cDNA was synthesized using total RN

cDNA was synthesized using total RNA (500 ng) and a
High Capacity cDNA Reverse Transcriptase kit (ABI, Staley Road, Grand Island, New York, USA) according to the
manufacturer’s protocol. 2X RT master mixes were prepared on ice according to the manufacturer’s instructions.
The reaction mixture, containing 1X RT buffer, 8 mM dNTP
mix, 1X RT random primers and 1 L each of Multiscribe
reverse transcriptase and RNAs inhibitor in a total volume of 10 L, was mixed gently. RNA (10 L, 500 ng) was
added to 10 L of 2X RT master mix. The total volume of
the reaction mixture in the tube was 20 L. Briefly, the
tube was centrifuged and loaded on to a thermal cycler
(DNA Engine, M. J. Research, Minnesota, USA) programmed
for 10 min at 25
◦
C, 120 min at 37
◦
C and 5 min at 85
◦
C.
The amplification of genes was carried out in a real-time
PCR machine using SYBR green-based chemistry. The reaction mixture (20 L) was prepared containing 1X SYBR
green master mix, 0.5 M of both forward primers (FP)
and reverse primers (RP), and 1 L of cDNA. The -actin
gene was used as an internal control.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

cDNA ถูกสังเคราะห์โดยใช้อาร์เอ็นเอทั้งหมด (500 ฉบับ) และสูงผลิต cDNA ปเท kit (ABI, Staley ถนน แกรนด์ไอส์แลนด์ นิวยอร์ก สหรัฐอเมริกา) ตามโพรโทคอลของผู้ผลิต 2 X RT หลักผสมวจัดบนน้ำแข็งตามคำแนะนำของผู้ผลิตส่วนผสมของปฏิกิริยา 1 X RT บัฟเฟอร์ dNTP 8 มม.ที่ประกอบด้วยผสม 1 X RT ไพรเมอร์แบบสุ่มและราคาชิ้นละ 1 L ของ Multiscribeกลับ transcriptase และยับยั้ง RNAs เป็นปริมาณรวม 10 l ถูกผสมเบา ๆ อาร์เอ็นเอ (10 L, 500 ng) คือลง 10 L ของส่วนผสมหลัก X RT 2 ปริมาตรรวมของส่วนผสมของปฏิกิริยาในหลอดได้ 20 L. สั้น ๆ การหลอดผลิตภัณฑ์ และโหลดเข้ามายังเครื่อง cycler ความร้อน(เครื่อง ยนต์ดีเอ็นเอ วิจัย J. M. มินเนโซตา สหรัฐอเมริกา) ของโปรแกรม10 นาทีที่ 25◦C, 120 นาทีที่ 37◦C และ 5 นาทีที่ 85◦คขยายของยีนดำเนินการแบบเรียลไทม์เครื่อง PCR ที่ใช้เคมีสีเขียวตาม SYBR จัดเตรียม 1 X SYBR ที่ประกอบด้วยส่วนผสมของปฏิกิริยา (20 ลิตร)สีเขียวผสมหลัก 0.5 M ของไพรเมอร์ทั้งสองไปข้างหน้า (FP)และกลับไพรเมอร์ (RP), และ 1 L ของ cDNA -แอกตินมีใช้ยีนเป็นตัวควบคุมภายใน

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ยีนสังเคราะห์ใช้ RNA รวม (500 NG) และ
ความจุสูงชุดยีนย้อนกลับ Transcriptase (ABI ถนนสเตลีย์แกรนด์ไอส์แลนด์นิวยอร์ก, สหรัฐอเมริกา) ตาม
โปรโตคอลของผู้ผลิต 2X RT ผสมต้นแบบได้ถูกเตรียมไว้บนน้ำแข็งตามคำแนะนำของผู้ผลิต.
ผสมปฏิกิริยาที่มีบัฟเฟอร์ 1X RT, dNTP 8 มิล
ผสม 1X RT ไพรเมอร์แบบสุ่มและ 1 L แต่ละ Multiscribe
reverse transcriptase และ RNAs ยับยั้งในปริมาณรวมของ 10 ? L, ผสมเบา ๆ อาร์เอ็นเอ (10? L 500 NG) ถูก
เพิ่มเข้ามาใน 10 ลิตรผสมนาย 2X RT ปริมาณรวมของการ
ผสมปฏิกิริยาในหลอดเป็น 20 L ในเวลาสั้น ๆ ที่
หลอดถูกปั่นและโหลดไปยัง Cycler ความร้อน
(DNA เครื่องยนต์, MJ วิจัย, Minnesota, USA) โปรแกรม
เป็นเวลา 10 นาทีที่ 25
◦
C, 120 นาทีที่ 37
◦
ซีและ 5 นาทีที่ 85
◦
C.
ขยายของ ยีนที่ได้ดำเนินการในเวลาจริง
เครื่อง PCR โดยใช้สีเขียว SYBR ตามคุณสมบัติทางเคมี ปฏิกิริยาของสารผสม (20 ลิตร) ถูกจัดทำขึ้นมี 1X SYBR
ผสมต้นแบบสีเขียว 0.5? M ไพรเมอร์ของทั้งสองไปข้างหน้า (FP)
และย้อนกลับไพรเมอร์ (RP) และ 1 ลิตร cDNA หรือไม่ -actin
ยีนถูกใช้เป็นระบบการควบคุมภายใน

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การใช้ดีเอ็นเอสังเคราะห์อาร์เอ็นเอทั้งหมด ( 500 กรัม ) และความจุสูงชุดยีน reverse transcriptase ( ABI Staley ถนนเกาะแกรนด์ , นิวยอร์ก , สหรัฐอเมริกา ) ไปตามโปรโตคอลของผู้ผลิต 2x RT ปริญญาโทผสมเตรียมน้ำแข็งตามคำแนะนำของผู้ผลิตปฏิกิริยาผสม ประกอบด้วย 1 x 8 มม. dntp RT บัฟเฟอร์ผสม , 1x RT แบบสุ่มชนิด 1 ชั้น แต่ละ multiscribereverse transcriptase inhibitor RNAs ในและปริมาณรวมของ 10 ลิตร ผสมเบาๆ อาร์เอ็นเอ ( L , 500 นาโน 10 ) คือเพิ่ม 10 ล. + RT ต้นแบบผสม ปริมาณรวมของปฏิกิริยาในหลอดผสม 20 ลิตรสั้น ๆ ,ท่อไฟฟ้าและโหลดกับวงจรความร้อน( เครื่องยนต์ ดีเอ็นเอ เอ็มเจการวิจัย , Minnesota , USA ) โปรแกรม10 นาทีที่ 25◦120 นาทีที่ 37 องศาเซลเซียส◦5 นาทีที่ 85 องศาเซลเซียส◦C .การเพิ่มปริมาณของยีนที่ถูกหามออกในแบบเรียลไทม์เครื่อง PCR โดยใช้เคมี SYBR กรีนตาม ปฏิกิริยาผสม ( 20 ลิตร ) เตรียมบรรจุ 1x SYBRต้นแบบผสมสีเขียว , 0.5 เมตร ( FP ) ไพรเมอร์ทั้งสองไปข้างหน้าและ reverse primers ( RP ) และความยาวของยีน . - ทำแบบเดียวกันยีนที่ถูกใช้เป็นระบบควบคุมภายใน