LC/MS analysis and antibiotic assay

LC/MS analysis and antibiotic assays of the crude EtOAc extract (986 mg) showed potent bioactivity and displayed characteristic UV spectral data (123 nm and 234 nm). Subsequently, this extract was suspended in 1.5 mL of 20% aqueous MeOH and was fractionated using a reversed-phase C18 Sep-pak (10 g) column with a stepped gradient of MeOH/H2O elution. Seven fractions were collected starting at 20% MeOH with increments of 20% MeOH followed by a dichloromethane (CH2Cl2) and 0.1% TFA washes. LC-MS and antibiotic activity of the fractions indicated that the antimicrobial compounds were distributed in the 40% - 100% MeOH fractions with the highest concentration in 80% MeOH (306 mg). Subsequent fractionation was performed using a reversed-phase C18 Baker Bond (6 g) column and a stepwise elution gradient of MeOH/H2O starting with 60% MeOH. Fractions were collected according to the color of bands as they eluted from the column. A total of 14 fractions were collected and three fractions X-Z (70 mgs each) following 80% MeOH elution showed the most potent activity. These fractions were further purified by HPLC using a semiprep C18 column (Sun Fire; 10 x 250 mm, 5 μm) with a gradient mobile phase (20%-70% MeOH over 28 minutes). Active fractions obtained from this step were further fractionated using an analytical C18 column (Sun Fire; 4.6 x 150 mm, 3.5 μm) and a gradient mobile phase 30%-45% acetonitrile (ACN). This final fractionation process yielded 1-4 mg of each of 8 active compounds that were eventually identified as frigocyclinone derivatives.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

LC/MS วิเคราะห์และยาปฏิชีวนะ assays ของสารสกัด EtOAc ดิบ (986 มิลลิกรัม) แสดงให้เห็นว่ามีศักยภาพทางชีวภาพ และแสดงลักษณะ UV ข้อมูลสเปกตรัม (123 nm และ 234 nm) ในเวลาต่อมา สารสกัดนี้ถูกหยุดชั่วคราวใน 1.5 mL 20% ทานออควี และถูกแบ่งด้วยคอลัมน์ C18 Sep-ปาก (10 กรัม) ระยะกลับไล่เหยียบของ elution ทา นอ/H2O เศษเจ็ดได้รวบรวมราคาเริ่มต้นที่ 20% ทานอกับทีทานอตาม ด้วย dichloromethane (CH2Cl2) 20% และ 0.1% TFA ต่อผิวหน้า กิจกรรม LC MS และยาปฏิชีวนะของเศษส่วนที่ระบุว่า มีกระจายสารต้านจุลชีพในเศษทานอ 40% - 100% มีความเข้มข้นสูงสุด 80% ทานอ (306 มิลลิกรัม) ทำแยกส่วนต่อ ๆ ไปใช้ระยะกลับคอลัมน์ C18 กัรบอนด์ (6 กรัม) และไล่ stepwise elution ของทา นอ/H2O ด้วย 60% ทานอ ส่วนถูกเก็บรวบรวมตามสีของวงเป็นพวก eluted จากคอลัมน์ ถูกเก็บรวบรวมทั้งหมด 14 ส่วน และเศษส่วน 3 X-Z (70 mgs ละ) elution ทานอ 80% ต่อไปนี้แสดงให้เห็นว่ากิจกรรมที่มีศักยภาพมากที่สุด ส่วนเหล่านี้ได้เพิ่มเติมบริสุทธิ์ โดย HPLC ใช้คอลัมน์ C18 semiprep (ไฟดวงอาทิตย์ 10 x 250 mm, 5 μm) กับเฟสเคลื่อนที่ไล่ระดับสี (20% - 70% ทานอกว่า 28 นาที) ส่วนงานที่ได้รับจากขั้นตอนนี้ถูกแบ่งโดยใช้คอลัมน์ C18 ตัววิเคราะห์ (ไฟดวงอาทิตย์ 4.6 x 150 มม. 3.5 μm) เพิ่มเติม และเคลื่อนที่ไล่ระดับระยะ acetonitrile 30% - 45% (ACN) กระบวนการนี้แยกส่วนสุดท้ายผล mg 1-4 ของแต่ละสารที่ใช้งานอยู่ 8 ที่สุดระบุเป็นอนุพันธ์ frigocyclinone

