง แล้วสองครั้ง ใน 15 นาทีที่ 65◦C สาร hybridised ด้วย homologous ยาว(ยาวกว่า 300 bp) คลิปปากตะเข้คงจะต้องมีเงื่อนไขเข้มงวดซักผ้า (เช่น ต่ำกว่าเกลือความเข้มข้น);สามารถลดความเข้มข้นเกลือ โดยใช้ 0.1 × SSCและ 0.1% SDS สามารถละเว้น washes stringency สูงถ้าการเยื่อหุ้มจะตัดสินควรล้างเพียงพอ นี้จะถูกกำหนด โดยการตรวจสอบเข้ากับการมือถือมูลเลอร์ Geiger counter (เลขจด 1 −5 นับต่อนาทีเหนือพื้นหลัง ขึ้นอยู่กับการปรับเทียบจอภาพ) เครื่องซักผ้าสารที่เหลือชื้น และตัดในการตัด SaranTMวางในเทป autoradiography ประกอบด้วยหน้าจอที่ทวีความรุนแรง ด้วยฟิล์มเอ็กซ์เรย์ (HyperfilmTM) และที่แสดง−70◦C ในระหว่างชั่วโมงที่ 12 และวันที่ 5 ขึ้นอยู่กับการความเข้มของสัญญาณ

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

เมมเบรนจะ hybridised
ค้างคืนที่42◦Cในอ่างน้ำที่มีการกวนอ่อนโยน ความเข้มงวดของการล้าง posthybridisation
ควรได้รับการพิจารณาการทดลองแต่ละสอบสวนโดยเฉพาะอย่างยิ่ง เยื่อจะถูกล้างตามลำดับเริ่มต้นใน 2 × SSC และ 0.1% SDS สามครั้งสำหรับ
10 นาทีที่อุณหภูมิห้องแล้วสองครั้งเป็นเวลา 15
นาทีที่65◦C เยื่อ hybridised ที่มีความคล้ายคลึงกันนาน
(นานกว่า 300 bp) ฟิวส์อาจจะต้องมีเงื่อนไขที่เข้มงวดซักผ้า (เช่นความเข้มข้นของเกลือที่ต่ำกว่า)
ความเข้มข้นของเกลือสามารถลดลงได้โดยใช้ 0.1 × SSC
และ 0.1% SDS
ล้างความเข้มงวดสูงสามารถละเว้นถ้าเยื่อจะตัดสินที่จะได้รับการล้างอย่างพอเพียง นี้จะถูกกำหนดโดยการตรวจสอบเยื่อที่มีมือถือเครื่องวัดกัมมันตภาพรังสี-มุลเลอร์ (1 ¨ -5 นับต่อนาทีพื้นหลังดังกล่าวข้างต้นขึ้นอยู่กับการสอบเทียบของจอภาพ)
ล้างเยื่อที่เหลือชื้นและห่อในห่อ SaranTM, วางไว้ในเทป autoradiography มีทวีความรุนแรงหน้าจอด้วยฟิล์มเอ็กซ์เรย์ (HyperfilmTM) และสัมผัสที่-70◦Cสำหรับระหว่างวันที่12 ชั่วโมงและ 5 วันทั้งนี้ขึ้นอยู่กับความเข้มของสัญญาณ.

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

เมมเบรนเป็น hybridised ค้างคืนที่ 42 ◦ C ใน
อาบน้ำกับอ่อนโยน เขย่า การ stringency ของ posthybridisation ชำระล้าง ควรพิจารณาหา
สำหรับแต่ละเฉพาะด้วย เมมเบรนจะถูกล้าง ตามลำดับ เริ่ม 2 × SSC และ 0.1% เป็นเวลา 3 รอบ
10 นาทีที่อุณหภูมิห้องแล้วสองครั้งสำหรับ 15 นาทีที่ 65 ◦ C +

hybridised กับโฮโมโลกัส ยาว( มากกว่า 300 BP ) จึงอาจจะต้องล้างเงื่อนไขที่เข้มงวด ( เช่น ลดความเข้มข้นของเกลือ ) ;
ความเข้มข้นเกลือสามารถลดลงได้โดยการใช้ 0.1 × SSC
และ 0.1% SDS . ล้าง stringency สูงสามารถถูกละเว้นถ้า
เมมเบรนจะตัดสินให้ต้องล้างอย่างเพียงพอ นี้จะถูกกำหนดโดยการตรวจสอบกับมือถือ
เมมเบรนไกเกอร์มูลเลอร์เคาน์เตอร์ ( 1 − 5 ครั้งต่อนาทีขึ้นไปตั้งพื้นหลังขึ้นอยู่กับการปรับแต่งของจอภาพ ) ล้าง
เยื่อเหลือชื้นและห่อในห่อ sarantm
วางไว้ในเก้าอี้รับแขก , เทปที่มีขึ้นหน้าจอกับฟิล์ม ( hyperfilmtm ) และสัมผัสที่
− 70 ◦ C ระหว่าง 12 ชั่วโมง 5 วัน ขึ้นอยู่กับ
ความเข้มของสัญญาณ