Background: When conducting plant r

Background: When conducting plant research, the measurement of photosynthetic pigments can provide basic
information on the physiological status of a plant. High-pressure liquid chromatography (HPLC) is becoming widely
used for this purpose because it provides an accurate determination of a variety of photosynthetic pigments
simultaneously. This technique has a drawback compared with conventional spectroscopic techniques, however, in
that it is more prone to structural modification of pigments during extraction, thus potentially generating erroneous
results. During pigment extraction procedures with acetone or alcohol, the phytol side chain of chlorophyll is
sometimes removed, forming chlorophyllide, which affects chlorophyll measurement using HPLC.
Results: We evaluated the artifactual chlorophyllide production during chlorophyll extraction by comparing
different extraction methods with wild-type and mutant Arabidopsis leaves that lack the major isoform of
chlorophyllase. Several extraction methods were compared to provide alternatives to researchers who utilize HPLC
for the analysis of chlorophyll levels. As a result, the following three methods are recommended. In the first
method, leaves are briefly boiled prior to extraction. In the second method, grinding and homogenate of leaves
are performed at sub-zero temperatures. In the third method, N, N’-dimethylformamide (DMF) is used for the
extraction of pigments. When compared, the first two methods eliminated almost all chlorophyllide-forming activity
in Arabidopsis thaliana, Glebionis coronaria, Pisum sativum L. and Prunus sargentii Rehd. However, DMF effectively
suppressed the activity of chlorophyllase only in Arabidopsis leaves.
Conclusion: Chlorophyllide production in leaf extracts is predominantly an artifact. All three methods evaluated in
this study reduce the artifactual production of chlorophyllide and are thus suitable for pigment extraction for HPLC
analysis. The boiling method would be a practical choice when leaves are not too thick. However, it may convert a
small fraction of chlorophyll a into pheophytin a. Although extraction at sub-zero temperatures is suitable for all
plant species examined in this study, this method might be complicated for a large number of samples and it
requires liquid nitrogen and equipment for leaf grinding. Using DMF as an extractant is simple and suitable with
Arabidopsis samples. However, this solvent cannot completely block the formation of chlorophyllide in thicker
leaves.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

พื้นหลัง: เมื่อทำการวิจัยพืช การวัดสีสังเคราะห์แสงสามารถให้พื้นฐานข้อมูลเกี่ยวกับสถานะทางสรีรวิทยาของพืช แรงดันสูงของเหลว chromatography (HPLC) กำลังเป็นที่แพร่หลายใช้สำหรับวัตถุประสงค์นี้ เพราะมีความมุ่งมั่นที่ถูกต้องสังเคราะห์แสงสีที่หลากหลายพร้อมกันนี้ เทคนิคนี้มีการคืนเงินเมื่อเทียบกับเทคนิคทั่วไป อย่างไรก็ตาม ในว่ามันมีแนวโน้มที่จะปรับเปลี่ยนโครงสร้างของเม็ดสีในระหว่างการสกัด จึง อาจสร้างข้อผิดพลาดผลลัพธ์ที่ ในระหว่างกระบวนการแยกเม็ดสีด้วยอะซีโตนหรือแอลกอฮอล์ phytol โซ่ข้างของคลอโรฟิลอยู่บางครั้งเอา รูป chlorophyllide ซึ่งมีผลต่อการวัดคลอโรฟิลล์โดยใช้ HPLCผลลัพธ์: เราประเมินการผลิต artifactual chlorophyllide ระหว่างคลอโรฟิลล์สกัด โดยการเปรียบเทียบวิธีการแตกต่างกันสกัดแบบธรรมชาติและกลายพันธุ์ Arabidopsis ใบขาดว่า isoform สำคัญของchlorophyllase วิธีการสกัดหลายถูกเมื่อเทียบกับทางเลือกให้กับนักวิจัยที่ใช้ HPLCสำหรับการวิเคราะห์ระดับคลอโรฟิล เป็นผล แนะนำวิธีการสามวิธีต่อไปนี้ ในครั้งแรกวิธี ใบสั้น ๆ ต้มก่อนสกัด ในสองวิธี บด และ homogenate ของใบดำเนินการที่ศูนย์ย่อยอุณหภูมิ ในวิธีที่สาม N, N'-dimethylformamide (DMF) ที่ใช้สำหรับการการสกัดสี เมื่อเปรียบเทียบ สองวิธีแรกกำจัดกิจกรรม chlorophyllide ขึ้นรูปเกือบทั้งหมดใน Arabidopsis thaliana, Glebionis coronaria ลันเตา L. และ Prunus sargentii Rehd อย่างไรก็ตาม DMF มีประสิทธิภาพยับยั้งกิจกรรมของ chlorophyllase ใน Arabidopsis ใบเท่านั้นสรุป: การผลิต Chlorophyllide ในสารสกัดจะเป็นวัตถุโบราณ ทั้งสามวิธีในการประเมินการศึกษานี้ลดการผลิต chlorophyllide artifactual และดังนั้นจึงเหมาะสำหรับสกัดรงควัตถุสำหรับ HPLCการวิเคราะห์ วิธีการต้มจะเป็นความประทับใจเมื่อใบไม่หนาเกินไป อย่างไรก็ตาม อาจแปลงเป็นส่วนเล็ก ๆ ของคลอโรฟิลเป็น pheophytin ใน แม้ว่าการดูดที่ศูนย์ย่อยอุณหภูมิเหมาะสมสำหรับทั้งหมดชนิดพืชที่ตรวจสอบในการศึกษานี้ วิธีการนี้อาจจะซับซ้อนสำหรับจำนวนมากของตัวอย่างและต้องการไนโตรเจนเหลวและอุปกรณ์สำหรับบดใบ DMF เป็นการสกัดได้ง่าย และเหมาะสมกับตัวอย่าง Arabidopsis อย่างไรก็ตาม ตัวทำละลายนี้ไม่สามารถจะบล็อกการก่อตัวของ chlorophyllide ในหนาใบไม้