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

LC / MS การวิเคราะห์และการวิเคราะห์ยาปฏิชีวนะของสารสกัดจาก EtOAc น้ำมันดิบ (986 มก.) แสดงให้เห็นว่าทางชีวภาพที่มีศักยภาพและแสดงข้อมูลสเปกตรัม UV ลักษณะ (123 นาโนเมตรและ 234 นาโนเมตร) ต่อจากนั้นสารสกัดนี้ถูกระงับใน 1.5 มิลลิลิตรเมธานอล 20% น้ำและ fractionated โดยใช้เฟสย้อนกลับ C18 ก.ย. ปาก (10 กรัม) คอลัมน์ที่มีการไล่ระดับสีก้าวของชะเมธานอล / H2O เซเว่นเศษส่วนที่ถูกเก็บรวบรวมเริ่มต้นที่ 20% เมธานอลที่มีการเพิ่มขึ้นของเมธานอล 20% ตามด้วยไดคลอโรมีเทน (CH2Cl2) และ 0.1% ล้าง TFA LC-MS และกิจกรรมปฏิชีวนะเศษส่วนชี้ให้เห็นว่าสารต้านจุลชีพถูกกระจายอยู่ใน 40% - 100% เศษส่วนเมธานอลมีความเข้มข้นสูงสุดใน 80% เมธานอล (306 มก.) แยกที่เกิดขึ้นภายหลังได้รับการดำเนินการโดยใช้เฟสย้อนกลับ C18 เบเกอร์ตราสารหนี้ (6 กรัม) คอลัมน์และลาดชะแบบขั้นตอนของเมธานอล / H2O เริ่มต้นด้วย 60% เมธานอล เศษส่วนที่ถูกเก็บรวบรวมตามสีของวงที่พวกเขาชะจากคอลัมน์ ทั้งหมด 14 เศษส่วนถูกเก็บรวบรวมและสามเศษส่วน XZ (70 มกแต่ละครั้ง) ดังต่อไปนี้ 80% ชะเมธานอลแสดงให้เห็นว่ากิจกรรมที่มีศักยภาพมากที่สุด เศษส่วนเหล่านี้ถูกให้บริสุทธิ์โดยวิธี HPLC โดยใช้คอลัมน์ C18 semiprep (Sun Fire; 10 x 250 มม, 5 ไมครอน) กับเฟสเคลื่อนที่ลาด (20% -70% เมธานอลกว่า 28 นาที) เศษส่วนที่ใช้งานได้รับจากขั้นตอนนี้ถูก fractionated เพิ่มเติมได้โดยใช้คอลัมน์วิเคราะห์ C18 (Sun Fire; 4.6 x 150 มม 3.5 ไมครอน) และเฟสเคลื่อนที่ไล่ระดับ 30% -45% acetonitrile (ACN) กระบวนการนี​​้แยกสุดท้ายยอมแพ้ 1-4 มิลลิกรัมของแต่ละ 8 สารประกอบที่ใช้งานที่ถูกระบุในที่สุดก็เป็นอนุพันธ์ frigocyclinone

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

LC / MS และตรวจวิเคราะห์ยาปฏิชีวนะของ etoac สกัด ( 986 มิลลิกรัม ) แสดงฤทธิ์แสดงศักยภาพและลักษณะ UV ข้อมูลสเปกตรัม ( 123 nm และ 234 nm ) จากแยกนี้ถูกระงับใน 1.5 มิลลิลิตร ปริมาณน้ำ 20 % และพบการใช้ reversed-phase c18 ก.ย. ปาก ( 10 กรัม ) คอลัมน์กับก้าวไล่ระดับของปริมาณ / H2O ใช้ .เจ็ด เศษส่วน จำนวนเริ่มต้นที่ 20 % ปริมาณกับเพิ่มปริมาณร้อยละ 20 ตามด้วยไดคลอโรมีเทน ( ch2cl2 ) และ 0.1 % ระดับล้าง . อินซูลินและกิจกรรมยาปฏิชีวนะของเศษส่วน พบว่าสารต้านจุลชีพกระจายอยู่ใน 40 % - 100 % ด้วยปริมาณของเศษส่วนสูงสุด 80% เมทิลแอลกอฮอล์ ( 306 มิลลิกรัม )ต่อมามีการปรับใช้ reversed-phase c18 เบเกอร์ บอนด์ ( 6 กรัม ) และคอลัมน์แบบไล่สี ( ปริมาณ / H2O เริ่มต้นด้วย 60% ปริมาณ . เศษส่วนจำนวนตามสีแถบของพวกเขาตัวอย่างจากคอลัมน์ ทั้งหมด 14 เศษส่วนและเศษส่วนจำนวนสาม XZ ( 70 มก. ในแต่ละ ) ตามปริมาณ 80 % ( มีกิจกรรมที่มีศักยภาพมากที่สุดเศษส่วนเหล่านี้เพิ่มเติมบริสุทธิ์โดย HPLC โดยใช้ semiprep คอลัมน์ C18 ไฟ อาทิตย์ 5 μ 10 x 250 มม. ) ด้วยการไล่ระดับสีเฟสเคลื่อนที่ ( 20 % - 70 % ปริมาณเกิน 30 นาที ) เศษส่วนปราดเปรียวที่ได้รับจากขั้นตอนนี้ได้โดยใช้การวิเคราะห์ลำดับคอลัมน์ C18 ไฟ ; Sun 4.6 x 150 มม. , 3.5 μ M ) และการไล่ระดับสีเฟสเคลื่อนที่ 30 - 45 % ไน ( ACN )สุดท้ายนี้ ( กระบวนการ ) 1-4 มิลลิกรัมของแต่ละ 8 สารประกอบที่ใช้งานอยู่ที่ในที่สุดก็ระบุว่าเป็น frigocyclinone สัญญาซื้อขายล่วงหน้า