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

พื้นหลัง: เมื่อการดำเนินการวิจัยพืชวัดการสังเคราะห์แสงของเม็ดสีสามารถให้พื้นฐาน
ข้อมูลเกี่ยวกับสถานะทางสรีรวิทยาของพืช ความดันสูงของเหลว chromatography (HPLC) จะกลายเป็นอย่างกว้างขวาง
ใช้เพื่อวัตถุประสงค์นี้เพราะมันยังมีความมุ่งมั่นที่ถูกต้องของความหลากหลายของเม็ดสีสังเคราะห์
พร้อมกัน เทคนิคนี้มีข้อเสียเปรียบเมื่อเทียบกับเทคนิคสเปกโทรสโกธรรมดาอย่างไรก็ตามใน
ว่ามันมีแนวโน้มที่จะปรับเปลี่ยนโครงสร้างของเม็ดสีในระหว่างการสกัดจึงอาจมีข้อผิดพลาดในการสร้าง
ผล ในระหว่างขั้นตอนการสกัดสีด้วยอะซิโตนหรือเครื่องดื่มแอลกอฮอล์, ห่วงโซ่ด้าน phytol ของคลอโรฟิลเป็น
บางครั้งเอาออกไว้ chlorophyllide ซึ่งมีผลต่อการวัดคลอโรฟิลโดยใช้วิธี HPLC.
ผล: เราประเมินการผลิต chlorophyllide artifactual ระหว่างการสกัดคลอโรฟิลโดยการเปรียบเทียบ
วิธีการสกัดที่แตกต่างกับชนิดป่าและ ใบ Arabidopsis กลายพันธุ์ที่ขาดไอโซฟอร์มที่สำคัญของ
chlorophyllase วิธีการสกัดหลายคนเมื่อเทียบกับทางเลือกให้กับนักวิจัยที่ใช้ HPLC
สำหรับการวิเคราะห์ระดับคลอโรฟิล เป็นผลให้ต่อไปนี้สามวิธีที่แนะนำ ในครั้งแรก
วิธีการต้มใบจะสั้น ๆ ก่อนที่จะมีการสกัด ในวิธีการที่สองบดและ homogenate ของใบ
จะดำเนินการที่อุณหภูมิ Sub-Zero ในวิธีที่สาม, N, N'-Dimethylformamide (DMF) จะใช้สำหรับ
การสกัดของเม็ดสี เมื่อเปรียบเทียบทั้งสองวิธีแรกที่ตัดออกเกือบทั้งหมด chlorophyllide ขึ้นรูปกิจกรรม
ใน Arabidopsis thaliana, ตั้งโอ๋, pisum sativum L. และ Prunus Rehd sargentii อย่างไรก็ตามกรมเชื้อเพลิงธรรมชาติได้อย่างมีประสิทธิภาพ
ระงับกิจกรรมของ chlorophyllase เฉพาะในใบ Arabidopsis.
สรุป: การผลิต Chlorophyllide ในสารสกัดจากใบเป็นส่วนใหญ่สิ่งประดิษฐ์ ทั้งสามวิธีการประเมินใน
การศึกษาครั้งนี้ช่วยลดการผลิตของ artifactual chlorophyllide และจึงเหมาะสำหรับการสกัดเม็ดสีสำหรับ HPLC
วิเคราะห์ วิธีการต้มจะเป็นทางเลือกในทางปฏิบัติเมื่อใบมีไม่หนาเกินไป แต่อาจแปลง
เศษเล็ก ๆ ของคลอโรฟิลลง pheophytin แม้ว่าการสกัดที่อุณหภูมิ Sub-Zero เหมาะสำหรับทุก
สายพันธุ์พืชที่ตรวจสอบในการศึกษาครั้งนี้ใช้วิธีการนี้อาจจะมีความซับซ้อนสำหรับจำนวนมากของกลุ่มตัวอย่างและมัน
ต้องใช้ไนโตรเจนเหลวและอุปกรณ์สำหรับการบดใบ ใช้ DMF เป็นสารสกัดที่ง่ายและเหมาะกับ
ตัวอย่าง Arabidopsis แต่ตัวทำละลายนี้จะไม่สามารถสมบูรณ์ป้องกันการก่อตัวของ chlorophyllide ในหนา
ใบ